一种检测葡萄汁中多种有机酸的含量及其真伪的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于分析化学和食品鉴伪领域，具体涉及葡萄汁中多种有机酸的含量测定 方法以及葡萄汁真伪鉴定方法。
【背景技术】
[0002] 葡萄营养价值很高，除含有多种有机酸、矿物质、维生素和人体必需氨基酸外，还 含白藜芦醇、原花青素、花青素、儿茶素和黄酮类化合物等多种生物活性物质，具有清除自 由基和抗氧化活性、保护心脏、提高免疫力等多种生理功能，因此，近年来葡萄汁及葡萄汁 制品已成为国际上流行的饮品。在巨大的市场需求刺激下，掺入其他果汁的葡萄汁冒充纯 葡萄汁的现象时有发现，因此，如何快速准确鉴别纯葡萄汁的真伪是消费者、生产者和质检 管理机构的迫切需求。
[0003] 有机酸是水果生长过程中次生代谢的产物，其组成和含量是不同种类纯果汁固有 的品质属性，利用纯果汁中有机酸的种类和含量的差异性，可以建立纯果汁有机酸成分的 指纹图谱，结合化学计量学方法对掺假样品进行分析和判定。目前对有机酸的检测方法主 要有包括反相液相色谱（RP-HPLC)法、离子交换色谱（IEC)、毛细管电泳（HPCE)和气相色 谱。其中离子交换色谱法具有前处理简单、同时分析多种有机酸的优点，但有时出现分析结 果重现性不稳定的问题，需要通过多检测器联用的方法解决。毛细管电泳存在由于小分子 有机酸紫外吸收极低，常规紫外检测（UV)的灵敏度不高。而气相色谱测定有机酸时前处理 过程较复杂。反相高效液相色谱法（RP-HPLC)具有快速、灵敏、适用性广等优点被广泛配置 和使用。有机酸易溶于水，能被RP-HPLC较好分析和鉴定，目前在水果、果汁及果酒中有机 酸的检测中RP-HPLC被广泛应用。但同时测定葡萄汁中多种有机酸的含量，并以此为基础 鉴定葡萄汁真伪的方法尚未见文献报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的一个目的是提供一种同时测定葡萄汁中多种有机酸含量的HPLC方法， 本发明的另一个目的是提供一种葡萄汁的真伪鉴别方法。
[0005] 上述目的是通过以下技术方案实现的：
[0006] -种同时测定葡萄汁中多种有机酸含量的方法，它是将待测样品提取后用高效液 相色谱仪同时检测酒石酸、苹果酸、抗坏血酸、乳酸、柠檬酸、乙酸、富马酸、琥珀酸的含量， 所述高效液相色谱仪含有DAD检测器，所述DAD检测器的设定检测波长为210nm，所述高效 液相色谱仪的色谱柱为反相柱，流动相是甲醇和pH为2. 8的磷酸二氢铵缓冲溶液，所述甲 醇与磷酸二氢铵缓冲溶液的体积比为1 : 99,所述反相柱的柱温为30°C，流速为0.8mL/ min〇
[0007] 优选地，所述方法包括以下步骤：
[0008] 1)精密称取干燥至恒重的酒石酸、苹果酸、抗坏血酸、乳酸、柠檬酸、乙酸、富马酸 及琥珀酸对照品各l〇mg，用超纯水溶解后定容至10mL，用0. 22ym微孔滤膜过滤，作为对照 品溶液；
[0009] 2)取待测样品5mL，加甲醇和pH为2. 8的磷酸二氢铵缓冲溶液稀释至25mL，所 述甲醇与磷酸二氢铵缓冲溶液的体积比为1 : 99,超声混匀后，离心，取上清液lmL经 0. 22ym微孔滤膜过滤，作为样品溶液；
[0010] 3)色谱条件与系统适应性：色谱柱为反相柱，固定相为极性包埋C18键合硅胶；甲 醇和pH为2. 8的磷酸二氢铵缓冲溶液为流动相，甲醇与磷酸二氢铵缓冲溶液的体积比为 1 : 99 ;DAD检测器，检测波长为210nm;柱温30°C;流速为0. 8mL/min;
[0011] 4)分别精密吸取对照品溶液与样品溶液各10y1注入液相色谱仪进行检测。
[0012] -种葡萄汁真伪鉴定方法，它包括以下步骤：
[0013] 1)按照上述方法测定葡萄汁中多种有机酸的含量；
[0014] 2)选择真葡萄汁中测定出的七种有机酸（酒石酸、苹果酸、抗坏血酸、乳酸、柠檬 酸、富马酸、琥珀酸）的含量为建模指标，采用Logistic回归方法对建模指标进行处理，将 真葡萄汁的Jr值记做1，伪葡萄汁的Jr值记做〇,可以得到Logistic模型的参数拟合：
[0015]
[0016] 将步骤1)测得的七种有机酸（酒石酸、苹果酸、抗坏血酸、乳酸、柠檬酸、富马酸、 琥珀酸）的含量代入上式，计算值，值为1的是真葡萄汁，值为〇的是伪葡萄汁，式 中，&、&、&、&、&、&、^分别代表酒石酸、苹果酸、抗坏血酸、乳酸、柠檬酸、富马酸、琥珀酸 的含量，单位为mg/mL。
[0017] 本发明的有益效果是：
[0018] 1)本发明采用反相高效液相色谱法测定葡萄汁中有机酸的含量，能同时测出八种 有机酸的含量，检测准确度高、精密度好、误差小，适用于葡萄汁中有机酸的快速定性和定 量分析。
[0019] 2)本发明采用七种有机酸的含量为建模指标，采用Logistic回归方法得到 Logistic模型的参数拟合，通过该模型和测得的有机酸含量，能准确地鉴别出葡萄汁的真 伪，真伪鉴别的正确率达90%以上。
【附图说明】
[0020] 图1为对照品溶液的HPLC检测图谱，图中：1.酒石酸；2.苹果酸；3.抗坏血酸； 4.乳酸；5.乙酸；6.柠檬酸；7.富马酸；8.琥珀酸。
[0021] 图2为样品溶液的HPLC检测图谱，图中：1.酒石酸；2.苹果酸；3.抗坏血酸；4.乳 酸；5.柠檬酸；6.富马酸；7.琥珀酸。
【具体实施方式】
[0022] 以下结合实施例对本发明进行详细地说明。
[0023] 实施例1
[0024] 1.同时检测葡萄汁中多种有机酸的含量
[0025] a、精密称取减压干燥至恒质量的酒石酸、苹果酸、抗坏血酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、 富马酸及琥珀酸对照品各10.Omg，用超纯水溶解后定容于lOmL容量瓶中，用0. 22ym微孔 滤膜过滤。
[0026] b、取葡萄汁样品5mL加流动相稀释至25mL，超声混勾后，离心（9000rpm/ min,lOmin)，取上清液lmL经0. 22ym微孔滤膜过滤得到样品。
[0027] c、将a、b制得的样品在如下条件下分析：ThermoHypersilGoldaQC18柱 (250X4.6mm，5ym);流动相：甲醇：磷酸二氢铵缓冲溶液（0.02mol/L，pH为2.8)= 1 : 99(V/V);进样量：10yL;流速：0. 8mL/min;色谱柱温度：30°C;检测器：DAD;检测波长： 210nm。采用等梯度洗脱。
[0028] 得对应到峰面积，按下列公式计算有机酸含量：
[0029] 含量（cx) =crXAx/Ar
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