一种用于毛发水酱油检测的试剂及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及产品检测领域，具体涉及用于检测毛发水酱油的试剂制备方法及相应试剂
【背景技术】
[0002]食品安全不仅关系到人民群众的身体健康和生命安全，而且也关系到社会的和谐与稳定。近年来，随着经济社会不断进步，食品卫生与安全成为备受关注的热门话题。无一不牵动着广大民众的心，接连不断发生的恶性食品安全事故，如“苏丹红事件”，“三鹿奶粉事件”等，引发了人们对食品安全的高度关注。
[0003]酱油是指以大豆或脱脂大豆、小麦或麸皮、食盐、水为原料，经微生物酿造而成的一种液态鲜味调味品，这在国家标准中有明确规定。酱油具有丰富的营养价值，含有多种营养成分。
[0004]国家质量技术监督局2000-09-01发布了酿造酱油的国家标准(GB18186—2000)。这些标准就酱油的定义、分类作了规范的解释。酱油分为两类，酿造酱油和配制酱油。酿造酱油是以大豆和/或脱脂大豆、小麦和/或麸皮为原料，酿造而成的。配制酱油是以酿造酱油为主体，与酸水解植物蛋白调味液，食品添加剂等配制成的。而不管是酿造酱油还是配制酱油，国家都明文规定不得添加味精废液、胱氨酸废液、用非食品原料生产的氨基酸液等。
[0005]但是，由于国家的酱油等级是根据酱油的氨基酸态氮的含量而确定的，许多不法商贩从就酱油的含氮量入手，用劣质原料提高酱油中氨基酸的成分，其中以毛发水酱油最为人们所厌恶。
[0006]毛发水酱油指的是有不法商贩使用毛发水解的氨基酸废液来勾兑制作酱油，这种劣质酱油里含有大量砷、铅、汞、4-甲基咪唑等有害物质，对人体的肝、肾、血液系统、生殖系统等有较大的毒副作用，可以致癌。使用这种氨基酸废液配制的酱油，不但不需要用黄豆等原料来发酵，氮的含量却还能完全达到酱油里氨基酸的国家标准，而且按照现有的国家标准的检测手段是难以区分出毛发水酱油的。
【发明内容】
[0007]针对上述问题，本发明希望提出一种能够用于检测“毛发水”酱油的试剂及其制备方法。
[0008]申请人经过对毛发水酱油和普通酱油的仔细研宄，找到了毛发水酱油与普通酱油之间的区别。申请人发现“毛发水”中往往会残留有相对高浓度的胱氨酸，而在以食用植物蛋白为原料酿造的纯酿造酱油中均未检测出胱氨酸。这是由于，“毛发水”通常来源于工业生产胱氨酸的过程，是胱氨酸制造过程中的废液。动物的毛发富含角质蛋白，不容易被消化吸收，在强酸条件下，毛发中的角质蛋白水解，生成胱氨酸及其他氨基酸，通过调节PH值至胱氨酸的等电点附近可以使此母液中的胱氨酸析出，得到胱氨酸粗品。从母液中提取了大部分胱氨酸后，剩下的废液富含氨基酸。这种废液不能作为食品级原料使用，在毛发水酱油事件中却被不法商贩购买用来勾兑酱油。
[0009]因此，申请人发现，对标明植物原料酿造酱油的酱油产品来说，如在其中检测出异常浓度的胱氨酸则有添加动物源氨基酸的嫌疑，可能为毛发水酱油。
[0010]而实际上，本申请的发明人发现要想直接测定胱氨酸的含量往往是困难的。不过本申请的发明人发现在溶液中胱氨酸和半胱氨酸可以同时存在并转换。而半胱氨酸(Cys)是唯一一种含有巯基(-SH)的氨基酸，其不同Cys残基的巯基之间可以形成二硫键，维系蛋白质的三级结构。此外，Cys残基中的巯基是所有蛋白质氨基酸残基中最活泼的基团，在体内参于抗氧化、亚硝基化和巯基-二巯键交换等多种重要生理反应。因此，本发明可以利用胱氨酸和半胱氨酸会同时存在于溶液中这一特性。为了更好地对待测酱油进行分析，在优选实现方式中，可以将胱氨酸都转化成半胱氨酸以巯基作为目标官能团进行分析。
[0011]具体而言，本发明提供一种用于检测毛发水酱油的试剂制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤:
[0012]步骤I)将预定量的邻硝基苯甲醛溶于CH2Cl2* ;
[0013]步骤2)在所获得的溶液中加入2，4- 二甲基吡咯并滴入三氟乙酸密封、搅拌预定时间；
[0014]步骤3)在所得溶液中加入三乙胺以及三氟化硼乙醚；
[0015]步骤4)对所得混合液进行浓缩，并对所获得的浓缩液进行洗涤；
[0016]步骤5)用无水硫酸钠对所得浓缩液进行干燥，除去溶剂，并利用硅胶柱层析法进行提纯，获得干燥的第一固体物质；
