ml 离心管中，制成本底对照培养管（N)，2-8°C保存；
[0151] (3)阳性对照培养管（P):
[0152] (3. 1)在超净工作台中将Iml已灭菌的磷酸盐缓冲溶液加入到IOmg植物凝集素试 剂瓶中，颠倒混匀，溶解15分钟，配制成lOmg/ml的植物凝集素母液；
[0153] (3. 2)取植物凝集素母液0. 3ml和已灭菌的磷酸盐缓冲溶液59. 7ml转移至灭菌后 的试剂瓶中，轻轻搅拌混匀，配制成50ug/ml的植物凝集素工作液；
[0154] (3. 3)量取植物凝集素工作液52. 5ml和AMI-V培养基122. 5ml转移至试剂瓶中， 轻轻搅拌混匀，制成阳性对照培养液；
[0155] (3. 4)在超净工作台中将阳性对照培养液按照50ul/管的量分装到已灭菌的2ml 离心管中，制成阳性对照培养管（P)，2-8°C保存。
[0156] 实施例4 γ -干扰素标准品、质控品的制备
[0157] γ -干扰素标准品、质控品稀释液的配置：
[0158] (1)标准品稀释液的配置
[0159] 称取牛血清白蛋白IOg至试剂瓶中，称取加入988. 8g的IOmM pH 7. 4的磷酸盐缓 冲溶液，搅拌至完全溶解；再量取0. 2ml的proclin-300加入上述试剂瓶中，搅拌至完全溶 解，配置成标准品、质控品稀释液。
[0160] (2)标准品配置
[0161] 标准品高值母液（lng/ml)的配置：称重法称取Ig去离子水至Mabtech IFN-γ 标准品（冻干粉）瓶中，复溶，得到浓度为lug/ml。
[0162] 称重法称取标准品稀释液999g复溶的Mabtech IFN- γ标准品（lug/ml) lg，充分 混匀，得到标准品母液（lng/ml)。
[0163] 标准品配置：采用称量法，参见表1进行称量。
[0164] 表1标准品配置称量表
[0166] 表 1 中配置所得 γ -干扰素浓度为 400pg/ml，200pg/ml，100pg/ml，50pg/ml，25pg/ ml，12. 5pg/ml的溶液为标准品，可用于标准曲线定标。
[0167] (3)质控品配置
[0168] 采用称量法，参照表2进行称量。
[0169] 表2质控品配置称量表
[0171] 将表2中所得的γ -干扰素浓度为200pg/ml、50pg/ml的溶液分装在玻璃瓶中，每 瓶装2ml，作为质控品使用，即可获得所述的γ-干扰素质控品，用于定量检测γ-干扰素， 来评估试剂的有效性。
[0172] 实施例5
[0173] 标准曲线制备：
[0174] (1)分别依次等量吸取实例4中配制好的6个不同浓度的标准品溶液50ul及标准 品稀释液50ul，滴加入实例1中制备好的结核T细胞释放γ-干扰素检测微粒悬液中，并做 好相应标记，充分混匀并反应15分钟。
[0175] (2)分别依次等量吸取步骤（1)中反应好的7个混合液70ul，分别滴加入7个实 施例2制备好的结核T细胞释放γ -干扰素检测试剂卡的加样孔中，并做好标记，反应30 分钟。
[0176] (3)依次将步骤⑵中反应好的结核T细胞释放γ-干扰素检测试剂卡放入到 南通利贝尔检测技术开发有限公司生产的荧光免疫定量分析仪中，并检测相应的荧光信号 值，并记录数据：
[0177] (4)重复步骤（1)-(3)的步骤10次，并计算每个浓度相对应的10次信号值的平均 值，如下：
[0178]
[0179] (5)以 400pg/ml，200pg/ml，100pg/ml，50pg/ml，25pg/ml，12. 5pg/ml、0pg/ml 这 7 个浓度的值为y轴，以各浓度相对应的10次信号值的平均值为x轴，做图，见图2.
