9] 表6、图12和图13的判定的基准如下所述。
[0290] 〇…能够将HbAO、HbE、HbD适当分离
[0291] A…能够将HbAO、HbE、HbD分离，但峰过于接近或者其分离需要大量时间
[0292] X…能够将HbAO、HbE、HbD中的两种分离
[0293] 图12中，由点划线表示的最大的框示出了洗脱液L的渗透压和pH的优选的范围， 由虚线表示的框示出了洗脱液L的渗透压和pH的更优选的范围，由点线表示的最小的框示 出了洗脱液L的渗透压和pH的进一步优选的范围。
[0294] 图13中，由点划线表示的最大的框示出了洗脱液L的成分2/成分1的范围和渗 透压的优选的范围，由虚线表示的框示出了洗脱液L的成分2/成分1的优选的范围和渗透 压的更优选的范围，由点线表示的最小的框示出了洗脱液L的成分2/成分1的更优选的范 围和渗透压的进一步优选的范围。
[0295] [实验 2]
[0296] 接着，将成分1和成分2以各种含有率混合，求出洗脱液M的成分2/成分1、优选 的渗透压和优选的pH的范围。其结果如表7、图14和图15所示。图14表示洗脱液M的渗 透压与PH的关系，图15表示洗脱液M的渗透压与成分2/成分1的关系。需要说明的是， 表7的M液是组成与实施例1中制备的洗脱液M相同的洗脱液。
[0297] [表 7]
[0298]
[0299] 表7、图14和图15的判定的基准如下所述。
[0300] 〇…能够将HbC、HbCS适当分离
[0301] A…能够将HbC、HbCS分离，但峰过于接近或者其分离需要大量时间
[0302] X…不能将HbC、HbCS分离
[0303] 图14中，由点划线表示的最大的框示出了洗脱液M的渗透压和pH的优选的范围， 由虚线表示的框示出了洗脱液M的渗透压和pH的更优选的范围，由点线表示的最小的框示 出了洗脱液M的渗透压和pH的进一步优选的范围。
[0304] 图15中，由点划线表示的最大的框示出了洗脱液M的成分2/成分1的范围和渗 透压的优选的范围，由虚线表示的框示出了洗脱液M的成分2/成分1的优选的范围和渗透 压的更优选的范围，由点线表示的最小的框示出了洗脱液M的成分2/成分1的更优选的范 围和渗透压的进一步优选的范围。
[0305] [实验 3]
[0306] 接着，将成分1和成分2以各种含有率混合，求出洗脱液0的成分2/成分1、优选 的渗透压和优选的pH的范围。其结果如表8、图16和图17所示。图16表示洗脱液O的渗 透压与PH的关系，图17表示洗脱液O的渗透压与成分2/成分1的关系。需要说明的是， 表8的O液是组成与实施例1中制备的洗脱液O相同的洗脱液。
[0307] [表 8]
[0308]
[0309] 表8、图16和图17的判定的基准如下所述。
[0310] 〇…能够将HbBart's、HbF适当分离
[0311] A…能够将HbBart's、HbF分离，但峰过于接近或者其分离需要大量时间
[0312] X…不能将HbBart's、HbF分离
[0313] 图16中，由点划线表示的最大的框示出了洗脱液0的渗透压和pH的优选的范围， 由虚线表示的框示出了洗脱液0的渗透压和PH的更优选的范围，由点线表示的最小的框示 出了洗脱液0的渗透压和pH的进一步优选的范围。
[0314] 图17中，由点划线表示的最大的框示出了洗脱液0的成分2/成分1的范围和渗 透压的优选的范围，由虚线表示的框示出了洗脱液〇的成分2/成分1的优选的范围和渗透 压的更优选的范围，由点线表示的最小的框示出了洗脱液〇的成分2/成分1的更优选的范 围和渗透压的进一步优选的范围。
[0315] [实验 4]
[0316] 接着，求出洗脱液B的渗透压和pH的范围。其结果如表9、图18所示。图18表示 洗脱液B的渗透压与pH的关系。需要说明的是，表9的B液是组成与实施例1中使用的洗 脱液B相同的洗脱液。
