工山丰口山重时间 处无杂峰；供试品加标溶液中主峰保留时间与对照品溶液保持一致；供试品溶液中未检出 栋桐酸（阴性结果）。W上各项考察指标均符合接受标准，说明本发明检测方法的专属性良 好，检测无干扰。
[00蝴实施例4 :定量限与检测限实验
[0089] 一、实验步骤
[0090] 1、溶液配制
[0091] (1)对照储备液的配制
[0092] 取栋桐酸约25mg，精密称定，置于250ml容量瓶中，加乙腊溶解并定容，摇匀即得。
[0093] 似定量限溶液的配制
[0094] 精密量取对照储备液0. 3ml置于IOml容量瓶中，加乙腊稀释至刻度，摇匀。
[0095] (3)检测限溶液的配制
[0096] 精密量取对照储备液0. 02ml置于IOml容量瓶中，加乙腊稀释至刻度，摇匀。
[0097] (4)空白溶液
[0098] 采用乙腊作为空白溶液。
[0099] 2、上机测定
[0100] 分别精密量取空白溶液、定量限溶液和检测限溶液各lOul，按如下方式进样测 试： 阳101] 空白溶液-----------------------------------------------1针（色谱图参 见附图2)
[0102] 定量限溶液--------------------------------------------1针（色谱图参见 附图6)
[0103] 检测限溶液--------------------------------------------1针（色谱图参见 附图7)
[0104] 二、检测结果 阳105] 具体检测结果如表3所示。 阳106] 表3定量限与检测限实验结果 阳 1071
[0108] 由W上检测结果可W看出，当信噪比为4. 6 (3~W时，栋桐酸的检测限为2. 05ng ; 当信噪比为9. 6巧~12)时，栋桐酸的检测限为30. 7化g。说明本发明检测方法的最低检出 浓度为0. 2 y g/ml，灵敏度高。
[0109] 实施例5 :线性实验
[0110] 一、实验步骤 阳111] 1、溶液配制
[0112] (1)对照储备液的配制
[0113] 取栋桐酸约25mg，精密称定，置于250ml容量瓶中，加乙腊溶解并定容，摇匀即得。
[0114] (2) 30 %水平溶液的配制
[0115] 精密量取对照储备液0. 3ml置于IOml容量瓶中，加乙腊稀释至刻度，摇匀。
[0116] (3) 50 %水平溶液的配制
[0117] 精密量取对照储备液0. 5ml置于IOml容量瓶中，加乙腊稀释至刻度，摇匀。 阳11引 （4) 100 %水平溶液的配制
[0119] 精密量取对照储备液1.0ml置于IOml容量瓶中，加乙腊稀释至刻度，摇匀。 阳120] 巧）150 %水平溶液的配制 阳121] 精密量取对照储备液1. 5ml置于IOml容量瓶中，加乙腊稀释至刻度，摇匀。 阳122] 化)200 %水平溶液的配制
[0123] 精密量取对照储备液2. Oml置于IOml容量瓶中，加乙腊稀释至刻度，摇匀。 阳124] (7) 250%水平溶液的配制
[01巧]精密量取对照储备液2. 5ml置于IOml容量瓶中，加乙腊稀释至刻度，摇匀。 阳126] (8)空白溶'液 阳127] 采用乙腊作为空白溶液。 阳12引 2、上机测定
[0129] 分别精密量取空白溶液W及各线性水平溶液各lOul，按如下方式进样测试：
[0130] 空白溶液-------------------------------------------------1针 阳131] 30 %水平溶液-------------------------------------------1针
[0132] 50 %水平溶液-------------------------------------------1针
[0133] 100 %水平溶液------------------------------------------1针
[0134] 150 %水平溶液------------------------------------------1针
[0135] 200 %水平溶液------------------------------------------1针
[0136] 250 %水平溶液------------------------------------------1针
[0137] 二、检测结果
[0138] 具体检测结果如表4所示。 阳139] 表4线性实验结果 [0140]
阳14U 由W上的检测结果可W看出，栋桐酸在3. 07~25. 60ug/ml的浓度范围内峰面 积与浓度呈线性关系，线性方程为y = 16. 072X+0. 0053,线性回归系数为0. 9988 (不小于 0. 99)。Y轴截距绝对值与100%水平的峰面积之比为3. 08% (不大于5. 0% );各浓度的 响应值的RSD为4.61% (不大于5.0%)。说明本发明检测方法的线性好，具体的线性关系 图参见附图8。 阳142] 实施例6 :准确度实验
[0143] 一、实验步骤
[0144] 1、溶液配制
