)的对比图。
【具体实施方式】
[0038] 下面，结合实施例和比较例对本发明的【具体实施方式】进一步进行说明，以便更清 楚地描述本发明的优点和特点。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任 何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明的 细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
[0039] 实施例1
[0040] 1.仪器和药品
[0041] 使用Waters ACQUITY UPLC H-Class超高效液相色谱仪。草木犀药材共10 批，均购于安徽孟氏医药有限公司，香豆素对照品（EP标准），购于ChromaDax有限公司 (ChromaDax，Inc.)，其他试剂为色谱纯或分析纯级试剂。
[0042] 2.供试样品溶液的制备
[0043] 精密称取药材粉末2. OOOOg，置于具塞容器中，加入70体积％的甲醇水溶液90mL 浸泡，超声震荡30分钟，放冷，过滤，收集药渣，再按前述方法重复提取一次，合并两次提取 的滤液至250ml量瓶中，用甲醇-水（体积比1:1)溶液定容至刻度，用0. 22 μ m滤膜过滤， 滤液作为供试样品溶液。
[0044] 3.对照样品溶液的制备
[0045] 精密称取香豆素对照品约0.015g，置100mL量瓶中，加甲醇-水（体积比1:1)溶 液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取lmL至10mL量瓶中，加甲醇-水（体积比1:1)溶液 溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
[0046] 4.超高效液相色谱分析
[0047] 色谱分析填料为 Waters Acquity UPLC? BEH C18 (柱长为 50mm，内径为 2. 1mm, 填料粒径为1. 7 μ m)，流动相为乙腈-0. 05体积％磷酸水溶液；梯度洗脱，洗脱程序为： Omin - 1. 5min - 4. Omin - 5. Omin，乙臆 5 体积13 体积％ - 13 体积％ - 5 体积％ ; 流速0. 6ml/min ;检测波长220nm ;柱温30°C。在此条件下精密量取对照品溶液和供试品溶 液各2 μ 1，注入液相色谱仪，得到草木犀药材的指纹图谱。
[0048] 5.分析图谱
[0049] 按照本发明提供的方法，对10批草木犀药材建立了 UPLC标准指纹图谱（见 图2)，确定了 16个共有特征峰，以14号峰香豆素为参照峰，其相对保留时间分别为：峰 1 :0· 062(±5 % )、峰 2 :0· 080(±5 % )、峰 3 :0· 093(±5 % )、峰 4 :0· 383(±5 % )、峰 5 : 0· 445(±5 % )、峰 6 :0· 607(±5 % )、峰 7 :0· 669(±5 % )、峰 8 :0· 686(±5 % )、峰 9 : 0.713 (±5% )、峰 10 :0.747 (±5% )、峰 11 :0.801 (±5% )、峰 12 :0.866 (±5% )、峰 13 : 0.912(±5% )、峰 14 :L 000(±5% )、峰 15 :L 036(±5% )和峰 16 :L 101(±5% )，这些 共有特征峰构成了草木犀药材的指纹特征，可作为草木犀药材的标准指纹图谱，具体参见 图1。各共有峰的相对保留时间和相对峰面积计算结果如下表。
[0050] 表1各共有峰相对保留时间（220nm)
[0051]
[0056] 此外，对本实施例1的草木犀药材超高效液相色谱指纹图谱的构建方法的精密 度、重现性以及所提取的供试样品溶液的稳定性进行检测，得到精密度、重现性以及稳定性 都良好。
[0057] 实施例2
[0058] 1.使用的仪器和药品
[0059] 使用Waters ACQUITY UPLC H-Class超高效液相色谱仪。草木犀药材共10批 次，均购于安徽孟氏医药有限公司，香豆素对照品（EP标准），购于ChromaDax有限公司 (ChromaDax，Inc.)，其他试剂均为色谱纯或分析纯级试剂。
[0060] 2.供试样品溶液的制备
[0061] 精密称取草木犀药材粉末2. OOOOg，置于具塞容器中，加入50 %的甲醇水溶液 90mL浸泡，超声震荡30分钟，放冷，过滤，然后收集药渣，再按前述方法重复提取一次，合并 两次提取的滤液至250mL量瓶中，用甲醇-水（体积比1:1)溶液定容至刻度，用0. 22 μ m 滤膜过滤，滤液作为供试样品溶液。
[0062] 3.对照品溶液的制备
[0063] 精密称取香豆素对照样品约0. 0150g，置于100mL量瓶中，加甲醇-水（体积比 1:1)溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取lmL至10mL量瓶中，加甲醇-水（体积比1:1) 溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，用〇. 22 μ m滤膜过滤，滤液作为对照样品溶液。
