一种检测动物组织中β肾上腺素受体激动剂类药物的方法与流程

本发明属于动物组织瘦肉精检测技术领域，具体涉及一种使用解吸电喷雾电离质谱技术检测动物组织中β肾上腺素受体激动剂类药物的方法。

背景技术：

沙丁胺醇、特布他林、班布特罗、克伦特罗等属于β肾上腺素受体激动剂类药物，兽医学和医学上用于治疗支气管痉挛和休克。研究表明该类药物具有促进动物蛋白质堆积和肌肉生长的作用。但是过量使用使得药物在家畜动物组织中积累，食用该类动物组织对人体健康产生危害，国家对β肾上腺素受体激动剂类药物在家畜组织中的残留进行严格的控制。因此对动物组织中β肾上腺素受体激动剂类药物的检测尤为重要。

动物组织中的β肾上腺素受体激动剂类药物残留检测经常使用液质联用技术方法。使用传统液质联用方法对β肾上腺素受体激动剂类药物进行分析时需要对组织样品进行前处理，步骤复杂，且因对组织进行处理无法得到药物分子在组织中的空间分布信息。解吸电喷雾电离质谱技术属于在大气压下进行离子化的技术，对于样品要求不高，无需复杂的前处理和预分离，可对样品进行快速分析。此外，解吸电喷雾电离质谱技术还可以得到目标离子在组织中的空间分布信息。

技术实现要素：

为了克服现有的技术中存在的缺点和不足之处，本发明的首要目的在于提供一种使用解吸电喷雾电离质谱技术检测动物组织中β肾上腺素受体激动剂类药物的方法；该方法操作简便，可快速发现动物组织中的β肾上腺素受体激动剂类药物，并实现对组织样品中β肾上腺素受体激动剂类药物进行空间分布检测。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种检测动物组织中β肾上腺素受体激动剂类药物的方法，包括以下操作步骤：

a、取动物组织做成组织冰冻切片；

b、取动物组织，加入生理盐水进行匀浆；

c、使用生理盐水将β肾上腺素受体激动剂类药物配成多个不同浓度梯度的药液；

d、取等体积的步骤c所得药液和步骤b所得匀浆，混成标准品；

e、将组织冰冻切片和不同浓度梯度的标准品置于载玻片上，干燥；

f、使用解吸电喷雾电离质谱技术进行扫描检测，对成像结果进行分析，得到动物组织中β肾上腺素受体激动剂类药物的相对浓度及空间分布结果。

所述β肾上腺素受体激动剂类药物包括班布特罗、沙丁胺醇、特布他林和克伦特罗中的一种以上。

所述解吸电喷雾电离质谱技术是采用waterssynaptg2-si质谱配备解吸电喷雾电离离子源。

所述解吸电喷雾电离质谱技术进行检测的溶剂包括体积比为95：5的甲醇和水，另外添加体积分数1‰的甲酸，含或者不含内标。

所述解吸电喷雾电离质谱技术进行检测的方法为正离子模式，喷雾毛细管电压为4.5kv，样品锥孔电压为60v，离子源温度为100℃，溶剂流速为2μl/min。

步骤f所述对成像结果进行分析是按照以下步骤：将检测数据利用成像软件处理；根据所要检测的β肾上腺素受体激动剂的分子离子峰在成像结果中寻找目标分子，判断依据为在标准品区域，信号响应强度随浓度的升高而增强；之后将检测结果与原始切片进行叠加，得到动物组织中β肾上腺素受体激动剂类药物的相对浓度及空间分布结果。所述成像软件是指waters公司的hdi软件。

本发明相对于现有技术，具有如下的优点及有益效果：

本发明使用解吸电喷雾电离质谱技术检测动物组织中β肾上腺素受体激动剂类药物，实现了对组织样品中β肾上腺素受体激动剂类药物进行空间分布检测；本发明中使用的组织样本无需进行复杂的样品前处理过程，极大降低了样品前处理的成本，缩短了样品前处理的时间；本发明的方法因没有样品前处理过程，避免了因处理样品造成的信息丢失；本发明的方法是直接对组织样本进行原位电离检测，没有任何提取分离过程，最大程度保留了β肾上腺素受体激动剂类药物在组织中的空间分部信息；本发明的方法设置了不同浓度梯度的标准品，除获得药物在组织中的空间分部信息外，还可同时获得相对浓度信息，达到定量的目的。

附图说明

图1为本发明方法示意图。

图2为大鼠组织切片和标准品摆放示意图。

图3为大鼠组织切片及标准品解吸电喷雾电离质谱扫描结果。

图4为班布特罗在大鼠组织切片中的分布图。

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

本发明方法的流程示意图如图1所示，包括取动物组织样品→制备待测样品(包括组织冰冻切片和标准品制备)→解吸电喷雾电离质谱检测→成像结果分析。

实施例1：检测大鼠组织中的班布特罗：

仪器：高分辨质谱仪synaptg2-si(waters公司)配备解吸电喷雾电离离子源(waters公司)。

样品处理：大鼠体重称量，水合氯醛麻醉(150mg/ml,0.2ml/100g)；将大鼠分为三组：15min,30min和45min组。给予班布特罗15min,30min和45min后分别对大鼠进行全身灌流，取组织，之后对组织样品进行冰冻切片，置于载玻片上。

标准品制备：另取一只空白大鼠组织，称量组织重量，加入1倍体积的生理盐水研磨；将班布特罗用生理盐水配成20μg/ml，2μg/ml，200ng/ml及20ng/ml的药液；取50μl组织匀浆分别置于5个ep管里，再分别加入50μl不同浓度的药液和生理盐水，之后分别取出2.5μl涂抹于含有组织切片的玻片上，晾干，等待检测(样品摆放如图2所示)。

测定方法：正离子模式，喷雾毛细管电压为4.5kv、样品锥孔电压为60v，离子源温度为100℃，溶剂为体积分数95％的甲醇和体积分数5％的水，另外添加体积分数1‰的甲酸，且含有内标亮氨酸脑啡肽，流速为2μl/min。

结果：班布特罗可用正离子模式检测，加氢准确分子量是368.2180。对于大鼠组织切片，如图3所示，发现368.2180分子在标准品区域呈规律性变化(红色方框处)，10μg/ml的标准品浓度最高，响应也最强，为紫色，随着浓度的下降，信号响应强度也逐渐变弱，说明该分子为班布特罗。

将原始切片与368.2180分子的结果图叠加，如图4所示，发现在3个时间点的组织切片中都有班布特罗存在，班布特罗主要分布在组织切片边缘和中间部分，30min的组织切片中班布特罗量最多

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：

技术总结
本发明属于动物组织瘦肉精检测技术领域，公开了一种检测动物组织中β肾上腺素受体激动剂类药物的方法。该方法操作简便，可快速发现动物组织中的β肾上腺素受体激动剂类药物，并实现对组织样品中β肾上腺素受体激动剂类药物进行空间分布检测。该方法包括取动物组织样品→制备待测样品(包括组织冰冻切片和标准品制备)→解吸电喷雾电离质谱检测→成像结果分析。

技术研发人员：武杰;张睿;谭文
受保护的技术使用者：广东工业大学
技术研发日：2019.04.15
技术公布日：2019.08.23