[0317] [表 9]
[0318]
[0319] 表9、图18的判定的的基准如下所述。
[0320] 〇…在与洗脱液A混合进行送液时，能够将HbS、HbC、HbCS适当分离
[0321] A…在与洗脱液A混合进行送液时，能够将HbS、HbC、HbCS中的至少两种分离
[0322] 图18中，示出了洗脱液B的渗透压和pH的范围。
[0323] 需要说明的是，关于上述实施例的效果，利用与上述实施例中使用的柱不同种类 的柱也可以得到同样的效果。
[0324] 上述液相色谱系统中，"能够测定"是指能够溶出并且通过与其他Hb分离而能够进 行测定，根据实施例，能够使用上述洗脱液来对预定的血红蛋白进行测定。
【主权项】
1. 一种测定方法，通过以下的（A)~（D)中的任意一个对选自突变血红蛋白和作为地 中海贫血的标志物的血红蛋白中的至少一种血红蛋白进行测定： (A) 在高效液相色谱中，使用以磷酸一氢二碱金属盐即成分1和磷酸二氢一碱金属盐 即成分2作为成分、成分1的含有率为0. 08质量％以上且0. 50质量％以下、成分2的含有 率为〇. 04质量％以上且1. 2质量％以下、成分2/成分1为0. 4以上且10以下的洗脱液即 洗脱液L; (B) 在高效液相色谱中，使用以磷酸一氢二碱金属盐即成分1和磷酸二氢一碱金属盐 即成分2作为成分、成分1的含有率低于0. 07质量％、成分2的含有率超过1. 4质量％且 在2. 0质量％以下、成分2/成分1超过20的洗脱液即洗脱液O; (C) 在高效液相色谱中，使用以磷酸一氢二碱金属盐即成分1和磷酸二氢一碱金属盐 即成分2作为成分、成分1的含有率为0. 40质量％以上且低于1. 04质量％、成分2的含有 率超过0. 26质量％且在0. 88质量％以下、成分2/成分1超过0. 25且在2. 2以下的洗脱 液即洗脱液M; (D) 在高效液相色谱中，组合输送选自由下述洗脱液组成的组中的至少两种洗脱液： 以磷酸一氢二碱金属盐即成分1和磷酸二氢一碱金属盐即成分2作为成分、成分1的 含有率为0. 08质量％以上且0. 50质量％以下、成分2的含有率为0. 04质量％以上且1. 2 质量％以下、成分2/成分1为0. 4以上且10以下的洗脱液即洗脱液L、 以磷酸一氢二碱金属盐即成分1和磷酸二氢一碱金属盐即成分2作为成分、成分1的 含有率低于〇. 07质量％、成分2的含有率超过1. 4质量％且在2. 0质量％以下、成分2/成 分1超过20的洗脱液即洗脱液0、和 以磷酸一氢二碱金属盐即成分1和磷酸二氢一碱金属盐即成分2作为成分、成分1的 含有率为0. 40质量％以上且低于1. 04质量％、成分2的含有率超过0. 26质量％且在0. 88 质量％以下、成分2/成分1超过0. 25且在2. 2以下的洗脱液即洗脱液M。2. 如权利要求1所述的测定方法，其中，所述⑶中，基于下述⑴~（III)中的任意 一个输送洗脱液： (I) 输送选自由所述洗脱液L、所述洗脱液0和所述洗脱液M组成的组中的至少一种洗 脱液，或者将选自由所述洗脱液L、所述洗脱液0和所述洗脱液M组成的组中的至少两种洗 脱液不混合而依次进行输送； (II) 输送将选自由所述洗脱液L、所述洗脱液0和所述洗脱液M组成的组中的两种以 上的洗脱液混合而形成的至少一种混合液； (III) 依次输送选自由所述洗脱液L、所述洗脱液0和所述洗脱液M组成的组中的至少 一种洗脱液以及将选自由所述洗脱液L、所述洗脱液0和所述洗脱液M组成的组中的两种以 上的洗脱液混合而形成的至少一种混合液。3. 如权利要求1或2所述的测定方法，其中，所述（D)中，基于下述（a)或（b)输送混 合液： (a) 输送将所述洗脱液0和所述洗脱液M中的至少一种洗脱液与所述洗脱液L混合而 形成的至少一种混合液； (b) 输送将所述洗脱液L、所述洗脱液L和所述洗脱液0混合而形成的混合液、以及将 所述洗脱液M和所述洗脱液L混合而形成的混合液。