一种混合型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮含量的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于饲料添加剂中成分分析检测技术领域，具体涉及一种混合型饲料添加 剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮含量的检测方法。
【背景技术】
[0002] 高效液相色谱法是用高压输液栗将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合 溶剂、缓冲液等流动相栗入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入待测样品，由流动相带入柱 内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。这种方法 已成为化学、生化、医学、工业、农业、环保、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术， 是分析化学、生物化学和环境化学工作者手中必不可少的工具。
[0003] 新甲基橙皮苷二氢查耳酮，简称NHDC，淡黄色粉末，是一种具有苦味抑制和风味改 良的功能性甜味剂。甜味来得慢，后味持续时间长，甜味清爽且愉快，能有效降低人体和动 物体对动物饲料中可能带有的苦味的敏感程度。NHDC甜度达到最大值的时间要比糖精和蔗 糖都长，而且持续时间也较长。
[0004] 在饲料添加剂领域，可使饲料口味超甜，增大崽猪食欲，明显促进其生长和降低每 千克增重的饲料消耗。新橙皮苷二氢查耳酮与别的甜味剂复配使用时，尤其是与糖精复配 时，能产生优良的协同作用，而糖精的金属余味可能会造成严重的问题(特别是当其用于仔 猪日粮中时），足够浓度的NHDC是提供余味掩盖作用所必须的。然而，目前饲料添加剂中新 甲基橙皮苷二氢查耳酮含量的检测没有国家标准，也没有现成的方法。
【发明内容】
[0005] 针对现有技术存在的上述不足，本发明所要解决的技术问题是：怎样提供一种混 合型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮含量的检测方法，用以弥补目前尚没有相关检 测方法的不足，使该方法能够对混合型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮含量进行精 准定量，且具有无需进行复杂的前处理、检测结果灵敏、准确、高效、稳定的特点。
[0006] 为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：一种混合型饲料添加剂中新 甲基橙皮苷二氢查耳酮含量的检测方法，包括如下步骤：
[0007] 1)采用甲醇水溶液作为溶剂，配制梯度浓度的新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准溶 液；
[0008] 2)采用液相色谱法对步骤1)配制的新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准溶液进行检测， 得到新甲基橙皮苷二氢查耳酮出峰的峰面积，以新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准溶液的浓度 为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线;其中，色谱条件为采用C 18液相色谱柱、流动相为 甲醇水溶液、检测波长为282nm;
[0009] 3)向混合型饲料添加剂中加入所述流动相，并进行超声处理，得到样品处理液；
[0010] 4)将步骤3)得到的样品处理液在与步骤2)相同的液相色谱条件下进行检测，得到 新甲基橙皮苷二氢查耳酮出峰的峰面积，根据步骤2)建立的标准曲线计算出样品处理液中 的新甲基橙皮苷二氢查耳酮浓度，并结合所述样品处理液的体积和样品质量，计算出混合 型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮的含量。
[0011] 相比现有技术，本发明具有如下有益效果：
[0012] 1、为了弥补目前尚没有针对混合型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮含量 检测方法的不足，本发明考虑到新甲基橙皮苷二氢查耳酮难溶于水的特性，以甲醇水溶液 作为流动相，用该流动相对样品中新甲基橙皮苷二氢查耳酮进行提取，并根据样品中各成 分组成的性质，选择C 18柱作为固定相，并通过创造性的研究得出适用于本发明混合型饲料 添加剂分离的色谱条件，使得各成分在该色谱条件下能充分分离开，在检测波长282nm条件 下新甲基橙皮苷二氢查耳酮能够稳定出峰，出峰时间在10~20分钟之间，出峰不会拖尾、重 叠，不会有干扰峰出现，进而使本发明检测结果精确，可靠性高。
