具有多层检验区的诊断检查载体和将它用于测定被分析物的方法

专利名称：：具有多层检验区的诊断检查载体和将它用于测定被分析物的方法
技术领域：
：本发明涉及使用包含在所述检查载体内的试剂体系来测定全血中被分析物的诊断检查载体，该检查载体包括显色剂及由供加入血样的点样面和检测面组成的试验区，在检测面上发生由所述分析物与所述试剂体系反应导致的光学上可检测的变化，其设计形式应使得样品中的红血球不扩展到该检测面。另外，本发明涉及借助根据本发明的诊断检查载体来测定全血中被分析物的方法。所谓结合载体试验经常用于体液成分，尤其是血液成分的定性或定量分析。其中，所述试剂保存在与样品接触的检查载体的适当层中。所述液体样品与试剂的反应产生可检测的变化，尤其是色泽变化，该变化为肉眼可见的或用仪器(常用反射光度计)可检测得到的。上述检查载体通常为条状检查载体，它是主要由塑料制成的细长支承层和粘贴在其上的包括一个或多个检测层的试验区所组成。但是，也已知形状为小的方形或长方形薄片的检查载体。结合载体试验尤其显示其易操作的特点。但是，非常令人遗憾，在大多数公知的检查载体中，液体血液样品不能直接使用全血形式。从另一观点来说，需要分离红细胞(红血球)以便得到无色血浆即血清。这通常要用离心过程来完成。但是，这增加了处理步骤，需较大量的血液和复杂的仪器。所以，已做了许多偿试以便提供能直接分析全血的检查载体。人们能区分这两种根本不同的方法。在第一种方法中，在放所述试样的试验区的同一面上，目视或用仪器来检测色泽变化。在该情况下，所述试验区的结构可以保证所述试样中的被分析物与透过该试验区表面的试剂接触，而红血球被除去。一定时间后，擦或洗去试验区表面的血液样品，观察色泽变化。这类检查载体的实施例公开于美国专利US-A-3630957和欧洲专利EP-A-0217246中。在第二种方法中，试样放在所述试验区的一个面(点样面)上，而从另一面(检测面)测量色泽变化。该法的主要优点是不必擦或洗去血样。所以，这类检查载体也称作免擦检查载体。省去擦洗，不仅去掉一个冗长的处理步骤，而且也杜绝可能的失误来源，即当应该擦去血样时，它却不是正好粘附着，而出现失误。另一方面，本方法做起来非常困难。一方面要求红血球过滤器能可靠地滤除血液中深色成分，而另一方面又能使被分析物尽可能全部和迅速地滤过。已证实寻找能满足以上要求的试验区结构是极为困难的。从EP-A-0045476中得知，玻璃纤维用于检查载体中分离血清或血浆。该方法可以普遍使用，但是需要用适当方式将所述玻璃纤维层固定到检查载体上。这使所述检查载体的结构变得更复杂，而且其制备方法也困难。此外，玻璃纤维层吸收液体，吸收的这部分液体不能为检测层所利用。这意味着需要较多样品量。在EP-A-0302287号中介绍的试验区具有层状结构，它是通过使含显色剂的检测层在面向点样面的基层上液体成层(liquidlayering)而得。所述基层包含聚合膜形成剂、硅藻土和颜料。所述检测层包含聚合膜形成剂，它在该液体涂布过程中部分渗入所述基层中，形成过渡区，使红血球留在过渡区中。正如从其实施例中可见的，该含颜料层仍比所述检测层厚多达十倍。这对该试验区的体积要求有相当大的影响。因为只有在所述含颜料层和所述检测层之间的过渡区域用作红血球保留区，在所述检测层用液体填充前，所述包含颜料层的较大体积不得不用液体填充。因为目前还没有一种包括红血球分离过程的NW检查载体装置具有各方面令人满意的性质，所以，在市售的这类检查载体装置中完全省去分离红血球过程，由其显深红色作用引起的干扰可以通过在两个不同波长下的测定技术来抵消。