[0180] (6)将步骤（5)中所获得的标准曲线输入到南通利贝尔检测技术开发有限公司生 产的荧光免疫定量分析仪中，在以后的样本测试中，荧光免疫定量分析仪将根据每次测得 结核T细胞释放γ -干扰素检测试剂卡的荧光信号值，按照制备好的标准曲线自动生成浓 度值。
[0181] 实施例6
[0182] 采用实施例1~5制备的产物；
[0183] (B)检测：
[0184] (1)用设有肝素抗凝的真空采血管，采集4mL的全血样本，2小时内按ImL/管分别 滴加入实施例3制备的"N"、"P "、" T "培养管中，使全血样本与培养管内容物混匀后，37 °C培 养22小时，培养过程中保持培养管直立；
[0185] (2)培养后的"N"、"P"和"T"培养管，以4000转/分钟离心10分钟；
[0186] (3)分别从"~"、"？"、"1'"培养管中，等量取出血浆，取样5〇111;分别等量将血浆滴 加入3支实施例1制备的结核T细胞释放γ-干扰素检测微粒悬浮液管中，充分混勾，并反 应15分钟，同时依次对结核T细胞释放γ -干扰素检测微粒溶液管进行"Ν"、"Ρ"、"Τ"标 记；
[0187] (4)反应结束后再进行取样，取样70ul ;等量取出血浆与结核T细胞释放γ-干扰 素检测微粒悬浮液的混合液，分别等量将混合液滴加入实施例2制备的3块结核T细胞释 放γ-干扰素检测试剂卡的加样孔中，并再反应30分钟，同时依次对结核T细胞释放γ-干 扰素检测试剂卡进行"Ν"、"Ρ"、"Τ"标记；
[0188] (5)将反应好的检测试剂卡按照，"、叩"/'广的顺序分别插入已有标准曲线荧光 免疫定量分析仪中进行检测，仪器将对应生成"^'？"、"1'"检测卡的浓度数值，再根据下表 的判断方法进行分析，显示出相对应的最终结果"阳性"、"阴性"或者"不确定"三个结果中 的一个。
[0189] 单位为：pg/ml
[0192] 实施例7
[0193] 评价方法及其结果：
[0194] (1)阳性参考品符合率
[0195] 将20例临床确诊的结核患者样本按照实施例6的步骤进行操作，检测结果为：其 中10例菌阴结核患者样本检测结果均为阴性，其中10例菌阳结核患者样本9例为阳性，1 例为不确定，阳性符合率为90%，阳性符合率多75%。
[0196] (2)阴性参考品符合率：
[0197] 将20份无结核病临床症状的健康志愿者血样按照实施例6的步骤进行操作，检 测结果为：其中18份样本为阴性，2份样本为不确定，阴性符合率为90%，阴性符合率应 彡 75%〇
[0198] ⑶批内精密性
[0199] (3. 1)用同一批号试剂盒，对高浓度质控品200pg/ml和低浓度质控品50pg/ml分 别重复检测10次，分别等量吸取高浓度质控品和低浓度质控品50ul，滴加入3支结核T细 胞释放γ-干扰素检测微粒悬浮液管中，充分混匀，并反应15分钟；
[0200] (3. 2)反应结束后再进行取样，等量取出质控品与结核T细胞释放γ-干扰素检测 微粒悬浮液的混合液70ul，再将混合液滴加入3块结核T细胞释放γ -干扰素检测试剂卡 的加样孔中，并再反应30分钟；
[0201] (3. 3)将反应好的结核T细胞释放γ -干扰素检测试剂卡放入到南通利贝尔检测 技术开发有限公司生产的荧光免疫定量分析仪进行检测，得出相应的数据，计算测定结果 的平均值⑴和标准差（S)，根据公式CV = S/XX 100%得出变异系数（CV):
[0203] 批内精密度测定结果的变异系数CV(% )彡15%。
[0204] ⑷批间精密度：
[0205] (4. 1)采用3个批号试剂盒，每个批号的试剂盒分别对高浓度质控品200pg/ml和 低浓度质控品50pg/ml分别重复检测10次，分别定量吸取高浓度质控品和低浓度质控品 50ul，滴加入3支结核T细胞释放γ -干扰素检测微粒悬浮液管中，充分混匀，并反应15分 钟；
[0206] (4. 2)反应结束后再进行取样，等量取出质控品与结核T细胞释放γ-干扰素检测 微粒悬浮液的混合液70ul，再将混合液滴加入3块结核T细胞释放γ -干扰素检测试剂卡 的加样孔中，并再反应30分钟；
