4]实验例4冷却后不同静置时间对测定结果的影响
[0095]取试管18支，向试管中加入O.Olmg · ml/1葡萄糖标准液lmL及5mL蒽酮指示剂，盖盖 震荡，使之完全混合。在沸水中加热lOmin后，取出后在自来水中冷却后分别静置lOmin、 20min、30min、40min、50min和60min后，在分光光度计上，测定各溶液的光密度，每个静置时 间做3次重复。结果见表1-3。冷却静置不同时间的测定结果显示，静置10min、20min、30min、 40min、50min和60min测定的吸光值分别为0.2172、0· 2169、0· 2167、0· 2167、0· 2163和 0.2161，而冷却后立即测定的结果最大。静置不同时间后测得的吸光值较相近，因此静置时 间的长短对吸光值影响不大，最大相差0.0011。方差分析结果(表2)显示，冷却后即测定的 结果与静置一定时间的各处理间差异显著;静置不同时间的各处理间的差异不显著，所以 样品在沸水浴处理经自来水冷却后，20min-lh内测定均可。
[0096]表1不同静置时间对吸光度的影响 L〇〇98」表2方差分析表
[0099]
[Ο?ΟΟ]表3方差分析表 [0101]
[01
[0103]实验例5葡萄糖标准曲线的绘制
[0104] 5.1分别吸取lmg · mL-1的标准葡萄糖溶液0.5、l、2、3、4、5mL，置于50mL容量瓶中定 容，配制每毫升含葡萄糖1 〇、20、40、60、80、1 OOyg的葡萄糖标准溶液。
[0105] 5.2将试管编号，依次将每管内加入lmL上述标准溶液，另取lmL水作为空白，每一 试管加入5mL蒽酮试剂，盖盖震荡，使之完全混合。在沸水中加热lOmin，取出后在自来水中 冷却。
[0106] 5.320min后，在分光光度计上，以含葡萄糖0的试管作对照，在λ = 575ηπι处测定各 溶液的光密度(吸光度值）。各种浓度做3个重复。
[0107] 5.4工作曲线绘制
[0108] 以吸光度值为横坐标，以葡萄糖浓度mg/mL为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线（如图 4)，其线性回归方程为c = ax+b = 0.1318x+0.0004[即公式（1)]，相关系数r = 0.9992(线性 相关系数为r，主要用R2值来表示），其中c代表葡萄糖的浓度（即可溶性糖浓度），x代表吸光 度值。由图4可知，吸光值与葡萄糖浓度呈极佳的线性关系。
[0109] 实验例6水煮法提取可溶性糖的条件确定
[0110] 6.1沸水水浴不同时间对可溶性糖提取效果的影响
[0111] 准确称取（1 .〇〇〇±〇 .001 )g已挑干净的棉样放入50mL具塞试管中，加蒸馏水30mL， 反复挤压至棉纤维完全浸湿，盖紧试管盖，于沸水浴中分别煮沸提取20、40、60、80min& lOOmin，冷却后加0. lg左右活性炭，摇勾，脱色30min，过滤于50mL三角瓶中备用。每处理重 复3次。结果见图5。由图5可以看出，随着提取时间的延长，可溶性糖含量越来越高，提取至 60min时，可溶性糖含量达最大值，随着提取时间的再延长，可溶性糖含量反而降低。
[0112] 6.2料液比对可溶性糖提取效果的影响
[0113] 准确称取（1.000 ± 0.001) g已挑干净的棉样放入50mL具塞试管中，蒸馏水的添加 量分别为30mL、40mL、50mL、60mL、70mL、80mL和90mL，反复挤压至棉纤维完全浸湿，盖紧管盖 于沸水浴中煮沸60min，冷却后加0. lg左右活性炭，摇勾，脱色30min，过滤于50mL三角瓶中 备用。每处理重复3次。结果见图6。当料液比从1:30增加到1:50时，随着料液比的增加，可溶 性糖含量显著增加，这是由于料液比增加，加速了溶质的扩散速度，并促进水溶性物质充分 溶出，使提取液中的糖含量提高。当料液比> 1:50时，随料液比增加可溶性糖量增加趋势变 缓。这是由于料液比达到1:50后，糖基本全部浸出，再增加料液比只会增加实验过程中的能 耗，而不会大幅度的提高可溶性糖的提取率。方差分析结果显示(表4,表5)，料液比达1:70 时，可溶性糖量最高，但是当料液比在1:50-1:90之间时，可溶性糖含量的差异并不显著。 因此，为了节省能耗，而又不影响可溶性糖含量的提取率，料液比在1:50时为最佳。
