IL-4 (12. 5ng/mL)、重组人IL-2 (10ng/mL)、抗人IFN-γ (5以8/1111^1_58-8)和抗人几-10(5以8/1^)抗体；如果诱导11117细胞，则在培养体系 中加入重组人IL-Ιβ(50ng/mL)、重组人IL-6 (50ng/mL)、重组人IL-23 (50ng/mL)、重 组人TNF-α(10ng/mL)、重组人TGF-βΙ(5ng/mL)、抗人IL-4 的抗体（5yg/mL)和抗 人IFN-γ(5μg/mL)的抗体。同时我们在分化培养体系中，同时加入不同浓度的(XDC134 重组蛋白或者对照，四天后，更换新鲜培养基，去除抗CD3和抗CD28抗体，其余细胞因子和 抗体不变，继续培养三天，其中Thl7细胞分化中加入重组人IL-2 (5ng/mL)。Thl和Th2诱 导培养14天，7天一个周期。Thl7诱导培养7天即可。利用FACS检测Thl、Th2、Thl7和iTreg细胞的特征性细胞因子（IFN-γ，IL-4,IL-17A)表达情况。
[0045] 结果：重组人(XDC134蛋白能明显促进Thl细胞的分化，而不影响Th2和Thl7细 胞的分化（图4)。
[0046] 3. 2分离人⑶4+naive T细胞和体外诱导分化iTreg细胞，检测重组人(XDC134 在其分化过程中的作用 方法：为了体外诱导naiveT细胞的分化为iTreg细胞，我们将其培养于包被了抗⑶3 (lyg/mL;clone0KT3)和抗CD28 (2yg/mL;clone15E8)抗体的细胞培养板中，刺激其 活化和增殖。同时加入重组人TGF-M(50ng/mL)和重组人IL-2 (5ng/mL)。并加入不同 浓度的(XDC134重组蛋白或者对照，四天后，更换新鲜培养基，去除抗⑶3和抗⑶28抗体， 其余细胞因子不变，继续培养三天，iTreg诱导培养7天即可诱导分化。诱导分化后用PMA (100ng/mL)和ionomycin(1μM)刺激细胞6小时，收获细胞提取RNA，通过Real-timePCR 检测相应细胞特异的细胞因子和转录因子mRNA水平的变化。
[0047] 结果：如图5A所示，重组人(XDC134蛋白能明显上调Foxp3的转录水平，表明人类 细胞因子CCDC134的蛋白能促进iTreg细胞的分化（同样，在Thl7分化体系下，CCDC134不 影响IL-17A以及其转录因子Rorc的转录水平)。
[0048] 3. 3重组人(XDC134蛋白促进小鼠iTreg细胞的分化 方法：制备小鼠脾单细胞悬液，用naive⑶4+Tcell分选磁珠获得纯化naive⑶4+T细胞，同样在培养体系加入抗CD3和抗CD28抗体，以及TGF-β，IL-2诱导分化成iTreg细 胞，同时加入不同浓度(XDC134或者对照，72小时后，收集细胞检测其中iTreg细胞的比例。
[0049] 结果：与不加入TGF-β的未极化体系相比，TGF-β分化体系能诱导低水平iTreg 细胞的分化。并且重组人CCDC134蛋白能促进iTreg细胞的分化，在较低浓度范围内 (0.l~lng/mL)，重组人(XDC134蛋白促分化的作用呈现剂量依赖性，以Ing/mL浓度作用最 强，之后作用减弱，达到50ng/mL时，作用消失（图5B和5C)。
[0050] 实施例4 :小鼠抗人(XDC134单克隆抗体的制备、鉴定和纯化 方法：委托华大基因公司用纯化的CCDC134-GST原核蛋白免疫3只小鼠制备单克隆 抗体。三次免疫后进行鉴定，效价达1〇5以上进行杂交瘤细胞融合，挑选克隆，获得多株小 鼠单克隆抗体，利用Westernblotting方法鉴定。最终获得三株小鼠单克隆抗体，并进一 步利用ELISA和Westernblotting方法鉴定后，之后用proteinG进行纯化备用。
[0051] 结果：所获得的三株小鼠单克隆抗体均能特异性结合(XDC134蛋白（图6)。
[0052] 实施例5 :内源性人和小鼠（XDC134蛋白含量测定 5. 1 (XDC134蛋白的ELISA检测方法的建立 构建基于ELISA方法的体外检测人类细胞因子CCDC134蛋白的试剂盒，包括以下试 剂：