这使仪器测定变得相当复杂，色泽变化不能靠目测来判断。本发明的目的是提供能容易地制备并用来容易和快速地测定全血中被分析物的检查载体。该测定过程只要求尽可能最小量的血样，此外不依靠分血器。一种简单的测定方法应该包括用目测能估计被分析物浓度。该目的是通过在权利要求书中详细表述了特征的本发明而实现。本发明的内容包括利用包含在检查载体中的试剂体系(包括显色剂)测定全血中的被分析物的诊断检查载体。该检查载体包含一个试验区，所述试验区有一个供加血样的点样面，此外，在点样面上有检测面，从检测面上观测到由于被分析物与所述试剂体系的反应导致的光学上的变化。血液中的红血球不扩展到上述检测面。根据本发明，所述试验区包括一个透明薄片，其上分别为第一薄膜层和第二薄膜层。所述在透明薄片上的第一层散射光作用要比覆盖在它上面的第二层散射光作用弱得多。该透明薄片的无涂层面称作检测面而第二层与第一层接触面的相反面称作点样面。此外，本发明涉及利用根据本发明的诊断检查载体，测定全血中被分析物的方法。因为所术血样是加到上述试验区的点样面上并从检测面观察色泽变化的，所以，产生的色强度反映出所测试血样中被分析物含量。所述根据本发明的诊断检查载体的薄膜层是由分散相或乳化相聚合物成膜剂制备的。分散相成膜剂包含不溶于载体液体(通常为水)并高度分散于载体液体中的显微聚合物粒子。如果在形成薄膜过程中蒸发去掉上述液体，所述粒子越靠越近，最终彼此接触。存在于该过程中大的作用力和伴随膜形成过程表面能的增加使所述粒子成长成为非常密实的薄膜层。另外，也可能使用溶于溶剂中乳化相的成膜剂。所述溶解的聚合物在与上述溶剂不混溶的载体液体中被乳化。聚乙烯酯、聚乙酸乙烯酯、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸、聚乙烯酰胺、聚酰胺和聚苯乙烯特别适合作为上述成膜剂聚合物。除均聚物外，还包括混合聚合产物，例如丁二烯、苯乙烯或马来酸酯的混合聚合产物。在本发明诊断检查载体的试验区中，使上述两个薄膜层置于透明薄片上。因而，考虑使虑用不透过液体的塑料薄片。已证实聚碳酸酯薄片特别适合。上述两种薄膜层可以由含相同聚合物成膜剂涂层化合物制备或由含不同聚合膜形成剂的涂层化合物制备。尽管第一层包含溶胀剂和可选的弱光散射填料，但是第二层要求溶胀剂和总之至少一种能强散射光的颜料。此外，第二层也可以包含少量不渗透红血球的无孔填料以及多孔填料，例如硅藻土。颜料与硅藻土的重量比应该至少为2∶1。通过加入溶胀良好的溶胀剂(即当吸收水分后使体积增加的物质)，不仅可以得到能相对迅速地渗透试样液体的上述薄膜层，而且，尽管所述溶胀剂具有成孔的作用，仍具有使红血球，也包括血色素很好分离的性能。所述溶胀性能如此优越，以致对于显色速度主要决定于试样液体通过薄膜层渗透性的试验(例如像葡萄糖显色反应)而言，最多一分钟后，就可以观测到反应的色泽变化。已证实特别合适的溶胀剂包括甲基乙烯基醚马来酸酐共聚物、合成生物聚合胶和甲基乙烯基醚马来酸共聚物。Kieselguhr也代表硅藻土。它们是从各地开采的，由不同硅藻类型的硅酸为主要成分形成的沉淀物。优选使用的硅藻土(Kieselguhr)的平均粒径为5-15μm，该值是用715型激光粒度计测定的(购自PabischCompany，Munich，Germany)。在第二层中强散射光颜料的含量为相对所述试验区干燥的即时可用双层重量的至少25％(重量)。因为弱散射光填料和强散射光颜料对于所述薄膜层的视觉性而言都是必需的，所以，第一薄膜层和第二薄膜层包含不同的填料和颜料。