[0114] 表4方差分析表
[0115]
[0116] 表5方差分析表
[0117]
[0118] 实验例7提取方法的确定
[0119] 棉纤维可溶性糖提取的方法，目前广泛应用的主要有水煮法、酒精提取法、0.05% Triton X-100提取法和水解提取法。本实验通过对这4种提取方法的比较，筛选适宜的提取 方法。
[0120] 水煮法:称（1.000±0.001 )g已挑干净的棉样于50mL具塞试管中，添加50mL纯水， 反复挤压至棉纤维完全浸湿，盖紧试管盖，在数显恒温水浴振荡器中沸水震荡加热60min， 冷却后加 o.lg左右活性炭，摇匀，脱色30min，过滤于50mL三角瓶中备用。每处理重复3次。
[0121] 酒精提取法:称（1.000±0.001)g已挑干净的棉样于50mL具塞试管中，加入浓度为 80%的酒精30mL，置于80°C水浴中恒温振荡60min，过滤，收集上清液，其残渣加10mL同样浓 度的酒精重复提2次，合并上清液。在上清液中加入10mg活性炭，80°C脱色30min，用80 %的 酒精定容至50mL过滤后取滤液备用。每样重复3次。
[0122] 0.05 % Triton X-100溶液提取法:称（1.000 ± 0.001)g已挑干净的棉样于具塞试 管中，加入50mL含有0.05 %TritonX-100溶液，反复挤压至完全浸湿。浸泡30min，挤干棉样， 过滤于50mL三角瓶中备用。每处理重复3次。
[0123] 水解提取法:称（1.000±0.001 )g已挑干净的棉样于50mL具塞试管中，加50mL蒸馏 水，在沸水浴中加热60min，滤出提取液20mL于50mL具塞试管中，加5mol · L-1盐酸5mL继续 在沸水浴中加热30miη，冷却后，滴加一滴酚酞，用5mo 1 · I/1的氢氧化钠中和至中性。每样重 复3次。
[0124] 对以上不同提取方法对可溶性糖的提取效果进行了比较，结果见图7。4种不同提 取方法测定的可溶性糖结果表明（图7，表6，表7 )，水解提取结果略高，80 %酒精提取法结果 略低，4种提取方法结果较接近，差异不显著。由于水煮法操作最简便，成本最低，容易取得， 因此，选择水煮法作为棉纤维可溶性糖的提取方法。在进行方法选择时，主要考虑了以下几 个方面的因素:一是反应体系的稳定性。二是试剂的配制成本。三是试验方法的操作是否简 便。由于蒽酮比色法显色稳定、重现性好、操作简便、结果准确可靠。选定蒽酮比色法作为可 溶性糖的测定方法，但现有的技术中蒽酮硫酸比色的测定方法也存在一定弊端，如前处理 方法不够完善，试验步骤繁琐、耗时长，不适用于大批量样品的测定等。因此，本发明对蒽酮 比色法测定可溶性糖含量的试验方法做了改进，本测定方法采用水煮法提取技术，简化操 作程序，降低测试成本，提高了测试效率。
[0125]表6方差分析表
[01?人1
[0127] 表7方差分析表
[0128]
[0129] 实验例8方法的精密度
[0130] 从表8可以看出，同一均匀样品5份，按实施例1方法测得棉纤维中的可溶性糖平均 含量为5.882mg · gH，标准差0.04,变异系数为0.39%，说明该方法具有较好的精密度。
[0131] 表8精密度测定结果
[0132]
[0133] 实验例9回收率实验
[0134] 精密吸取按实施例1方法制备的10 m L棉花试样可溶性糖提取液5份，分别加入 0.Olmg · ml/1葡萄糖标准溶液3mL，制备供试溶液，测定棉纤维试样及加标试样的吸光度，根 据标准曲线方程公式（1)计算棉纤维试样及加标试样的浓度(C)，按公式(2)求回收率。加标 回收率为98.5%~102.2%，均在100%左右，平均加标回收率为100.3%，变异系数1.72%， 说明该方法的加标回收效果较好。结果见表9。
[0135] 回收率=(C2XV2 -CiXVi)/C〇XV〇X100%.................................(2)
[0136]式中：C2-加标试样浓度，mg · mL-1;
[0137] V2一加标试样体积，V2 = Vi+Vo，mL;
[0138] Ci一未加标试样浓度，mg · mL-1;
[0139]