4. 如权利要求3所述的测定方法，其中，通过所述（b)测定的血红蛋白类为HbBart's、 HbH、HbF、HbAlc、HbAO、HbA2、HbE、HbD、HbS、HbC和HbConstantSpring中的至少一种。5. 如权利要求1~4中任一项所述的测定方法，其满足以下的⑴~（5)中的至少一 个： (1) 使用所述洗脱液L，所述洗脱液L的渗透压为35m0sm以上且200m0sm以下； (2) 使用所述洗脱液0,所述洗脱液0的渗透压为170m0sm以上且290m0sm以下； (3) 使用所述洗脱液M，所述洗脱液M的渗透压为160m0sm以上且210m0sm以下； (4) 使用将所述洗脱液L和所述洗脱液0混合而形成的混合液，所述洗脱液的混合比为 洗脱液L:洗脱液0 = 1:2~1:4 ; (5) 使用将所述洗脱液M和所述洗脱液L混合而形成的混合液，所述洗脱液的混合比为 洗脱液M:洗脱液L= 1:2~1: 4。6. 如权利要求1~5中任一项所述的测定方法，其满足以下的（6)~⑶中的至少一 个： (6) 进一步使用pH为5. 30以上且5. 40以下、渗透压为204m0sm以上且210m0sm以下 的洗脱液即洗脱液A; (7) 进一步使用pH为7. 85以上且8. 25以下、渗透压为350m0sm以上且600m0sm以下 的洗脱液即洗脱液B; (8) 进一步使用将pH为7. 85以上且8. 25以下、渗透压为350m0sm以上且600m0sm以 下的洗脱液即洗脱液B和pH为5. 30以上且5. 40以下、渗透压为204m0sm以上且210m0sm 以下的洗脱液即洗脱液A以混合比为洗脱液B:洗脱液A= 1:2~1:4的方式混合而形成 的混合液。7. 如权利要求6所述的测定方法，其中，通过所述（8)测定的血红蛋白类为HbBart's、 HbH、HbF、HbAlc、HbAO、HbA2、HbE、HbD、HbS、HbC和HbConstantSpring中的至少一种。8. -种测定装置，用于对血红蛋白类进行测定，其具备： 送液栗，在高效液相色谱中，将选自由下述洗脱液组成的组中的洗脱液单独输送或组 合输送： 以磷酸一氢二碱金属盐即成分1和磷酸二氢一碱金属盐即成分2作为成分、成分1的 含有率为0. 08质量％以上且0. 50质量％以下、成分2的含有率为0. 04质量％以上且1. 2 质量％以下、成分2/成分1为0. 4以上且10以下的洗脱液即洗脱液L、 以磷酸一氢二碱金属盐即成分1和磷酸二氢一碱金属盐即成分2作为成分、成分1的 含有率低于〇. 07质量％、成分2的含有率超过1. 4质量％且在2. 0质量％以下、成分2/成 分1超过20的洗脱液即洗脱液0、和 以磷酸一氢二碱金属盐即成分1和磷酸二氢一碱金属盐即成分2作为成分、成分1的 含有率为0. 40质量％以上且低于1. 04质量％、成分2的含有率超过0. 26质量％且在0. 88 质量％以下、成分2/成分1超过0. 25且在2. 2以下的洗脱液即洗脱液M;以及 分离用柱，与所述送液栗连接而被输送所述洗脱液。9. 如权利要求8所述的测定装置，其中，所述送液栗基于下述（I)~（III)中的任意一 个输送洗脱液： (I)输送选自由所述洗脱液L、所述洗脱液0和所述洗脱液M组成的组中的至少一种洗 脱液，或者将选自由所述洗脱液L、所述洗脱液O和所述洗脱液M组成的组中的至少两种洗 脱液不混合而依次进行输送； (II) 输送将选自由所述洗脱液L、所述洗脱液O和所述洗脱液M组成的组中的两种以 上的洗脱液混合而形成的至少一种混合液； (III) 依次输送选自由所述洗脱液L、所述洗脱液O和所述洗脱液M组成的组中的至少 一种洗脱液以及将选自由所述洗脱液L、所述洗脱液O和所述洗脱液M组成的组中的两种以 上的洗脱液混合而形成的至少一种混合液。