2] 比较例7
[0193] 在比较例7中，按照下面的顺序制作免疫层析分析装置。
[0194] (1)样本添加部以与实施例1相同的方法制作。
[0195] (2)检测部的制作
[0196] 作为膜，使用了由硝化纤维素制成的片材（S y示7公司制，商品名：HF120、 250mmX25mm)。用含有5质量％的蔗糖以及5质量％的异丙醇的10mM磷酸缓冲液（pH7.4) 将抗腺病毒单克隆抗体或抗IgG单克隆抗体稀释成0. lmg/ml的浓度，通过抗体涂布机 (BioDot公司制）将150 yL该稀释后的溶液在膜上以1mm的宽度涂布至各自的位置，使之 在50°C下干燥30分钟并在室温下干燥一晚，从而在层析介质部上分别设置抗腺病毒单克 隆抗体涂布部、抗IgG抗体涂布部。
[0197] (3)标记物溶液的制备
[0198] 向0.5mL金胶体悬浊液（田中贵金属工业株式会社制：平均粒径40nm)中，加入 0.lmL用Tris缓冲液（pH8.5)稀释为0.lmg/mL浓度的抗腺病毒单克隆抗体，室温下静置 10分钟。然后，加入0. lml的含有0.01质量％的即6^(日本油脂株式会社制、商品名： SUNBRIGHT ME-200SH、分子量20000)的Tris缓冲液（pH8. 5)(添加后的PEG-SH浓度：0.001 质量％ )，室温下静置10分钟。然后，充分搅拌后，在8000 Xg下进行离心分离15分钟，除 去上清液后，加入0. lml的含有1质量％的牛血清白蛋白的磷酸缓冲液（pH7. 4)，从而制备 标记物溶液。
[0199] (4)免疫层析分析装置的制作
[0200] 向220 y 1上述制备的标记物溶液中添加100 y 1的含有25质量％的海藻糖水溶 液的磷酸缓冲液（p!19. 0)，将此溶液均匀地添加至8mmX 100mm的玻璃纤维垫（彡卩步7公 司制）上以后，用真空干燥机干燥，从而制备了标记物保持部。然后，向塑料制粘合片上粘 合上面制备的样本添加部、经标记物标记的标记物保持部、层析介质部，进一步粘合通用的 吸收部，用切割机将宽度切为5mm，从而制作免疫层析分析装置。此时，每个装置含有的SDS 的量为96 yg。
[0201] 以下面的配方，搅拌各成分从而制备检体稀释液。
[0202] 作为葡糖苷类的C8葡糖苷（同仁化学株式会社制，制品名：n-辛基-D-葡糖 苷）：10mM
[0203] 作为非离子型表面活性剂的TritonX-100 (SIGMA公司制，商品名）与Tween20 (和 光纯药株式会社制，商品名）的质量比为1:5的混合物：1. 2质量％
[0204] 作为缓冲液的Bicine缓冲液：50mM
[0205] 作为无机盐的氯化钾：0? 6质量％
[0206] 作为添加剂的酪蛋白钠：2. 0质量％
[0207] 余量：水
[0208] 检体的采集
[0209] 将1yg/mL的钝化腺病毒抗原作为检测物质，从健康成人男性采集唾液。
[0210] 检体处理液1'的制备
[0211] 将钝化腺病毒抗原和唾液混合成（容量比）1 : 49,以前者：后者（容量比）为 1 : 19混合该混合物和上述检体稀释液，从而制备检体处理液1'。
[0212] 检体处理液2'的制备
[0213] 以前者：后者（容量比）为1 : 1000混合钝化腺病毒抗原和上述检体稀释液，从 而制备检体处理液2'。
[0214] 免疫层析分析的实施
[0215] 向如上所述制作的免疫层析分析装置的样本添加部上供给110 y 1检体处理液 1'，展开10分钟后通过免疫层析阅读器（浜松水卜二夕只（株）社制，制品名）测定检测 部的发色的程度。关于通过免疫层析阅读器得到的测定值，在各比较例中重复3次试验。
[0216] 以同样的方法对检体处理液2'实施免疫层析分析。
[0217] 含有唾液的腺病毒检体（检体处理液1'）和不含唾液的腺病毒检体（检体处理液 2'）的发色度变化率的评价
[0218] 由下式求得的发色度变化率在表3以及图4中示出。
[0219] 发色度变化率（％ ) = 100X (检体处理液1'的平均测定值V(检体处理液2'的 平均测定值）
[0220] 100%表示没有变化，数值越小表示对含有唾液的检体的灵敏度降低越大。
[0221] 比较例8
[0222] 除了在比较例7中在样本滴加部中不含SDS以外，重复比较例7。结果在表3以及 图4中示出。
[0223] 比较例9
[0224] 除了在比较例7中在检体稀释液中不含烷基葡糖苷类以外，重复比较例7。结果在 表3以及图4中示出。
[0225] 比较例10
[0226] 除了在比较例7中在检体稀释液中不含烷基葡糖苷类、在样本滴加部中不含SDS 以外，重复比较例7。结果在表3以及图4中示出。
[0227][表3]
