免疫层析分析试剂盒、免疫层析分析装置以及免疫层析分析方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及免疫层析分析试剂盒、免疫层析分析装置以及免疫层析分析方法。
【背景技术】
[0002] 测定血液、尿等检体中所含的各种成分临床上在把握患者的健康状态方面极其重 要，一直以来，对应该成分采用了各种测定方法。作为其一，已知通过免疫反应使检体中所 含的被检测物质发色，并确认该发色信号的免疫层析分析装置以及分析方法。
[0003] 免疫层析分析装置的最简单的结构为样本添加部、标记物保持部、担载有检测部 的层析介质、以及吸收部互相连接的结构。
[0004] 另一方面，2011年世界的糖尿病患者数存在3亿6600万人，据预测，2030年将达 到5亿5200万人（成人人口的约10%)。另外，据认为所谓的糖尿病预备军也在其同等以 上。
[0005] 一直以来，是通过测定血糖值来进行糖尿病的诊断，但是近年来，由于血中的血 红蛋白上结合有糖的糖化血红蛋白（糖化~壬夕口匕' > )(糖化血红蛋白（夕y 3~壬 夕口匕' y ))、特别是血红蛋白0链的N末端缬氨酸残基糖化的血红蛋白Ale(以下，称为 "HbAlc"）相对于总血红蛋白量的浓度反映过去1至2个月的平均血糖值，因此正作为适于 糖尿病的诊断或糖尿病的追踪观察的指标使用。
[0006] 然而一直以来，HbAlc的测定通过HPLC法、毛细管电泳法、酶法、免疫学测定方法 等来实施，但是因为这些方法需要针对特定的装置或分析的专业知识，因此存在这样的问 题：在小规模的医院或家庭等中不能简单获知HbAlc的值。
[0007] 另外，关于HbAlc的血中浓度，由于血中成分存在个人差异，因此通过同时测定 HbAlc以外的血红蛋白并掌握HbAlc量相对于HbAlc和HbAlc以外的血红蛋白的总血红蛋 白量的比率，来判断糖尿病的阴性或阳性，但在此情况下还存在这样的问题：需要通过上述 方法分别测定HbAlc和HbAlc以外的血红蛋白，因此测定的繁杂程度进一步恶化。
[0008] 这里，（例如）专利文献1提出了简单测定HbAlc的方法。该方法首先将所采血 液与使血红蛋白0链的N末端在蛋白质表面露出的成分（N末端露出剂（露出剤））混合， 使HbAlc的抗原决定基在血红蛋白蛋白质的表面露出从而制备样本液，之后向样本添加部 滴加。通过毛细管现象使样本液在抗体固定化膜上展开，在抗体固定化膜上展开的样本液 到达抗HbAlc抗体涂布部，在这里仅样本液中的HbAlc发生反应并被检测。
[0009] 接着，进一步在抗体固定化膜上展开的样本液到达抗HbAO抗体涂布部，仅样本液 中的HbAO发生反应并被检测，其他血红蛋白不发生反应而是移动至吸水垫。
[0010] 由此分别检测样本液中的HbAO以及HbAlc。与HPLC法、毛细管电泳法、酶法、免 疫学测定法等不同，该方法不需要针对特定的装置或分析的专业知识，因此可简单地获知 HbAlc的值。
[0011][现有技术文献]
[0012] [专利文献]
[0013] [专利文献1]日本特开2012-251789号公报
【发明内容】
[0014] [发明要解决的课题]
[0015] 然而，专利文献1中记载的方法是测定血液检体中的HbAlc的方法，因此存在这样 的问题：样品不可避免地来自指血等，采血时使用针，每次都伴随着疼痛和精神压力。
[0016] 在不使用针就可采集的唾液检体中，虽然能够测定诸如血红蛋白那样的比较不需 要灵敏度的物质，但是测定诸如HbAlc那样的需要高灵敏度的极少量物质则是困难的。另 外，在免疫层析分析中，由于唾液成分的存在，还存在灵敏度进一步降低的问题。
[0017] 因此，本发明的目的在于提供一种免疫层析分析试剂盒、免疫层析分析装置以及 免疫层析分析方法，其能够解决上述课题，即使对于不使用针而从口腔内微量采集血液成 分得到的含有唾液等夹杂物的血液检体，也能够通过实现高灵敏度的检测，从而在不感受 到疼痛和压力的情况下进行免疫层析分析。
[0018] [解决课题的手段]
[0019] 本发明人经过深入研宄，结果发现，在免疫层析分析中，通过在检测部的展开方向 的上游含有烷基葡糖苷类以及阴离子型表面活性剂，即使是从口腔内采集的含有唾液等夹 杂物的血液检体，也能够通过实现高灵敏度的检测，从而在不感受到疼痛和压力的情况下 实施免疫层析分析，并由此完成了本发明。
[0020] SP，本发明如下所述。
[0021] 1. 一种免疫层析分析试剂盒，其含有用于稀释并展开从口腔内采集的血液检体的 检体稀释液和免疫层析分析装置，该免疫层析分析装置包括样本添加部、标记物保持部、担 载有检测部的层析介质部以及吸收部。
[0022] 2.前述1中记载的免疫层析分析试剂盒，其中在所述检体稀释液以及所述检测部 的展开方向上游的至少一者中含有烷基葡糖苷类以及阴离子型表面活性剂。
