小鼠血清中大鼠抗体的特异性检测的制作方法
【专利说明】小鼠血清中大鼠抗体的特异性检测
[0001] 本发明报道了单克隆抗体的混合物在免疫测定中作为捕获和示踪抗体用于测量 获自小鼠的样品中总的、活性或抗原结合的大鼠抗体的浓度的用途。
【背景技术】
[0002] 相当大量的单克隆抗体正在研究中，并且需要在出于初次试验目的考虑进入人体 之前在实验动物中考察。正要提到的其中两个重要标准如生物有效性和抗体清除必须进行 研究。许多这些研究要求对实验动物自身抗体背景中的抗体进行量化。在大多数情形中， 使用哺乳动物作为实验动物。毒理学常常首先在啮齿动物如小鼠或大鼠中加以评价。
[0003] 哺乳动物通常在循环中具有大约10至大约30毫克抗体/ml。单克隆抗体通常必 须以范围在大约1纳克/ml至大约100微克/ml的血清水平测试。因此，考察的抗体必须 针对过量大约100倍至1千万倍的实验动物抗体背景而检测。
[0004] 源自与实验动物抗体背景中的实验动物不同的物种的抗体的检测代表着药理学 家非常重大的任务。
[0005] TO 2008/031532中报道了抗药抗体测定。TO 2006/066912中报道了实验动物 中治疗性抗体的检测。US 5, 332, 665中报道了物种特异性的高亲合力单克隆抗体。TO 2011/048043中报道了非交叉反应性抗-IgG抗体。
【发明内容】
[0006] 本文一方面报道了单克隆抗体的混合物在免疫测定中作为捕获和示踪抗体用于 测量获自小鼠的样品中总的、活性或抗原结合的大鼠抗体的浓度的用途。
[0007] 本文一方面报道了检测（获）自小鼠的血清或血浆样品中大鼠抗体的方法，其包 括以下步骤：
[0008] a)提供要分析的样品，
[0009] b)将所述血清或血浆样品与抗体孵育，该抗体与大鼠 IgG特异性结合并且不与小 鼠 IgG特异性结合，例如MAR (K+L)或MRGC0C-1，
[0010] C)任选地将所述样品与适合于选择性地检测总的、活性或抗原结合的大鼠抗体的 试剂孵育，和
[0011] d)将（b)或（C)中形成的复合物与样品中大鼠抗体的浓度关联。
[0012] 本文一方面报道了检测（获）自小鼠的血清或血浆样品中大鼠抗体的方法，其包 括以下步骤：
[0013] a)提供要分析的样品，
[0014] b)将所述血清或血浆样品与抗体孵育，该抗体与大鼠 IgG特异性结合并且不与小 鼠 IgG特异性结合，其中该抗体是
[0015] i)与大鼠 κ轻链结合的抗体和与大鼠 λ轻链结合的抗体的混合物；或
[0016] ii)以4. Ix IOwM 1或更高的亲合力与大鼠 IgGl结合的抗体、以8. 6x 10 9M 1或更 高的亲合力与大鼠 IgG2a结合的抗体、以6. 4x IOwM 1或更高的亲合力与大鼠 IgG2b结合的 抗体和以9. 5x IOwM 1或更高的亲合力与大鼠 IgG2c结合的抗体的混合物。
[0017] c)任选地将所述样品与适合于选择性地检测总的、活性或抗原结合的大鼠抗体的 试剂孵育，和
[0018] d)将（b)或（c)中形成的复合物与样品中大鼠抗体的浓度关联。
[0019] 本文一方面报道了检测（获）自小鼠的血清或血浆样品中大鼠抗体的方法，其包 括以下步骤：
[0020] a)将所述血清或血浆样品与和抗体MAR(K+L)或MRGC0C-1结合相同表位的抗体孵 育，
[0021] b)任选地将所述血清或血浆样品与适合于选择性地检测总的、活性或抗原结合的 治疗性抗体的试剂孵育，和
[0022] c)将（a)或（b)中形成的复合物与所述治疗性抗体的存在和/或浓度关联。
[0023] 本文一方面报道了检测（获）自小鼠的血清或血浆样品中大鼠抗体的方法，其包 括以下步骤：
[0024] a)将所述血清或血浆样品与抗体孵育，所述抗体是与至少两种不同的表位结合的 单克隆抗体的混合物；
[0025] b)任选地将所述血清或血浆样品与适合于选择性地检测总的、活性或抗原结合的 治疗性抗体的试剂孵育；和
[0026] c)将（a)或（b)中形成的复合物与所述治疗性抗体的存在和/或浓度关联。
[0027] 本文一方面报道了检测（获）自小鼠的血清或血浆样品中大鼠抗体的方法，其包 括以下步骤：
[0028] a)将所述血清或血浆样品与缀合至固相的捕获抗体孵育，从而形成捕获抗体-大 鼠抗体复合物，
[0029] b)将（a)中形成的复合物与示踪抗体孵育，从而将（a)中形成的复合物与所述大 鼠抗体的存在或浓度关联，