[0064] 4.超高效液相色谱分析
[0065] 色谱分析填料为 Waters Acquity UPLCTM BEH C18 (柱长为 50mm，内径为 2. 1mm, 填料粒径为1.7 μ m)，流动相为乙腈-0. 1体积％磷酸水溶液；梯度洗脱，洗脱程序为： Omin - 1. 5min - 4. Omin - 5. Omin，乙臆 5 体积13 体积％ - 13 体积％ - 5 体积％ ; 流速为0. 6mL/min ;检测波长277nm ;柱温30°C。在此条件下精密量取对照品样溶液和各供 试样品溶液各2μ 1，分别注入液相色谱仪，得到对照样品（香豆素）和供试样品（草木犀药 材）的指纹图谱，具体如图3和图5所示。
[0066] 5.分析图谱
[0067] 按照本发明提供的方法，对10批草木犀药材测定了 UPLC指纹图谱（见图5)， 确定了 14个共有特征峰，以12号峰香豆素为参照峰，其相对保留时间分别为：峰1 : 0· 062(±5 % )、峰 2 :0· 080(±5 % )、峰 3 :0· 102(±5 % )、峰 4 :0· 345(±5 % )、峰 5 : 0· 445(±5 % )、峰 6 :0· 669(±5 % )、峰 7 :0· 686(±5 % )、峰 8 :0· 713(±5 % )、峰 9 : 0.801 (±5% )、峰 10 :0.866 (±5% )、峰 11 :0.912 (±5% )、峰 12 :1.000 (±5% )、峰 13 : 1.036(±5% )和峰14 :1. 101(±5% )，这些共有特征峰构成了草木犀药材的指纹特征，可 作为草木犀药材的标准指纹图谱，具体参见图4。各共有峰的相对保留时间和相对峰面积计 算结果如表4和表5所示。对10批草木犀药材及对照品的指纹图谱的相似度进行分析，结 果不于表6〇
[0068] 表4.各共有峰的相对保留时间
[0069]
[0070] 表5.各共有峰的相对峰面积
[0071]
[0072] 表6. 10批草木犀药材及对照品的指纹图谱的相似度
[0073]
[0074] 6.对本发明的草木犀药材超高效液相色谱指纹图谱的构建方法的精密度、重现性 以及所提取的供试品溶液的稳定性进行检测
[0075] (1)精密度试验
[0076] 按照上述方法制备一份供试样品溶液，连续进样6次，以12号峰为参照峰，计算出 1~14号共有指纹峰的保留时间的RSD值均小于3%，同时用相似度评价软件计算各色谱 指纹图谱的相似度均大于〇. 99,表明仪器稳定，精密度良好。
[0077] 表7.精密度试验结果
[0078]
[0079] (2)重现性试验
[0080] 取同一批药材，分别精密称取6份，照上述方法制备供试品溶液，分别进样，计算 出1~14号共有指纹峰的保留时间的RSD值均小于3%，同时用相似度评价软件计算各色 谱指纹图谱的相似度均大于〇. 99,表明方法重现性良好。
[0081] 表8.重现性试验结果
[0082]
[0083] (3)稳定性试验
[0084] 取重现性试验中同一份供试品溶液，分别在0、2、4、8、12小时进样，计算出1~14 号共有指纹峰的相对保留时间的RSD值均小于3%，同时用相似度评价软件计算各色谱指 纹图谱的相似度均大于〇. 99,表明供试品溶液在12小时内稳定。
[0085] 表9.稳定性试验结果
[0086]
[0087] 实施例3
[0088] 1.仪器和药品
[0089] 使用Waters ACQUITY UPLC H-Class超高效液相色谱仪。草木犀药材共10 批，均购于安徽孟氏医药有限公司，香豆素对照品（EP标准），购于ChromaDax有限公司 (ChromaDax，Inc.)，其他试剂为色谱纯或分析纯级试剂。
[0090] 2.供试样品溶液的制备
[0091] 精密称取药材粉末2. OOOOg，置于具塞容器中，加入30体积％的甲醇水溶液90mL 浸泡，超声震荡30分钟，放冷，过滤，收集药渣，再按前述方法重复提取一次，合并两次提取 的滤液至250ml量瓶中，用甲醇-水（体积比1:1)溶液定容至刻度，用0. 22 μ m滤膜过滤， 滤液作为供试样品溶液。
[0092] 3.对照样品溶液的制备
[0093] 同实施例2对照样品溶液的制备方法。
[0094] 4.超高效液相色谱分析
[0095] 色谱分析填料为 Waters Acquity UPLC? BEH C18 (柱长为 50mm，内径为 2. 1mm, 填料粒径为1.7 μ m)，流动相为乙腈-0.2体积％醋酸水溶液；梯度洗脱，洗脱程序为： Omin - 1. 5min - 3. 5min - 5. Omin，乙臆 5 体积15 体积％ - 15 体积％ - 5 体积％ ; 流速0. 7ml/min ;检测波长275nm ;柱温30°C