方法：用R1包被抗体包被待检样品，包被终浓度4μg/mL，50μL体积，4 °C过夜； 300μL洗涤液（含0. 05wt%吐温20的PBS)洗板，洗五遍，用300μL的体积浓度为3%的 封闭液封闭，37°C，2小时；300μL洗涤液洗板，洗五遍，加入不同浓度标准品（1ng/mL、10 ng/mL、100ng/mL)，37°C孵育2小时；300yL洗涤液洗板，洗五遍，加入Ml检测抗体(可以使 用上述实施例4的鼠抗(XDC134单克隆抗体，5#或13#，检测结果一致)，终浓度2μg/mL， 50μL体积，37°C孵育2小时；300mL洗涤液洗板，洗五遍，加入50mLHRP标记羊抗鼠二抗 (1:5000)稀释，37°C孵育1小时；300yL洗涤液洗板，洗五遍，加入50yLTMB显色10~20 分钟，加入50yL终止液终止，酶标仪读取0D490-570。其中，所有抗体均用0. 3%BSA/ PBST(v/v)稀释。每个样本设立三个复孔。
[0053] 结果：本发明试剂盒能特异性识别重组人(XDC134蛋白，其最低浓度范围可至 Ing/mL(图 7)。
[0054] 5. 2ELISA测定人血清中CCDC134水平 方法：从临床获得正常人、MS患者和肿瘤患者血清，用PBS稀释3倍后使用上述试剂盒 检测其中（XDC134蛋白的含量（图7)。
[0055] 结果：利用该试剂盒可以识别人血清中（XDC134蛋白，且MS患者中（XDC134蛋白 含量稍高于正常人水平。
[0056] 5. 3ELISA测定小鼠血清中CCDC134水平 方法：小鼠内目此取血，4°C静置过夜后，440g离心30min后取上清，25000g离心15min后 获得血清，用PBS稀释3倍后使用上述试剂盒检测其中CCDC134蛋白的含量。用ELISA分 析了小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE)以及鼻炎（rhinitis)和皮炎（dermitis)模型 中（XDC134蛋白的血清水平。
[0057] 结果：利用该试剂盒可以识别小鼠血清中CCDC134蛋白；并且在EAE以及鼻炎和 皮炎发生过程中，CCDC134蛋白的血清水平明显增高；其血清水平在EAE整个病程进展中均 明显高于正常对照小鼠（图8)。
[0058]实施例6:利用小鼠EAE模型探讨(XDC134在自身免疫性疾病中的作用 6.1建立小鼠EAE模型 方法：将抗原M0G35 55 (髓鞘少突胶质细胞糖蛋白片段)用生理盐水稀释成5mg/mL，并 按1 : 1等体积加入CFA(弗氏佐剂)，加入结核杆菌H37Ra使其终浓度为1. 5mg/mL，充分混 合乳化。乳化后按每只0. 2mL于C57BL/6小鼠脊柱两侧分五点皮下注射，第0及第48小时 小鼠尾静脉注射0. 2mLPTX(200ng/只）。免疫当天起采用国际通用的5分制法对实验小 鼠进行神经功能评估，依据Kerlero等提出的标准对其进行神经功能评分，具体评分标准 如下：〇分无症状；1分尾部失去张力；2分后肢力弱；3分后肢瘫痪；4分后肢及前肢 瘫痪；5分濒临死亡或死亡。当临床症状介于两个评分之间时以较低分数加0.5分表示。 [0059] 结果：成功建立小鼠EAE模型 6. 2利用重组(XDC134蛋白和(XDC134转基因小鼠探讨其在EAE发病过程中的作用 方法：将C57BL/6小鼠被随机分成数目相同的两组(每组5-7只小鼠）。我们用mM0G35 55 多肽诱导C57BL/6小鼠发病，建立EAE小鼠模型，在免疫后第一天开始给予重组(XDC134蛋 白或PBS(溶解重组蛋白所用的灭菌盐溶液）对照，持续至15天。每日观察小鼠并进行神 经功能评分。
[0060] 利用相同的方法在(XDC134转基因小鼠或同窝阴性鼠建立了EAE模型，对两组小 鼠的临床症状进彳丁评分。
[0061] 结果：重组(XDC134蛋白处理可以明显减轻EAE的病情，撤除重组(XDC134蛋白， 其抑制EAE发病的作用在后期消失。与同窝阴性鼠相比，CCDC134转基因小鼠发病时间较 晚，病情较轻（图9)。
[0062] 目前主要是用实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimentalautoimmune enc印halomyelitis，EAE)小鼠模型来模拟MS发病过程。EAE主要由Thl细胞介导的，Th2 细胞对EAE有保护作用，EAE动物体内存在着Thl/Th2的失衡，并且Thl细胞〉Th2细胞。 此外在EAE研究中，将诱导分化的特异性Th细胞包括Thl、Th2、Thl7和