[0030] 其中捕获抗体是与至少两种不同的表位结合的单克隆抗体的混合物。
[0031] 在所有方面的一实施方式中，捕获抗体和示踪抗体各自为与至少两种不同的表位 结合的单克隆抗体的混合物。
[0032] 在所有方面的一实施方式中，捕获抗体是与抗体MAR(K+L)或抗体MRGC0C-1结合 相同表位的单克隆抗体的混合物。
[0033] 在所有方面的一实施方式中，捕获抗体是
[0034] i)与大鼠 κ轻链结合的抗体和与大鼠 λ轻链结合的抗体的混合物；或
[0035] ii)以4. Ix IOwM 1或更高的亲合力与大鼠 IgGl结合的抗体、以8. 6x 10 9M 1或更 高的亲合力与大鼠 IgG2a结合的抗体、以6. 4x IOwM 1或更高的亲合力与大鼠 IgG2b结合的 抗体和以9. 5x IOwM 1或更高的亲合力与大鼠 IgG2c结合的抗体的混合物。
[0036] 在所有方面的一实施方式中，示踪抗体是与抗体MAR(K+L)或抗体MRGC0C-1结合 相同表位的单克隆抗体的混合物。
[0037] 在所有方面的一实施方式中，示踪抗体是
[0038] i)与大鼠 κ轻链结合的抗体和与大鼠 λ轻链结合的抗体的混合物；或
[0039] ii)以4. Ix IOwM 1或更高的亲合力与大鼠 IgGl结合的抗体、以8. 6x 10 9M 1或更 高的亲合力与大鼠 IgG2a结合的抗体、以6. 4x IOwM 1或更高的亲合力与大鼠 IgG2b结合的 抗体和以9. 5x IOwM 1或更高的亲合力与大鼠 IgG2c结合的抗体的混合物。
[0040] 在所有方面的一实施方式中，捕获抗体和示踪抗体彼此独立地是与抗体MAR (K+L) 或抗体MRGC0C-1结合相同表位的单克隆抗体的混合物。
[0041] 在所有方面的一实施方式中，示踪抗体和捕获抗体彼此独立地是
[0042] i)与大鼠 κ轻链结合的抗体和与大鼠 λ轻链结合的抗体的混合物；或
[0043] ii)以4. Ix IO10M 1或更高的亲合力与大鼠 IgGl结合的抗体、以8. 6x 10 9M 1或更 高的亲合力与大鼠 IgG2a结合的抗体、以6. 4x IOwM 1或更高的亲合力与大鼠 IgG2b结合的 抗体和以9. 5x IOwM 1或更高的亲合力与大鼠 IgG2c结合的抗体的混合物。
[0044] 本文一方面报道了检测获自小鼠的血清或血浆样品中大鼠抗体的方法，其包括以 下步骤：
[0045] a)将所述血清或血浆样品与缀合至固相的捕获抗体孵育，从而形成捕获抗体-大 鼠抗体复合物，
[0046] b)将（a)中形成的复合物与示踪抗体孵育，从而将（a)中形成的复合物与所述大 鼠抗体的存在或浓度关联，
[0047] 其中捕获抗体是与抗体MAR(K+L)或抗体MRGC0C-1结合相同表位的单克隆抗体的 混合物。
[0048] 本文一方面报道了检测（获）自小鼠的血清或血浆样品中大鼠抗体的方法，其包 括以下步骤：
[0049] a)将所述血清或血浆样品与缀合至固相的捕获抗体孵育，从而形成捕获抗体-大 鼠抗体复合物，
[0050] b)将（a)中形成的复合物与示踪抗体孵育，从而将（a)中形成的复合物与所述大 鼠抗体的存在或浓度关联，
[0051] 其中捕获抗体是
[0052] i)与大鼠 κ轻链结合的抗体和与大鼠 λ轻链结合的抗体的混合物；或
[0053] ii)以4. Ix IO10M 1或更高的亲合力与大鼠 IgGl结合的抗体、以8. 6x 10 9M 1或更 高的亲合力与大鼠 IgG2a结合的抗体、以6. 4x IOwM 1或更高的亲合力与大鼠 IgG2b结合的 抗体和以9. 5x IOwM 1或更高的亲合力与大鼠 IgG2c结合的抗体的混合物。
[0054] 本文一方面报道了检测获自小鼠的血清或血浆样品中大鼠抗体的方法，其包括以 下步骤：
[0055] a)将所述血清或血浆样品与缀合至固相的捕获抗体孵育，从而形成捕获抗体-大 鼠抗体复合物，
[0056] b)将（a)中形成的复合物与示踪抗体孵育，从而将（a)中形成的复合物与所述大 鼠抗体的存在或浓度关联，
[0057] 其中示踪抗体是与抗体MAR(K+L)或抗体MRGC0C-1结合相同表位的单克隆抗体的 混合物。
[0058] 本文一方面报道了检测（获）自小鼠的血清或血浆样品中大鼠抗体的方法，其包 括以下步骤：
[0059] a)将所述血清或血浆样品与缀合至固相的捕获抗体孵育，从而形成捕获抗体-大 鼠抗体复合物，
[0060] b)将（a)中形成的复合物与示踪抗体孵育，从