第一薄膜层应该不包含填料或者包含折光率与水的折光率接近的填料。二氧化硅、硅酸盐和硅酸铝已证明是特别合适的此类填料。特别优选商品名Traspafill的硅酸铝钠。其平均组成为66％(重量)SiO2、26％(重量)Al2O3、7％(重量)Na2O和1％(重量)SO3。优选初级粒子的平均粒径约为0.06μm。根据本发明，第二层应该非常强地散射光。在第二薄膜层中颜料的理想的折光率应该至少为2.5。因此，优选使用二氧化钛。已证实平均直径约为0.2-0.8μm的粒子为佳。在分析物改进设备中优选易加工的二氧化钛类型。通过显色来检测特定分析物的试剂体系对于技术熟练人员来说是公知的。所述试剂体系的所有成分可能存在于一个薄膜层中。但是，溶剂体系的成分也可能分配在两个薄膜层中。所述显色试剂体系优选至少部分存在于第一薄膜层中。本发明范围内颜色的产生不仅理解为由无色转变为有色，而且可以理解为在色泽上的任何变化，特别是指与最大吸收波长(λmax)下最大位移有关的颜色变化过程。为了选择根据本发明诊断检查载体中试验区的最佳条件，已证实两薄膜层都包含不引起血细胞溶解的润湿剂。特别优选的这类润湿剂是中性的即不带电荷的润湿剂。最优选N-辛基-N-甲基葡糖酰胺。为了制备根据本发明诊断检查载体的试验区，利用均匀分散相的所述成分逐次制备每个相应的薄膜层。如此，使用所述透明薄片作为基底以便形成作为第一薄膜层的涂层化合物。在使作为第一薄膜层的涂层化合物按特定层厚度涂布后，干燥该涂层。此后，使作为第二层的涂层化合物也按照薄层厚度涂布到第一薄膜层上并干燥。干燥后，第一薄膜层和第二薄膜层加到一起的厚度不超过0.20mm，优选不超过0.12mm，特别优选不超过0.08mm。所述干燥的第二薄膜层优选比第一层厚约2-5倍。按上述方法制备的试验区可以固定在支承层以便于加工，那些不吸收待测液体的材料可以考虑用作该支承层。所谓不吸收材料包括例如由聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚酯、聚碳酸酯或优选聚酰胺制成的塑料薄片。但是，也可能用防水剂浸透吸收材料例如木材、纸张、或纸板或用防水膜涂层，在这种情况下，硅氧烷或硬化脂可以用作疏水剂而硝基纤维素或纤维素乙酸酯可以用作成膜剂。金属薄片或玻璃也适合作为支承材料。为了测定试样液体中待分析物(尽管在本发明中首先指全血，来自血液的其它样品例如血浆或血清，也包括其它水溶性液体当然也可以检测)，需要在根据本发明检查载体中，用于观测色泽形成过程的所述试验区的检测面应该是透过所述支承层可见的。但是，也可能在所述支承层上留有钻孔，并用试验区检测面覆盖。透过钻孔检测面是可见的。在根据本发明诊断检查载体的优选实施例中，在所述试验区检测面下面的支承层中有一个孔，通过该孔，可以观察到试验区的检测面。所述小孔的直径比实验区最小的线尺度还要略小，因而，小孔外试验区放在所述支承层上并能吸附在上面。由于试验区的结构，尤其是两个薄膜层不允许红血球透过到检测面，因而只需要非常少量样品来检测被分析物。当试验区大小为5×6mm时，例如3μl全血便中以检测出其中的葡萄糖。为了在使用约15-20μl的更大样品量情况下仍能正常工作及为了避免样品液体渗漏，已证实把所述试验区加入根据本发明诊断检查载体中特别合适，其中该检查载体包含一个可以在其上配置试验区的支承层，所述试验区用比其更大的网格覆盖，该网格附着在除试验区以外的支承层上。这样一种根据本发明特别优选的诊断检查载体的网格是疏水的，而且单独不具有表面活性。