MicroRNA-4454和MicroRNA-7975在制备检测银屑病试剂或试剂盒中的应用【
技术领域：
】[0001]本发明设及医学生物检测
技术领域：
，是microRNAs在制备早期筛查或诊断银屑病试剂或试剂盒中的应用。【
背景技术：
】[0002]银屑病（Psoriasis,Pso)，俗称牛皮癖，又名白疵。是一种常见的慢性炎症性炎症性皮肤病，病程较长，易复发，少数病例几乎终生不愈。该病发病W青壮年为主，对患者身体健康和精神状况影响较大。临床变现W红斑，鱗屑为主，全身均可发病，W头皮，四肢伸侧较为常见。发病机制目前尚未完全阐明，普遍认为与免疫，遗传，环境，屯、理等因素有着密切的关联。美国皮肤病协会报道，美国银屑病患者约占人口总数的2%，中国患者发病率约为0.123%，北方高于南方（参见文献A.B.Gottlieb,A.W.Armstrong.Psoriasisoutcomemeasures:areportfromtheGRAPPA2012annualmeeting.JRheumatol,40(2013)，pp.1428-1433)。当前治疗原则仅W局部药物治疗及紫外线治疗为主，缺乏有效根治的方法，仅能控制或减少病患复发。银屑病已严重的危害了人类健康和精神状况，如何早期发现，早期治疗银屑病，成为了当今重要的课题。[0003]目前Pso的研究主要针对Pso的流行病学研究和诱发因素研究，但对其发生机制的研究探讨设及很少。由于目前Pso的诊断主要依靠临床表现，而缺乏特异性实验室指标，因此为临床工作带来很多不便，增加了误诊与漏诊。对患者而言，面临着经济与精神双方面的负担。因此，从预防和治疗角度，急需寻找较明确的Pso生物学标记物。[0004]microRNAOiiiRNA)是一类长度约19~25碱基的非编码蛋白质单链小分子RNA，广泛存在于多细胞生物和病毒体内，主要通过核酸序列互补匹配结合到特定的祀mRNA上，抑制祀mRNA翻译过程或降解祀mRNA，是一种起负调控作用的分子。miRNA调控至少30%W上的基因表达，参与多种病理生理过程。在多个组织中，例如，正常与皮肤疾患组织中表达差异。因此，通过表达谱分析寻找疾病相关miRNA并进行发病机理研究，最终应用于皮肤疾患的诊断和治疗，已经成为目前miRNA研究的重要方向（参见文献JinninM.VariousapplicationsofmicroRNAsinskindiseases.JDermatolSci.74(1):3-8.2014)。[0005]已有实验证实，miRNA在血浆和血清中非常稳定，它们被有效保护W免接触RNases，在严酷环境条件下仍能保持稳定。但是，关于指甲中miRNA研究很少有报道，与血清及血浆miRNA相比，指甲中miRNA更加容易获取，对患者而言创伤小，更容易被接受。[0006]目前，对于miRNA的早期诊断作用的研究主要集中在肿瘤方面，与银屑病相关的microRNAs主要为：在银屑病患者皮肤中高表达的miRNA-203(参见文献SonkolyE，WeiΤ,JansonPC,SaafΛ,LundebergL,Tengvall-LinderM,NorstedtG,AleniusH,HomeyB,ScheyniusA,StableM,PivarcsiA.MicroRNAs:novelregulatorsinvolvedinthepathogenesisofpsoriasis?PLoSOne.2(7):e610.2007)，银屑病患者外周血中低表达的miRNA-424和miRNA-1266(参见文献IchiharaA,JinninΜ,YamaneΚ,F'ujisawaA,SakaiK,MasuguchiS,etal.microRNA-mediatedkeratinocytehyperproliferationinpsoriasisvulgaris.BrJDermatol.65:1003-10.2011；IchiharaA,JinninM,OyamaR,YamaneK,FujisawaA,SakaiK,etal.IncreasedserumlevelsofmiR-1266inpatientswithpsoriasisvulgaris.EurJDermatol22:68-71.20。），U及在银屑病患者发根中高表达的miRNA-19A(参见文献HiraoΗ,JinninΜ,IchiharaA,F'ujisawaA,MakinoK,KajiharaI,etal.DetectionofhairrootmiR-19aasanoveldiagnosticmarkerforpsoriasis.EurJDermatol[inpress].2014)都具有对银屑病的诊断价值。W上研究均提示，miRNAs与银屑病有着密切的关系，角质细胞、血清及发根中miRNA可成为早期特异性潜在标记物。[0007]hsa-mir-4454(MI0016800)与hsa-mir-7975(MI0025751)目前尚无文献报道与银屑病的发生和诊断相关联。[0008]目前尚未见从指甲中获取microRNAs作为银屑病生物学标记物的报道.[0009]更未见一种用于检测指甲中的hsa-mir-4454,hsa-mir-7975含量来早期预测银屑病的检测方法的报道。【
发明内容】[0010]本发明的目的在于寻找到与银屑病相关的新的分子标记物，本发明的另一目的在于提供某一种microRNA在制备早期筛查或临床诊断银屑病试剂或试剂盒中的应用。[0011]由于采血及生检等有创检查容易对患者造成屯、理负担等问题，所W本发明的另一发明目的在于提供一种检测指甲中的hsa-mi;r-4454,hsa-mi;r-7975含量的试剂或试剂盒，W及相关的检测方法。[0012]本发明人为了寻找参与银屑病相关的指甲miRNA,利用miRNA忍片技术筛选了与银屑病相关的miRNA。结果发现与正常人指甲MicroRNA-4454，MicroRNA-7975的表达具有显著差异。[0013]临床上Pso有相对明确的发病时间，为了寻找参与Pso相关的指甲miRNAs，我们利用miRNA的微阵列技术筛选了与Pso相关的miRNA(表1)并进行了qPCR验证检巧U。结果发现与正常人相比，Pso患者指甲中MicroRNA-4454,MicroRNA-7975的表达水平明显降低（如表1、图2、图4、图5所示）。本发明人认为通过实时定量巧光PCR(Real-timePCR)为基础技术，通过检测Pso患者中指甲中MicroRNA-4454,MicroRNA-7975的表达来实现早期诊断Pso是完全可行的。同时检测了其它实验室从外周血和皮肤中检测发现的若干microRNAs,其中miR-424-5p发生了显著下调，与文献报道的银屑病患者外周血中检测到的miR-424-5p改变情况一致，但目前为止并没有直接证据表明银屑病患者外周血的microRNAs表达谱与指甲中的microRNAs表达谱具有相关性。表l:miRNAs表达微阵列（microRNAmicroArray)技术对正常人群和银屑病[0014]患者指甲中microRNAs表达谱进行检测的数据结果[0015][0016][0017][0018][0019][0020][0021][0022][0023][0024][00巧]本发明的第一方面，提供了MicroRNA-4454和/或MicroRNA-7975作为诊断银屑病的分子标记物的应用。[0026]本发明的第二方面，提供了MicroRNA-4454和/或MicroRNA-7975在制备检测银屑病试剂或试剂盒中的应用，该应用也即早期筛查或临床诊断银屑病。[0027]MicroRNA-4454和/或MicroRNA-7975在制备检测银屑病试剂或试剂盒中的应用，所述的试剂，为检测生物样品中MicroRNA-4454表达量的寡聚核巧酸和/或MicroRNA-7975表达量的寡聚核巧酸。[0028]所述的试剂盒，包含上述试剂，即包含检测生物样品中MicroRNA-4454表达量的寡聚核巧酸和/或MicroRNA-7975表达量的寡聚核巧酸。[0029]在本发明的一个优选实施例中，所述的生物样品为指当前第1页1 2 3 4