10. 如权利要求8或9所述的测定装置，其中，进一步输送作为所述洗脱液的pH为5. 30 以上且5. 40以下、渗透压为204m0sm以上且210m0sm以下的洗脱液即洗脱液A和pH为7. 85 以上且8. 25以下、渗透压为350m0sm以上且600m0sm以下的洗脱液即洗脱液B中的至少一 种，或者，进一步输送将所述洗脱液A和所述洗脱液B混合而形成的混合液。11. 如权利要求8~10中任一项所述的测定装置，其中，所述送液栗为一个。12. 以下的⑴~（3)中的任意一种洗脱液： (1) 在高效液相色谱中用于测定选自突变血红蛋白和作为地中海贫血的标志物的血红 蛋白中的至少一种血红蛋白的、以磷酸一氢二碱金属盐即成分1和磷酸二氢一碱金属盐即 成分2作为成分、成分1的含有率为0. 08质量％以上且0. 50质量％以下、成分2的含有率 为0. 04质量％以上且1. 2质量％以下、成分2/成分1为0. 4以上且10以下的洗脱液即洗 脱液L; (2) 在高效液相色谱中用于测定选自突变血红蛋白和作为地中海贫血的标志物的血红 蛋白中的至少一种血红蛋白的、以磷酸一氢二碱金属盐即成分1和磷酸二氢一碱金属盐即 成分2作为成分、成分1的含有率低于0. 07质量％、成分2的含有率超过1. 4质量％且在2. 〇质量％以下、成分2/成分1超过20的洗脱液即洗脱液0。 (3) 在高效液相色谱中用于测定选自突变血红蛋白和作为地中海贫血的标志物的血红 蛋白中的至少一种血红蛋白的、以磷酸一氢二碱金属盐即成分1和磷酸二氢一碱金属盐即 成分2作为成分、成分1的含有率为0. 40质量％以上且低于1. 04质量％、成分2的含有率 超过0. 26质量％且在0. 88质量％以下、成分2/成分1超过0. 25且在2. 2以下的洗脱液 即洗脱液M。13. -种洗脱液的组合，包含选自由在高效液相色谱中用于测定选自突变血红蛋白和 作为地中海贫血的标志物的血红蛋白中的至少一种血红蛋白的下述洗脱液组成的组中的 至少两种洗脱液： 以磷酸一氢二碱金属盐即成分1和磷酸二氢一碱金属盐即成分2作为成分、成分1的 含有率为0. 08质量％以上且0. 50质量％以下、成分2的含有率为0. 04质量％以上且1. 2 质量％以下、成分2/成分1为0. 4以上且10以下的洗脱液即洗脱液L、 以磷酸一氢二碱金属盐即成分1和磷酸二氢一碱金属盐即成分2作为成分、成分1的 含有率低于〇. 07质量％、成分2的含有率超过1. 4质量％且在2. 0质量％以下、成分2/成 分1超过20的洗脱液即洗脱液0、和 以磷酸一氢二碱金属盐即成分1和磷酸二氢一碱金属盐即成分2作为成分、成分1的 含有率为0. 40质量％以上且低于1. 04质量％、成分2的含有率超过0. 26质量％且在0. 88 质量％以下、成分2/成分1超过0. 25且在2. 2以下的洗脱液即洗脱液M。
【专利摘要】本发明提供对选自突变血红蛋白和作为地中海贫血的标志物的血红蛋白中的至少一种血红蛋白进行测定的测定方法、测定装置及洗脱液。对选自突变血红蛋白和作为地中海贫血的标志物的血红蛋白中的至少一种血红蛋白进行测定的测定方法中，在高效液相色谱中，使用以磷酸一氢二碱金属盐(成分1)和磷酸二氢一碱金属盐(成分2)作为成分、成分1的含有率为0.08质量％以上且0.5质量％以下、成分2的含有率为0.04质量％以上且1.2质量％以下、成分2/成分1为0.4以上且10以下的洗脱液(洗脱液L)。
【IPC分类】G01N30/26
【公开号】CN105223299
【申请号】CN201510363305
【发明人】石川一辉, 酒井敏克
【申请人】爱科来株式会社
【公开日】2016年1月6日
【申请日】2015年6月26日
【公告号】EP2960648A1, US20150377846