使由不渗透样品液体的材料制成的一种惰性覆盖物安置在超出试验区的那部分网格面积(即不在试验区上的网格面积)上，因而在位于试验区上方的网格区中留出供点样的区域。该根据本发明特别优选的诊断检查载体的网格本身应该不具有表面活性或吸水性，因而，样品液体应尽可能全部为试验区所得到。已证实合适的网格为当使其垂直浸入水中时，能使水在网格中升高2mm的网格。疏水的粗孔单丝织物优选用作所述网格。该单丝织物本身可以是疏水性的或通过例如润湿剂处理变成疏水性的。特别优选使用聚酯作为网状材料，一般先用该材料制成网格，然后润湿剂处理后使用。所述网格厚度必须根据下列原则来控制，即其上的覆盖物和其下层之间距离应保持在使剩余液体能在毛细力作用下，通过饱和试验区和网格的填充网眼吸入所述覆盖物下区域并从点样面导出。一般来说，该网格厚度最好为50-400μm。所述网格必须具有足够大的网眼宽度以便液体能通过该网格到达试验区。网格的性能为不使网格内液体在网格表面水平扩散而足使其垂直流过网格到达试验区。在前述根据本发明特别优选的诊断检查载体中，覆盖试验区的网格比在下面的试验区更大。网格超出试验区部分被固定在支承层上。该附着过程可以使用对于检查载体
技术领域：
的技术熟练人员公知的方法来完成。例如，使用热固性粘合剂或硬化冷固性粘合剂来完成。也已证实双面粘合胶条非常好。但是，在上述所有情况下，重要的是使网格粘附到支承层上可使表面活性液体能从试验区转移到粘接支承层的网格部分。尤其当所述试验区对液体饱和时，该表面活性液体必须能被转移。已证实由天然或合成橡胶制成的粘合胶带非常适合所述工艺过程。起粘合网格与支承层作用的粘合胶带最好具有与试验区大约相同的厚度。然后，它大约作为垫片以便使网格整体保持在一个平面上(除试验区面积)。使不渗透样品，一般不渗透水和不吸收的材料制成的惰性覆盖物按照覆盖除试验区外的网格区域方式，置于本发明特别优选的诊断检查载体的网格上。理想情况下，覆盖物也突出所述试验区外一点。但是，在任何情况下，覆盖所述试验区网格的相当大部分是不加覆盖物的。该网格不加覆盖物部分代表点样区。已证实塑料薄片特别适合作为覆盖物。如果所述覆盖物和网格具有不同颜色例如白色和黄色或白色和红色，用该方法能非常清楚地标记出待测样品液体的加样区。例如借助所述覆盖物上的一个或几个印刷箭头，按照箭头方向，很清楚根据本发明的诊断检查载体的哪一端应该放入或插入检测仪器中。可以非常简单地使用两条带状塑料片覆盖物(留出试验区上方网格带状区域)形成点样区。使用作覆盖物的薄片粘附在所述网格上并可选地粘附在支承层上。如果所述薄片本身不具粘合性的话，热融粘合剂或粘合胶带适用于上述粘附过程。但是，在任何情况下，必须小心在所述覆盖物下方仍然存在由网格形成的毛细间隙，其中，可吸收来自用液体饱和试验区的多余的样品液体。所述点样区优选位于支承层孔眼上方，通过该孔眼可以观测到试验区中色泽形成和变化。为了实施借助本发明的诊断检查载体测定全血中被分析物的方法，将血样加到所述试验区的点样面上，并从检测面观察显色过程。在糖尿病监测过程当中(即定期控制糖尿病患者血中葡萄糖含量过程中)出现错误测量值的常见原因至今为止仍是样品量太少。对于包含大小约为5×6mm试验区的本发明诊断检查载体而言，3μl全血已足够完成目测检验结果过程。由于所述试验区的第二薄膜层强散射光，相反第一层弱散射光，所以，从检测面可以观察到所形成色彩带有较高亮度和色度。不管在少量样品中只存在少量分析物，都可以保证准确测量结果。当然也能用仪器借助诊断试验载体测定全血中被分析物。