3&CD28的浓度分别为3 μg/mL，1 μg/mL。rhCC表示重组CCDC134蛋白。
[0025] 图4 :CCDC134对Thl，Th2,Thl7细胞分化的作用；rhCC表示重组CCDC134蛋白。
[0026] 图5 :(XDC134促进iTreg细胞分化。其中A显示重组(XDC134蛋白在人naive ⑶4+T细胞向iTreg细胞分化中的作用。其中，VSTM1为本实验室报道的一个能促进Thl7 细胞分化的蛋白；B和C显示重组CCDC134蛋白在小鼠脾细胞诱导向iTreg细胞分化中的 作用。
[0027] 图6 :CO)C134三株单克隆抗体的鉴定。其中A为Westernblotting鉴定结果。 1.pcDB对照质粒转染的HEK293T细胞裂解液；2.pcDB-CCDC134质粒转染的HEK293T细胞 裂解液；rabbitpAb为兔抗(XDC134的多克隆抗体，作为阳性对照。B为ELISA鉴定结果。 1#，5#和13#分别为三株单克隆抗体编号。
[0028] 图7 :(XDC134在正常人、MS患者和肿瘤患者血清中的ELISA检测结果。ELISA检 测用特异性兔抗(XDC134多克隆抗体（R1)包被，鼠抗(XDC134单克隆抗体(Ml)检测。左侧 为标准曲线。Ml为5#单抗，M2为13#单抗。
[0029] 图8 :(XDC134在自身免疫性疾病和炎症性疾病中的血清含量分析。其中A显示正 常鼠与EAE、鼻炎、皮炎小鼠模型血清中CCDC134蛋白含量的比较；B显示小鼠EAE病程中 (XDC134蛋白在血清含量的变化情况。Normal表示正常对照小鼠，Exp表示实验组小鼠。
[0030] 图9:利用重组(XDC134蛋白和(XDC134转基因小鼠模型检测(XDC134处理对EAE 小鼠脾脏髓鞘抗原特异性免疫细胞分泌细胞因子的影响。A为重组CCDC134蛋白处理的结 果。B为(XDC134转基因鼠R)&15的结果；F0&15为(XDC134转基因小鼠。
[0031] 图10 :对照鼠（WT)和（XDC134转基因鼠（F0&15)脊髓组织的HE染色结果。
[0032] 图11 :利用（XDC134转基因小鼠模型检测（XDC134对EAE小鼠脾脏、腹股沟引流 淋巴结和中枢神经系统浸润的免疫细胞亚群比例的影响。该图显示的是其中一次实验的统 计结果，negative代表对照组，transgenic代表CQ3C134转基因小鼠组。
[0033] 图12:利用（XDC134转基因小鼠模型检测(XDC134对EAE小鼠脾脏髓鞘抗原特异 性免疫细胞分泌细胞因子的影响。F0&15为(XDC134转基因小鼠。
[0034] 图13:实时定量PCR结果。利用（XDC134转基因小鼠模型检测(XDC134对EAE小 鼠脾脏髓鞘抗原特异性免疫细胞分泌细胞因子mRNA的影响。F0&15为CCDC134转基因小 ￡3邱U
【具体实施方式】
[0035] 为了使本技术领域的人员更好地理解本发明，下面结合附图和【具体实施方式】对本 发明作进一步的详细说明。
[0036] 实施例1:重组人(XDC134蛋白的制备 1. 1构建了pMH-(XDC134-his6融合蛋白表达质粒，用于表达(XDC134-his6融合蛋白 方法：将CCDC134编码序列（SEDIDNO: 1)插入pMH表达载体（Biovector公司，根据 说明书操作)，构建pMH-CCDC134-his6表达质粒（SEQIDN0:4)，其中SEQIDN0:4的序列 为：起始密码子atg-IgK信号肽基因（人免疫球蛋白Kappa轻链信号肽）-去除自身信号肽 的CCDC134编码基因-6个histag-终止密码子tag。
[0037] 结果：经DNA测序编码区序列正确（图1)。
[0038] 1. 2进行SDS-PAGE和WB验证目的蛋白的表达和纯化 方法：测序验证质粒的正确性后，委托江苏太仓美诺恒康生物技术有限公司进行制备 和纯化。利用Qiagen公司质粒大提试剂盒提取pMH-(XDC134-his6质粒后，瞬时转染到HEK 293F细胞，无血清培养基HEKG培养48小时后，收获转染后的上清，用Ni2+柱纯化上述处理 后的细胞培养上清，进行目的蛋白的表达验证和纯化。用BCA的方法进行定量，SDS-PAGE和 SEC-HPLC检测蛋白纯度，并用兔抗(XDC134蛋白抗体进行Westernblot检测蛋白特异性。