[0229] 关于表3和图4中示出的比较例7~10的结果，将被检测物质设为腺病毒的情况 下，即使检体处理液中含有烷基葡糖苷类和阴离子型表面活性剂，也几乎看不到其发色度 变化率上的差异。由此可知，本申请发明中，通过将"含有唾液的血液检体中的糖化蛋白质" 用作被检测物质，能够得到被检测物质的灵敏度提高这样的效果。
[0230] 实施例6
[0231] 除了在实施例1的检体处理液1的制备中，使用HbAlc浓度为5. 5%、6. 0%、6. 5% 的各种血液，并且仅对含有唾液的血液检体进行分析以外，重复实施例1。另外，在免疫层析 分析中，不使用免疫层析阅读器，而是以目视判定检测部的发色程度。结果在表4中示出。 需要说明的是，表中的评价基准如下。
[0232] +:能够确认红色发色
[0233] ++ :能够确认强的红色的发色
[0234] +++ :能够确认非常强的红色的发色
[0235][表 4]
[0237] 实施例7
[0238] 除了代替实施例6中的检体处理液1而使用检体处理液3对含有唾液的血液试验 检体进行试验以外，重复实施例6。目视判定，结果确认了非常强的红色发色（+++)。另外， 以牙间刷采集HbAlc浓度为6. 5%以上的糖尿病患者的血液检体，在用检体稀释液稀释处 理至1000倍进行试验的情况下，获得了同样的结果。
[0239] 尽管用特定的实施方案对本发明的进行了详细地说明，但是对本领域技术人员而 言应该清楚，可以在不脱离本发明的意图和范围的情况下进行各种变更和变形。需要说明 的是，本申请基于2014年4月30日提交的日本专利申请（特愿2014-093844)，其全文通过 引用并入本文。
【主权项】
1. 一种免疫层析分析试剂盒，其含有用于稀释并展开从口腔内采集的血液检体的检体 稀释液和免疫层析分析装置，该免疫层析分析装置包括样本添加部、标记物保持部、担载有 检测部的层析介质部以及吸收部。2. 根据权利要求1所述的免疫层析分析试剂盒，其中在所述检体稀释液以及所述检测 部的展开方向上游的至少一者中含有烷基葡糖苷类以及阴离子型表面活性剂。3. 根据权利要求1或2所述的免疫层析分析试剂盒，其中所述血液检体中的被检测物 质为血液中的糖化蛋白质。4. 根据权利要求3所述的免疫层析分析试剂盒，其中所述糖化蛋白质为HbAlc。5. 根据权利要求2~4中任意一项所述的免疫层析分析试剂盒，其中所述烷基葡糖苷 类为含有碳数为5~15的烷基的烷基葡糖苷或者烷基麦芽苷。6. 根据权利要求2~5中任意一项所述的免疫层析分析试剂盒，其中所述阴离子型表 面活性剂为选自由十二烷基磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠以及聚氧乙烯月桂基醚硫酸钠组成 的组中的一种以上。7. 根据权利要求2~6中任意一项所述的免疫层析分析试剂盒，其中在所述检测部的 展开方向上游含有1~1700yg的所述烷基葡糖苷类、和8~800yg的所述阴离子型表面 活性剂。8. 根据权利要求1~7中任意一项所述的免疫层析分析试剂盒，其特征在于，使用牙间 刷从口腔内采集血液检体。9. 一种免疫层析分析装置，其用于检测从口腔内采集的血液检体中的被检测物质，并 且包括样本添加部、标记物保持部、担载有检测部的层析介质部以及吸收部，其中在所述检 测部的展开方向上游含有烷基葡糖苷类以及阴离子型表面活性剂。10. -种免疫层析分析方法，其为这样一种方法：使用包括样本添加部、标记物保持 部、担载有检测部的层析介质部以及吸收部的免疫层析分析装置，检测从口腔内采集的血 液检体中所含的被检测物质，该方法包括以下工序（1)~（4): (1) 向样本添加部中添加检体处理液的工序，所述检体处理液通过检体稀释液对所述 血液检体进行稀释而得到； (2) 通过标记物保持部中所保持的标记物识别被检测物质的工序； (3) 在烷基葡糖苷类以及阴离子型表面活性剂的存在下，将所述血液检体以及标记物 作为移动相在层析介质部中展开的工序； (4) 用检测部检测展开后的移动相中的被检测物质的工序。
【专利摘要】本发明的课题在于提供一种免疫层析分析试剂盒，其中即使是从口腔内采集的含有唾液的血液检体，也能够实现高灵敏度的检测，并且可以在没有感觉到疼痛和压力的情况下进行免疫层析分析，通过以下免疫层析分析试剂盒来解决上述课题：其中，在检体稀释液以及检测部的展开方向上游的至少一者中含有烷基葡糖苷类以及阴离子型表面活性剂。本发明还提供一种免疫层析分析装置以及免疫层析分析方法。
【IPC分类】G01N33/558
【公开号】CN104931696
【申请号】CN201510218282
【发明人】冈本浩治, 加藤佑弥, 伊藤大辅, 宫田亚纪, 中岛晓
【申请人】田中贵金属工业株式会社
【公开日】2015年9月23日
【申请日】2015年4月30日
【公告号】WO2015166969A1