为了得到尽可能准确的定量结果，该方法也是可行的。为此，优选在色泽变化过程中边疆或间隔观测检测位置上的反射率。所述试验区检测面的反射率测量结果以连续测量的形式完成。当连续测量数值之间差一次或几次低于某一值时，可选再增加一定反应时间后，终止该测量。所述连续测量结果中最后的反射率用来计算被分析物浓度。因为该法使用终止所述连续测量的准确标准而且不需要确定点样的准确时间，所以，也可以在检测仪器外加样。因而，在点样后，最长允许时间内的任何需要时刻将所述检查载体条插入仪器中便可。在上述情况下，在血球容量由20％高于60％范围内，所述测量方法不受影响，所以，当使用根据上述过程的仪器完成该测量时，其测量方法就指与血球容量不相关的方法。在能读出与血球容量不相关的测量值之前，人们必须等待2-3分钟以便目测其结果。在图1-9中，用图解方式解释本发明。图1表示经过本发明诊断检查载体试验区的横截面图。图2表示根据本发明特别优选的诊断检查载体的透视图。图3表示根据本明诊断检查载体下面的俯视图。图4表示按照图2，沿A-A线经过本发明诊断检查载体的横截面图。图5表示图4横截面的放大部分。图6-9表示校准曲线1-4，在实施例2中做进一步解释。用在所述图中的标号具有下列含义。1试验区2透明薄片3第一层4第二层5点样面6检测面7诊断检查载体8支承层9网格10覆盖物11所述网格超出试验区部分12点样部位13孔眼14试验区胶粘带15垫片16毛细活性间隙17样品液体18定位孔在图1中表示的经过本发明诊断检查载体试验区(1)的横截面图显示在透明薄片(2)上加上第一薄膜层(3)。用第二薄膜层(4)覆盖第一薄膜层(3)。制备根据本发明检查载体的试验区(1)即使用作为第一薄膜层(3)的湿涂层化合物涂布透明薄片(2)，接着使用作为第二薄膜层(4)的湿涂层化合物涂布干燥后的第一薄膜层(3)产生各层相互粘结的，第一薄膜层(3)在透明薄片(2)上的完整平面。将待测定含量的血样加到根据本发明检查载体试验区(1)的点样面(5)上。当被分析物含在该样品中时，从根据本发明检查载体试验区(1)的检测面(6)可以观测到显色过程，其色度决定于该样中被分析物含量。在图2(透视)和图4(横截面)中所显示的根据本发明特别优选的诊断检查载体(7)采用试验条形状。在支承层(8)上，设置试验区(1)，它用比其更大的网格(9)覆盖。利用垫片(15)使网格(9)粘结到试验区(1)旁边的支承层(8)上。该垫片(15)可以是使网格(9)固定在支承层(8)上的加热熔化粘合剂区域或是双面粘合胶带。理想情况下，垫片(15)具有大约与试验区(1)相同厚度。使作为覆盖物(10)的薄膜层粘结到支承层(8)和网格(9)上。以便它们能覆盖网格(9)超出试验区(1)部分的方式布置所述覆盖物。所述覆盖物(10)也稍微超出试验区(1)。但是，它们留下覆盖试验区(1)的网格(9)部分中大部分不被覆盖。这部分区域代表点样区(12)。将待测样品液体(17)加到这里。当使用仪器(例如反射光度计)测定时，定位孔(18)可以使所述试验条能保持在该仪器的准确的预测定位置上。例如可以使用图钉伸入定位孔(18)中，因而使检查载体(7)保持在预定位置上。左边覆盖物(10)上有印刷箭头，它们提示使用者检查载体(7)哪一端应该放入或插入检测仪器中。图5显示如图2和图4所示经过根据本发明特别优选的诊断检查载体的放大的横截面图。该图意欲解释测定液体样品被分析物，例如测定全血中葡萄糖的方法是如何进行的。为此，将检测血样加入网格(9)的点样区(12)中。该液体垂直穿过网格(9)到达试验区(1)。