[0207] (4. 3)将反应好的结核T细胞释放γ -干扰素检测试剂卡放入到南通利贝尔检测 技术开发有限公司生产的荧光免疫定量分析仪进行检测，得出相应的数据，计算每批试剂 盒测定结果的平均值（X)和标准差（S)，根据公式CV = S/XX 100%得出变异系数（CV):
[0209] 使用3个不同批次的产品测定结果的变异系数CV(% )彡20%。
[0210] (5)最低检出量
[0211] 将实例4中标准品稀释液作为零浓度标准品进行检测，重复测定10次，按实施例 5中（1)-(3)的检测步骤进行操作。计算结核T细胞释放γ-干扰素检测试剂卡荧光信号 值（Μ值）的均值和标准差（SD)，根据零浓度标准品和相邻标准品之间的浓度-信号值结果 进行两点回归拟合得出一次方程，将将M+2SD的信号值代入上述方程，求出对应的浓度：
[0213] 最低检出量不高于6pg/ml。
[0214] (6)线性范围：
[0215] 采用已知含有γ-干扰素浓度为380pg/ml人血浆样本中按1:2的比例稀释为 6 种浓度，380pg/ml、190pg/ml、95pg/ml、47. 5pg/ml、23. 75pg/ml、11. 875pg/ml。按实例 7(3. 1)-(3. 3)中的步骤进行检测，将每个浓度（xi)重复测定3次，算出各浓度3次测量值 的平均值（yi)根据以下公式计算回归系数r :
[0217] 式中：
[0218] yi--某浓度γ -干扰素人血浆样本3次测量值的平均值
[0219] xi--某γ -干扰素人血浆样本浓度
[0220] η--γ -干扰素浓度呈梯度的人血浆样本样本数
[0221] 试剂（盒）线性区间在12. 5~400pg/mL范围内，r = 0· 985,具有良好的线性相 关性。
[0222] (7)准确性：
[0223] 选用已知含有γ_干扰素浓度为220pg/ml和36pg/ml的人血衆样本进行检测，按 照试剂（盒）说明书的步骤分别进行3次测量，结果记为T，根据公式：测量偏差=(T-理 论值）/理论值X 100 %，测量偏差< ± 10 %。
[0225] 实施例8
[0226] 比对实验：
[0227] 采用澳大利亚生产的结核T细胞释放γ_干扰素检测试剂盒（酶联免疫 法）"Quanti FERON-TB GOLD in Tub"作为对照试剂与南通利贝尔检测技术开发有限公司 生产的结核T细胞释放γ -干扰素检测试剂盒（免疫荧光法）对120例人全血样本进行检 测比对，其中阳性样本为39例，阴性样本为73例，不确定样本为8例，检测结果如下：
[0229] 阳性符合率：39/39Χ100%= 100%
[0230] 阴性符合率：72/73 X 100%= 98. 6%
[0231] 不确定符合率：8/8X100%= 100%
[0232] 总符合率：（39+72+8) /120 = 99. 2 %
[0233] 这两种试剂检测结果不一致的仅有1例样本，检测结果高度一致。
【主权项】
1. 共价联接了鼠抗γ-干扰素单克隆抗体的发光微粒，其特征在于，所述的发光微粒， 为填充有发光物质的、表面带有官能团的的高分子微粒或者二氧化硅微粒，高分子微粒的 官能团或者二氧化硅微粒与鼠抗γ-干扰素单克隆抗体共价联接。2. 根据权利要求1所述的发光微粒，其特征在于，高分子微粒的官能团为羧基、醛基或 氨基。3. 根据权利要求1所述的发光微粒，其特征在于，所述高分子化合物选自聚苯乙烯或 脲醛树脂。4. 根据权利要求1~3任一项所述的发光微粒，其特征在于，所述的发光物质选自量子 点或者荧光染料。5. 根据权利要求4所述的发光微粒，其特征在于，所述的荧光染料为镧系稀土元素、异 硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明、四甲基异硫氰酸罗丹明、藻红蛋白、多甲藻叶绿素蛋白或碘 化丙啶。6. 根据权利要求5所述的荧光染料为镧系稀土元素为铕、钺、铺、镝或钐。7. 根据权利要求4所述的发光微粒，其特征在于，发光微粒的粒径为100-400nm。8. 根据权利要求4所述的发光微粒，其特征在于，所述的发光微粒的光发射波段为 350-8