[0145] (1)对照储备液的配制 阳146] 取栋桐酸约25mg，精密称定，置于250ml容量瓶中，加乙腊溶解并定容，摇匀即得。 阳147] (2) 50%水平溶液的配制 阳148] 精密量取对照储备液2. 5ml置于50ml容量瓶中，加乙腊稀释至刻度，摇匀。
[0149] (3) 100%水平溶液的配制 阳150] 精密量取对照储备液5. Oml置于50ml容量瓶中，加乙腊稀释至刻度，摇匀。 阳151] (4) 150%水平溶液的配制 阳152] 精密量取对照储备液7. 5ml置于50ml容量瓶中，加乙腊稀释至刻度，摇匀。 阳巧3] (5) 50%准确度溶液的配制
[0154] 精密称取利拉鲁肤约20mg置于IOml容量瓶中，加入50%水平对照品溶液稀释至 刻度，摇匀。平行配制3份。 阳155] 化）100%准确度溶液的配制 阳156] 精密称取利拉鲁肤约20mg置于IOml容量瓶中，加入100%水平对照品溶液稀释至 刻度，摇匀。平行配制3份。 阳157] (7) 150%准确度溶液的配制 阳158] 精密称取利拉鲁肤约20mg置于IOml容量瓶中，加入150 %水平对照品溶液稀释至 刻度，摇匀。平行配制3份。 阳159] (8)空白溶液
[0160] 采用乙腊作为空白溶液。 阳161] (9)对照品溶液的配制
[0162] 精密量取栋桐酸对照储备液5. Oml，置于50ml容量瓶中，加乙腊稀释并定容，摇匀 即得。 阳163] (10)系统适用性溶液
[0164] 采用对照品溶液作为系统适用性溶液。 阳1化]2、上机测定
[0166] 分别精密量取空白溶液、系统适用性溶液W及各水平精确度溶液各lOul，按如下 方式进样测试：
[0167] 空白溶液------------------------------------------------1针（色谱图参 见附图2)
[0168] 系统适用性溶液--------------------------------------6针（色谱图参见附 图3)
[0169] 2份供试品溶液-----------------------------------各1针（色谱图参见附 图4)
[0170] 3份50 %准确度溶液-----------------------------各1针（色谱图参见附图 9) 阳171 ] 3份100 %准确度溶液---------------------------各1针（色谱图参见附图 10) 阳172] 3份150%准确度溶液---------------------------各1针（色谱图参见附图 11) 阳173] 二、检测结果 阳174] 具体检测结果如表5和表6所示。 阳1巧]表5准确度实验结果1 阳 176]
[0178] 表6准确度实验结果2 阳 179]
[0180] 由W上的检测结果可W看出，栋桐酸的回收率均大于90. 0%，且9份准确度实验 溶液中栋桐酸回收率的RSD为0. 47% (不大于5. 0% )，说明本发明的检测方法准确可靠。
【主权项】
1. 一种利拉鲁肽中游离棕榈酸的检测方法，其特征在于，在对利拉鲁肽中的游离脂肪 酸进行高效液相色谱分析过程中，采用电喷雾检测器进行检测。2. 根据权利要求1所述的利拉鲁肽中游离棕榈酸的检测方法，其中高效液相色谱采用 如下的色谱条件：色谱柱为C18柱（100mm*4. 6mm，3um)，流动相为含有40~60m mol/L甲 酸溶液的乙腈和甲醇的混合溶液，乙腈和甲醇的体积比为65:35~85:15 ;流速为0. 5~ 1.0ml/min ;柱温为25~35°C ;进样量为10ul ;洗脱方式为等梯度洗脱。3. 根据权利要求2所述的利拉鲁肽中游离棕榈酸的检测方法，其中高效液相色谱采 用如下的色谱条件：色谱柱为YMC-Triart C18柱（100mm*4. 6mm，3um)，流动相为含有50m mol/L甲酸溶液的乙腈和甲醇的混合溶液，乙腈和甲醇的体积比为80 :20 ;流速为0. 75ml/ min ;柱温为30°C ;进样量为10ul ;洗脱方式为等梯度洗脱。4. 根据权利要求1-3中任一项所述的利拉鲁肽中游离棕榈酸的检测方法，其中电喷雾 检测器的载气为氮气，压力为35psi，范围为100pA。5. 根据权利要求1-4中任一项所述的利拉鲁肽中游离棕榈酸的检测方法，其中的利拉 鲁肽溶液经0. 2 μ m的滤膜过滤。
【专利摘要】本发明属于药物合成技术领域，公开了一种利拉鲁肽中游离棕榈酸的检测方法，该方法在对利拉鲁肽中的游离棕榈酸进行高效液相色谱分析过程中，采用电喷雾检测器进行检测，具有专属性好(检测无干扰)、灵敏度高(检测限为2.05ng)、稳定性高(精密度高)、方法可靠(回收率大于90％)等优点，非常适合于对利拉鲁肽中游离棕榈酸的准确测量。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105717203
【申请号】CN201410720052
【发明人】张雷, 陈友金, 唐洋明, 马亚平, 袁建成
【申请人】深圳翰宇药业股份有限公司
【公开日】2016年6月29日
【申请日】2014年12月2日