就作为样品液体的血液而言，红血球留在那里，而血浆和血清到达试验区(1)各层(3，4)。如果加了足够量的全血形式样品液体的话，血浆或血清在包括第一和第二薄膜层(3，4)的试验区(1)中扩散整个试验区(1)。如果所述液体量非常小的话，试验区(1)甚至可以吸干下面的网格(9)，因为网格(9)本身不具有毛细活性。对于大量液体的介质而言，首先填充整个试验区(1)网格(9)的空隙，然后填充所述覆盖物(10)下的毛细空隙。对于该毛细空隙的合适功能而言，所述覆盖物(10)至少覆盖网格(9)下试验区(1)的很少一部分。通过孔眼(13)能观测到试验区(1)的检测表面。从这方面考虑，图3中显示根据图2、4和5诊断检查载体下面的俯视图。如果所加样品液体中包含有被分析物的话，所述试验区(1)检测表(6)的颜色将改变。所产生的颜色强度(色度)反映出样品液体中被分析物含量。通过下列实施例进一步详细解释本发明。实施例1根据本发明的诊断检查截体的制备通过下列步骤制备根据图2的试验载体将5mm宽双面粘合胶带(由聚酯支承层和合成橡胶粘合剂组成)固定在包含二氧化钛的聚酯支承层上。在该组合体上整体钻孔，孔眼间距为6mm，以便产生测量孔。此后，除去所述双面粘合胶带上的保护纸。由两个薄膜层组成的试验区按下列过程制备A.将下列组成中各成分以纯物质或储备液形式一起加入烧杯中并搅拌混均水20.0g一水合柠檬酸2.5g二水合氯化钙0.5g氢氧化钠1.4g合成生物聚合胶3.4g氯化四乙基铵2.0gN-辛酰基-N-甲基-葡糖酰胺2.1g聚乙烯吡咯烷酮(MW25000)3.5gTrawspafill(硅酸铝钠)62.19g聚丙酸乙烯酯分散液(50％(重量)水)60.8g氯化双-(2-羟乙基)-(4-肟基亚环己-2，5-二烯基)铵1.2g2，18-磷钼酸六钠盐16.1g吡咯并喹啉一苯醌32mg葡糖脱氢酶(rec.fromAcinetobacter1.7MUcalcoaceticus，EC1，1，99，17)(2.4g)1-己醇1.6g1-甲氧基-2-丙醇20.4g其总溶液用NaOH调节pH约为6，按89g/gm(面积重量)涂布在125μm厚的聚碳酯酯薄片上并干燥。B.将下列组成中各成分以纯物质或储备液形式一起加入烧杯中并搅拌混均水579.7g氢氧化钠3.4gGantrez(甲基乙烯基醚马来酸共聚物)13.8gN-辛酰基-N-甲基-葡糖酰胺3.6g氯化四乙基铵9.7g聚乙烯吡咯烷酮(MW25000)20.2g二氧化钛177.1gKieselguhr(硅藻土)55.3g聚丙酸乙烯酸分散液(50％(重量)水)70.6g2，18-磷钼酸六钠盐44.3g六氰基高铁酸(III)钾0.3g1-己醇1.6g1-甲氧基-2-丙醇20.4g其总溶液用NaOH调节pH至约为6，按104g/qm(面积重量)涂布在如A中所述带涂层的聚碳酸酯薄片上并干燥。按该法制备的检测层的5mm宽条正相配并粘贴到支承层上，其薄片面上钻孔的双面粘合胶带上。使用为垫片(由PVC支承层和天然橡胶粘合剂组成)的双面粘合胶带粘合在所述支承薄片的两面并直接邻接检测层。在本实施例中，一个垫片为6mm宽，另一个垫片为9mm宽。然后，除去所述双面粘合胶带的保护薄片。使浸透润湿剂的黄色单丝粗孔聚酯织物ScrynelPF280HC(“ZurcherBeuteltuchfabrik，Ruschlikon，Switzerland)放在上述复合物结构上并加压粘合。使两条单面粘合胶带(由PVC支承层和天然橡胶粘合剂组成)作为覆盖物粘合在所述黄色网格上，要求完全覆盖所述垫片和与所述反应区至少仍有一点重叠。