[0023] 3.前述1或2中记载的免疫层析分析试剂盒，其中所述血液检体中的被检测物质 为血液中的糖化蛋白质。
[0024] 4.前述3中记载的免疫层析分析试剂盒，其中所述糖化蛋白质为HbAlc。
[0025] 5.前述2~4中任意一项记载的免疫层析分析试剂盒，其中所述烷基葡糖苷类为 含有碳数为5~15的烷基的烷基葡糖苷或者烷基麦芽苷。
[0026] 6.前述2~5中任意一项记载的免疫层析分析试剂盒，其中所述阴离子型表面活 性剂为选自由十二烷基磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠以及聚氧乙烯月桂基醚硫酸钠组成的组 中的一种以上。
[0027] 7.前述2~6中任意一项记载的免疫层析分析试剂盒，其中在所述检测部的展开 方向上游含有1~1700 y g的所述烷基葡糖苷类、和8~800 y g的所述阴离子型表面活性 剂。
[0028] 8.前述1~7中任意一项记载的免疫层析分析试剂盒，其特征在于，使用牙间刷从 口腔内采集血液检体。
[0029] 9. -种免疫层析分析装置，其用于检测从口腔内采集的血液检体中的被检测物 质，并且包括样本添加部、标记物保持部、担载有检测部的层析介质部以及吸收部，其中在 所述检测部的展开方向上游含有烷基葡糖苷类以及阴离子型表面活性剂。
[0030] 10. -种免疫层析分析方法，其为这样一种方法：使用包括样本添加部、标记物保 持部、担载有检测部的层析介质部以及吸收部的免疫层析分析装置，对从口腔内采集的血 液检体中所含的被检测物质进行检测，该方法包括以下工序（1)~（4):
[0031] (1)向样本添加部中添加检体处理液的工序，该检体处理液通过检体稀释液对所 述血液检体进行稀释而得到；
[0032] (2)通过标记物保持部中所保持的标记物识别被检测物质的工序；
[0033] (3)在烷基葡糖苷类以及阴离子型表面活性剂的存在下，将所述血液检体以及标 记物作为移动相在层析介质部中展开的工序；
[0034] (4)用检测部检测展开后的移动相中的被检测物质的工序。
[0035][发明效果]
[0036] 本发明的免疫层析分析试剂盒、免疫层析分析装置以及免疫层析分析方法通过在 检体稀释液以及检测部的展开方向上游的至少一者中含有烷基葡糖苷类，在被检测物质到 达检测部之前，被检测物质与烷基葡糖苷类接触并使从口腔内采集的含有唾液的血液检体 中的被检测物质稳定化，因此可以以高灵敏度检测被检测物质。
[0037] 另外，通过在检体稀释液以及检测部的展开方向上游的至少一者中含有烷基葡糖 苷类并含有阴离子型表面活性剂，可有助于抑制由唾液成分引起的检测反应的反应性降 低。
[0038] 附图简要说明
[0039][图1]图1(a)和图1 (b)示出了免疫层析分析装置的结构。
[0040][图2]图2示出了含有唾液的血液检体（检体处理液1)和血液检体（检体处理 液2)的发色度变化率的评价。
[0041] [图3]图3示出了含有唾液的血液检体（检体处理液1)和血液检体（检体处理 液2)的发色度变化率的评价。
[0042][图4]图4示出了含有唾液的检体（检体处理液1'）和不含唾液的检体（检体 处理液2'）的发色度变化率的评价。
[0043][符号说明]
[0044] 1免疫层析分析装置
[0045] 11塑料制粘合片
[0046]12样本添加部
[0047] 13标记物保持部
[0048] 14层析介质部
[0049] 15吸收部
[0050] 16涂布有抗HbAlc抗体的抗HbAlc抗体涂布部
[0051] 17涂布有抗血红蛋白抗体的抗HbAO抗体涂布部
[0052] 18作为对照物的涂布有抗IgG抗体的抗IgG抗体涂布部
【具体实施方式】
[0053] 下面，进一步详细说明本发明。
[0054] 本发明中所用的血液检体为（例如）从口腔内采集的诸如血液、血浆或者血清之 类的血液样本，特别是含有唾液的检体。
[0055] 作为本发明的被检测物质，可列举（例如）a-胎蛋白（AFP)以及癌胚抗原（CEA) 等肿瘤标记物、铁蛋白、前列腺特异抗原（PSA)以及免疫球蛋白G(IgG)等血清蛋白质、类风 湿因子、生长激素（GH)以及促肾上腺皮质激素（ACTH)等激素相关物质、流感病毒、腺病毒、 衣原体抗原以及A群溶血性链球菌抗原等细菌抗原、以及衍生自血红蛋白的蛋白质等。
[0056] 这些当中，优选的是血液中的被检测物质，可列举（例如）衍生自血红蛋白的蛋白 质、血浆蛋白、脂蛋白、分泌蛋白、激素、补体、脂质、胆固醇、糖、其他生物体内成分、生物体 内给药及其代谢产物等。其中，从本发明的效果的观点出发，优选为血液中的糖化白蛋白或 糖化血红蛋白等糖化蛋白质，更优选为HbAlc。
[0057] 以下