[0017]步骤6)将所获得的第一固体物质溶于CH2Cl2和无水乙醇的混合液；
[0018]步骤7)在混合液中加入Pd/C，在搅拌状况下通入氢气催化还原，待还原反应基本完成后，滤除Pd/C ；
[0019]步骤8)去除滤液中的溶剂获得相应的第二固体物质；
[0020]步骤9)将所得第二固体物质溶于冰乙酸中，搅拌并加入马来酸酐，搅拌预定时间后，减压去除溶剂，并进行硅胶柱层析法提纯，获得橙色物质；
[0021]步骤10)将所得橙色物质溶于乙酸酐中，加入乙酸钠，保温持续预定时间，待反应完全将混合液减压除去溶剂，余下倒入水中，搅拌，至固体析出，过滤，对所得固体产品进行硅胶柱层析法提纯，获得目标试剂。
[0022]进一步地，所述方法中，邻硝基苯甲醛的用量为1.06g，所述2，4-二甲基吡咯的用量为1.44mL ;所述三乙胺用量为4.0mL,三氟化硼乙醚用量为4.8mL，马来酸酐的用量为
0.27g，各成分可以按比例增加。
[0023]进一步地，所述第一固体物质为1，3，5，7-四甲基-8-苯基-(2_硝基)-二氟化硼二吡咯甲烷。
[0024]进一步地，所述第二固体物质为1，3，5，7-四甲基-8-苯基-(2_胺基)-二氟化硼二吡咯甲烷。
[0025]进一步地，所述方法还包括将所获得的第二固体物质溶于预定量的二甲亚砜溶液或甲醇。
[0026]进一步地，在所述步骤4)中所述洗涤包括利用饱和NaHCO3对所获得的浓缩液进行洗涤。
[0027]另一方面，本发明提供一种用于毛发水酱油检测的试剂，其特征在于，所述试剂中包含1，3，5，7-四甲基-8-苯基-(2-马来酰亚胺)_ 二氟化硼二吡咯甲烷。
[0028]另一方面，本发明还提供了所述试剂在检测毛发水酱油中的应用。
[0029]如上所述的，本发明的检测试剂主要基于对胱氨酸的检测来判断毛发水酱油。在溶液中，胱氨酸和半胱氨酸可以同时存在并转换，因此，在将本发明的检测试剂加入到待测酱油中时，所述检测试剂能够与半胱氨酸发生荧光反应，从而技术人员可以定性地或定量地判断出待测酱油中半胱氨酸的含量，进而推测出胱氨酸的含量。基于胱氨酸的含量，技术人员就可以判定待测酱油是否为毛发水酱油。
[0030]优选地，检测试剂还可以包括还原试剂，该还原试剂可以先加入到待测酱油中，用于将胱氨酸会转化为半胱氨酸。
[0031]有益效果
[0032]本发明的检测试剂的制备方法成本低廉、能够快速批量地获得高效的用于检测毛发水酱油的试剂。本发明的检测试剂只需要滴入或放入待测酱油中，就可以通过对荧光的判断来确定待测酱油中胱氨酸的含量，进而技术人员通过肉眼就能够判断出，待测酱油是否为毛发水酱油或疑似毛发水酱油，使用简单、方便，效果明显，检测时间短。
【附图说明】
[0033]图1为根据本发明一个实施例的制备方法的流程示意图；
[0034]图2为根据本发明一个实施例进行试剂合成的合成路径示意图；
[0035]图3为本发明的检测试剂的分子结构；
[0036]图4为TMPAB-O-M中IH的核磁共振谱。
【具体实施方式】
[0037]下面结合图1和2所示，对本实施例的用于毛发水酱油检测的试剂的合成过程进行详细介绍。
[0038]在本实施例中，通过先合成1，3，5，7_四甲基_8_苯基_ (2_硝基)-二氣化棚二P比咯甲烷(TMPB-O-N)，再合成1，3，5，7-四甲基-8-苯基-(2-胺基)-二氟化硼二吡咯甲烷(TMPB-O-A)，最后获得本发明的测试试剂。
[0039]具体而言，首先，准确称取1.06g(7.0mmol)邻硝基苯甲醛，将其溶于500mL干燥的CH2Cl2O
[0040]接下来，在利用氮气进行保护的情况下，对所得溶液边搅拌，边缓慢滴加
1.44mL(14.0mmol) 2, 4-二甲基吡咯。之后，滴入I滴三氟乙酸，将所得溶液密封，于25°C下保温搅拌过夜，直至利用薄层色谱检测发现邻硝基苯甲醛的物质点已经消失。
[0041]接下来加入4.0mL三乙胺，对所得溶液在25°C下搅拌lOmin，继而加入4.8mL三氟化硼乙醚，室温搅拌过夜。随后，将所得混合液浓缩至约150mL，利用饱和NaHCCV^液对浓缩液进行洗涤(40mLX3)。有机相用无水硫酸钠干燥，除去溶剂，硅胶柱层析提纯(淋洗剂:环己烷=CH2Cl2= 30:70)，得橙红色固体 0.91g(产率:35.3% )。1H NMR(CDC13，300MHz):
1.36 (s，6H)，2.56 (s，6H)，5