这就制成所述带状材料。按照使测量孔位于检查载体中间方式，将所述带状材料切成6mm宽的检查载体。实施例2与血球容量不相关的根据本发明的检查载体使用反射光度计可以测量实施例1的检查载体。当有校准曲线时，代表显色强度的反射率可以转化成葡萄糖浓度。如果使用“相对反射率”一词，那么它们指以干燥检查载体计的反射率。A.校准曲线是通过测定大量包含不同葡萄糖浓度的静脉血样后做出的。使用参比方法测定的这些静脉血样的反射率和葡萄糖浓度可以用来建立标准曲线。在校准变量1中，将10μl静脉血样加到根据实施例1的检查载体上并在21秒钟后测定反射率。通过对10个检查载体的平均反射率和所述血样参比值的回归分析，确定校准曲线1(图6)。在校准变量2中，将10μl静脉血样也加到根据实施例1的检查载体上并在30秒钟后测定反射率。通过对10个检查载体的平均反射率和所述血样的参比值做回归分析，确定校准曲线2(图7)。在校准变量3中，将10μl静脉血样也加到根据实施例1的检查载体上并每间隔3秒钟测定其反射率。一旦反射率差值连续两次小于0.3就终止测量并使用该反射率值进行评价。通过对10个检查载体的平均反射率和血样参比值的回归分析，确定校准曲线4(图9)。B.在测定变量1的情况下，将10μl静脉血样加到根据实施例1的检查载体中并在21秒钟后测定反射率。使用根据图6相应校准曲线，使各个反射率值换算成葡萄糖浓度。从10个检查载体的平均浓度和所述血样的参比值确定偏差并列于表1中。在测定变量2的情况下，将10μl静脉血加到根据实施例1的检查载体中并于30秒钟后测定反射率。使用根据图7的相应校准曲线，使各个反射率值换算成葡萄糖浓度。从10个检查载体的平均浓度和所述血样的参比值确定偏差并列于表2中。在测量根据本发明变量3的情况下，将10μl静脉血也加到实施例1的检查载体中并每间隔3秒钟测定反射率。一旦反射率差值连续两次小于0.3便终止该测量过程并使用该反射率值进行评价。使用根据图8的相应校准曲线，使各个反射率值换算成葡萄糖浓度。从10个检查载体的平均浓度和所述血样的参比值确定偏差并列于表3中。在测定根据本发明变量4的情况下，将10μl静脉血也加到实施例1的检查载体中并每间隔3秒钟测定反射率。一旦反射率差值连续两次小于0.9，便终止该测量并使用该反射率值进行评价。使用根据图9相应校准曲线，使各个反射率值换算成葡萄糖浓度。从10个检查载体的平均浓度和所述血样的参比值确定偏差并列于表4中。表1与血球容量相关的测量变量1血球容量占30％的血液血球容量占57％的血液测定相对反射率(％)根据校准曲线1的计算浓度与参比值的偏差％测定相对反射率(％)根据校准曲线1的计算浓度与参比值的偏差％51.188.57.361.656.3-31.544.2111.04.954.375.3-17.137.8143.23.945.8104.4-20.430.1197.42.936.6150.6-20.721.1294.74.628.3213.8-20.5</table></tables>表2与血球容量相关的测量变量2表3通过测定根据本发明变量3补偿血球容量的相关性表4通过测定根据本发明变量4补偿血球容量的相关性</tables>在20％血球容量下测定变量3和4产生类似30％血球容量的小的偏差。权利要求1.