[0013] 2、本发明先对不同浓度的新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准溶液进行检测，避免了单 点计算带来的误差，进而使检测结果更加准确、可靠，制得的标准曲线相关系数更高，为后 续样品的检测奠定了可靠的定量基础。
[0014] 3、本发明无需进行复杂的样品前处理，只需采用甲醇水流动相对混合型饲料添加 剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮进行提取，前处理过程更加简单，本发明还研究出提取过程 中最佳料液比和超声时间，在此条件下新甲基橙皮苷二氢查耳酮提取最完全，能够保证良 好的提取效果，进而使检测结果更加准确。
[0015] 4、本发明检测方法使用的设备和试剂均为通用设备，适用于饲料厂进行大批量自 检，具有良好的应用推广前景。
【附图说明】
[0016] 图1为本发明方法新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准曲线图。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合具体实施例和说明书附图对本发明作进一步详细说明。本实施案例在以 本发明技术为前提下进行实施，现给出详细的实施方式和具体的操作过程，来说明本发明 具有创造性，但本发明的保护范围不限于以下的实施例。
[0018] 本实施例主要设备有分析天平、高效液相色谱和一些常见实验室玻璃仪器;所用 的试剂有色谱级甲醇、二氢查耳酮标准品，所用的其它试剂均为色谱纯级试剂，所用水为纯 水。
[0019] -、本发明混合型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮含量的检测方法，包括 如下步骤：
[0020] 1)采用甲醇水溶液作为溶剂，配制梯度浓度的新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准溶 液；
[0021] 2)采用液相色谱法对步骤1)配制的新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准溶液进行检测， 得到新甲基橙皮苷二氢查耳酮出峰的峰面积，以新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准溶液的浓度 为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线;其中，色谱条件为采用C 18液相色谱柱、流动相为 甲醇水溶液、检测波长为282nm;
[0022] 3)向混合型饲料添加剂中加入所述流动相，并进行超声处理，得到样品处理液；
[0023] 4)将步骤3)得到的样品处理液在与步骤2)相同的液相色谱条件下进行检测，得到 新甲基橙皮苷二氢查耳酮出峰的峰面积，根据步骤2)建立的标准曲线计算出样品处理液中 的新甲基橙皮苷二氢查耳酮浓度，并结合所述样品处理液的体积和样品质量，计算出混合 型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮的含量。
[0024] 上述步骤1)中为配制浓度依次为0 ·1、0·2、0·3、0· 4和0 · 5mg/mL的新甲基橙皮苷二 氢查耳酮标准溶液，这样得到的标准曲线线性相关性更好，使得样品的检测计算结果更加 准确。
[0025] 上述甲醇水溶液中甲醇和水的体积比为40~60:60~40,过滤后备用。选择这样的 流动相，有利于样品中各组分充分分离开，且新甲基橙皮苷二氢查耳酮的出峰时间合适，为 10~20分钟。
[0026] 上述C18液相色谱柱规格为250mm长X 4.6mm内径，填料粒度为5μπι。
[0027] 上述液相色谱检测过程中控制柱温为室温，流动相流速为0.8~1.5mL/miη，进样 量为20~30yL。
[0028] 上述步骤3)将混合型饲料添加剂与所述流动相按照3~5g:100mL的质量体积比混 合，并进行超声处理20~60min，得到样品处理液。这样的提取条件，使得待检测样品中新甲 基橙皮苷二氢查耳酮提取更加完全，检测结果更加真实可靠。
[0029] 上述混合型饲料添加剂为以二氧化硅和/或蛭石为载体的混合型饲料添加剂，特 别是指甜味剂。
[0030] 上述得到的样品处理液如果经过本发明液相色谱方法检测，检测的282nm处吸光 度值最大大于〇. 8，则对样品处理液进行一定的浓度稀释后再重新进行检测，这样检测结果 更加准确可靠。
[0031] 本发明检测原理:采用新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准品，用甲醇水流动相配制成 梯度浓度的二氢查耳酮标准溶液，用液相色谱仪在本发明设定的色谱条件下对各浓度的标 准溶液中新甲基橙皮苷二氢查耳酮含量进行测定，并得到新甲基橙皮苷二氢