[0039] 结果：成功表达和纯化获得人(XDC134-his6重组蛋白（图2)。
[0040] 实施例2 :重组人(XDC134蛋白对分离纯化⑶4+T淋巴细胞增殖的影响 2. 1人⑶4+T淋巴细胞的获得 方法：从北京血液中心获得2U的浓缩白细胞血样，首先应用淋巴细胞分离液从正常 人外周血中分离得到正常人外周血单个核细胞（peripheralbloodmononuclearcell， PBMC)，然后从中用⑶4+T细胞阳性分选磁珠(参照产品说明书)纯化得到⑶4+T淋巴细胞； 再从磁珠分选得到的CD4+Τ淋巴细胞中加入小鼠抗人CD45R0抗体和大鼠抗小鼠IgG2a分 选磁珠去除⑶45R0+细胞，余下的细胞即为⑶45RA+的naiveT淋巴细胞。从中取出一部 分（5X105个)，用FACS检测其纯度，步骤如下：加入200μL预冷的封闭液（5%FBS/PBS，v/ V)，4°C封闭30min，1800rpm离心5min，随后加入抗人CD45RA、CD45R0和CD4抗体鉴定所分 选的⑶4+naiveT淋巴细胞的纯度(抗体用量参照说明书)。（注：⑶45RA和⑶45R0是⑶45 (白细胞共同抗原)的两种异型，均属I型跨膜蛋白，广泛存在于白细胞表面。CD45RA+T细胞 被称为"原始"T淋巴细胞，即未致敏T细胞，具有抑制免疫的作用；而CD45R0+T细胞被称为 "记忆"T细胞，具有辅助诱导作用。），4°C避光孵育30min;使用相应IgG作为同型对照。最 后用PBS洗涤两次后，通过流式细胞仪收集细胞，使用Cellquest软件对结果进行分析，纯 度达90%以上。
[0041] 2. 2⑶4+T淋巴细胞的体外活化 方法：将上述磁珠分选得到的naive⑶4+T淋巴细胞培养于用抗人⑶3抗体（3μg/mL)和抗人CD28抗体（1μg/mL)包被的细胞培养板中（注：抗人CD3抗体和抗人CD28抗体 用于刺激T淋巴细胞的体外激活，模拟体内环境)，密度为2X106个细胞/mL，培养基为RPMI 1640,含10%补体灭活的FBS，37°C，5%C02条件下培养。
[0042] 2. 3⑶4+T淋巴细胞增殖情况检测 方法：将分离纯化的naiveCD4+T细胞用5%FBS/PBS洗一遍，0. 5~50X106细胞内用lmL5%FBS/PBS重悬置于EP管中，在管盖上加入110yLPBS，在其中加入0. 55yLCFSE 使其终浓度为2. 5μM，迅速盖上管盖，颠倒混匀几次并涡旋混匀，避光染色3到5分钟，然后 用10倍体积5%FBS/PBS洗三遍，用5%FBS/RPMI1640重悬，稀释至细胞浓度为5X105/mL 进行铺板。于〇hr时，在上述活化培养体系中加入不同终浓度（0.1 /1 /10/100ng/mL)的 人重组CCDC134蛋白和等体积PBS，继续培养，于铺板后48小时、72小时和96小时收集细 胞，用FACS进行检测。
[0043] 结果：如图3所示，重组人(XDC134蛋白抑制人⑶4+T的增殖。与T细胞的经典 刺激剂IL-2同样也出现抑制CD4+T细胞增殖的作用。在抗原刺激强度下，低剂量IL-2能 微弱促进CD4+T细胞的增殖，但浓度增高后产生抑制作用。主要是由于IL-2既能促进抗 原活化的⑶4+T细胞的反应，也是Treg细胞生成所必需的，而Treg细胞反过来会抑制反 应性⑶4+T细胞的应答。
[0044] 实施例3 :重组人(XDC134蛋白对naive⑶4+T淋巴细胞分化过程的影响 3.1分离人⑶4+naiveT细胞和体外诱导分化Thl、Th2和Thl7细胞，检测重组人 (XDC134蛋白在其分化过程中的作用 方法：首先，利用磁珠分选得到naiveT淋巴细胞；为了体外诱导naiveT细胞的分化， 我们将其培养于包被了抗CD3 (lyg/mL;clone0KT3)和抗CD28 (2yg/mL;clone15E8) 抗体的细胞培养板中，刺激其活化和增殖。如果诱导Thl细胞，则在培养体系中加入重组人 IL-12(2. 5ng/mL)、重组人IL-2 (10ng/mL)和抗IL-4 的抗体（5μg/mL);如果诱导Th2 细 胞，则在培养体系中加入重组人