借助包含在载体中的试剂体系来检测全血中被分析物的诊断检查载体，该载体包括显色剂以及由供加入血样的点样面和检测面组成的试验区，在检测面上发生由被分析物与所述试剂体系反应所导致的光学上可检测的变化，其设计形式应使所述样品中的红血球不扩展到该检测面，其中，所述试验区包括一个透明薄片，第一和第二薄膜层叠加在上面，其中位于所述透明薄片上的第一层在潮湿状态下散射光作用要比上面的第二层弱很多并且其中所述薄片与第一层连接面的面为检测面，而第二层与第一层连接面的反面为点样面。2.按照权利要求1的诊断检查载体，其中第二层包含折光率至少为2.5、浓度相对于所述干燥双薄膜层至少为25％(重量)的颜料。3.按照权利要求1或2的诊断检查载体，其中两个薄膜层都是由包含聚合物成膜剂和溶胀剂的均匀分散液的聚合物成膜剂的分散液或乳浊液所形成，其中所述溶胀剂的溶胀能力如此之高以致在最多一分钟后在检测面就可以探测到光学上可检测的变化。4.按照上述权利要求中任一项所述的诊断检查载体，其中第一薄膜层包含硅酸铝钠而第二薄膜层包含二氧化钛作为颜料。5.按照上述权利要求中任一项所述的诊断检查载体，其中两个薄膜层都适用于红血球的分离。6.按照上述权利要求中任一项所要求的诊断检查载体，其中在干燥状态下，第一和第二薄膜层加在一起的最大厚度为0.20mm，优选最大厚度为0.12mm，特别优选的最大厚度为0.08mm。7.按照权利要求6的诊断检查载体，其中第二薄膜层比第一薄膜层厚2-5倍。8.按照上述权利要求中任一项所述的诊断检查载体，其中所述显色剂位于第一薄膜层中。9.按照上述权利要求1-7中任一项所述的诊断检查载体，其中所述试剂体系的成分分布在两个薄膜层中。10.按照权利要求中任一项所述的诊断检查载体，其中所述薄膜层不包含溶血的润湿剂。11.按照权利要求10的诊断检查载体，其中至少一个薄膜层包含N-辛酰基-N-甲基-葡糖酰胺作为润湿剂。12.利用权利要求1-11中任一项的诊断检查载体测定全血中分析物的方法，其中将血样加到所述试验区的点样面上并在检测面观测显色过程，其中显色强度反映血中被分析物含量。13.权利要求12所述的方法，其中在显色过程中，连续或间隔观测检测面。14.按照权利要求13所述的方法，其中借助仪器，通过以一系列测量值的方式测定显色过程进行所述观测并以显色过程中连续测定值一旦低于预定的绝对值或差值的时刻，确定为测定时刻。15.按照权利要求13所述的方法，其中借助仪器，通过以一系列测量值的方式测定显色过程进行所述观测并以显色过程中连续测定值几次低于预定的绝对值或差值的时刻，确定为测定时刻。16.按照权利要求14或15所述的方法，其中在一次或几次低于差值的绝对值后再反应一段时间。17.按照权利要求14-16中任一项所述的方法，其中用反射计测量显色过程并且所述测量值系列中最后一个测量值被用来通过数学方法计算被分析物浓度。全文摘要本发明涉及借助包含在载体中的试剂体系来检测全血中被分析物的诊断检查载体,该载体包括显色剂以及由供加入血样的点样面和检测面组成的试验区,在检测面上发生由被分析物与所述试剂体系反应所导致的光学上可检测的变化,其设计形式应使所述样品中的红血球不扩展到该检测面,其中,所述试验区包括一个透明薄片,第一和第二薄膜层叠加在上面,其中位于所述透明薄片上的第一层在潮湿状态下散射光作用要比上面的第二层弱很多并且其中所述薄片与第一层连接面的面为检测面,而第二层与第一层连接面的反面为点样面。此外,本发明涉及利用根据本发明的诊断检查载体测定全血中分析物的方法。文档编号G01N33/52GK1176389SQ9711536公开日1998年3月18日申请日期1997年7月23日优先权日1996年7月23日发明者D·蒂姆,W·R·克纳珀,R·帕科尔,H·默迪斯,R·罗伦兹申请人:曼海姆泊灵格股份公司