一种检测噻吩并吡啶类抗血小板药物疗效的试剂卡及其使用方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物疗效检测试剂领域，涉及一种检测噻吩并吡啶类抗血小板药物疗 效的试剂卡及其使用方法和应用。
【背景技术】
[0002] 临床研究表明，血管发生病变是引发心脑血管疾病的根本病理基础，其中动脉血 管弹性的下降会导致血管收缩期血压升高、舒张期血压降低、使得脉压差增大;如果冠状动 脉出现粥样斑块或血栓形成，则会导致冠心病。冠状动脉形成的血栓从颜色形态上可以分 为3种，即白色血栓、红色血栓以及红白混合血栓。白色血栓主要由血小板异常粘附聚集形 成，这种血栓多发生在体内血管血流速度较快的部位，常见于动脉、心脏或静脉血管的起始 部位；白色血栓下游的血管内血流速度较血管起始部位慢，在流动中易形成小的涡旋，由此 形成的纤维蛋白交联网会阻拦血液中的红细胞与白细胞，并与血小板缠绕在一起共同形成 红白混合血栓，多见于静脉血栓;红色血栓是由纤维蛋白和红细胞组成的，多发生于血流较 缓慢或停滞的部位，静脉血栓较多见。因此，不同部位的血管内血栓形成的因素不同，动脉 血栓形成主要是由血管壁的变化和血小板的异常引起的，而静脉血栓形成中起主要作用的 是凝血和抗凝因素的异常。
[0003] 心脑血管类疾病主要应用抗血小板、抗凝血和溶栓药物来预防和治疗。目前临床 抗血小板治疗的主要途径是抑制血小板的粘附和聚集功能，从而防止血小板形成血栓。因 此，检测血小板聚集功能临床出血与血栓性疾病的诊断及疗效监测有指导意义。现阶段，临 床上应用于血小板聚集功能检测的方法主要有光学比浊法、剪切力诱导血小板聚集法、散 射性粒子检测法、全血电阻抗法、血小板计数法、血栓弹力图法、微量反应板法等。其中光学 比浊法检测血小板聚集，因其操作简便、快速，易于掌握且经济和实用，故在临床上使用范 围最广，并一度被称作为血小板聚集检测"金标准"试验。然而此法亦有其不足之处，影响因 素多且在不同实验室中实际操作方法不同，导致实验结果重复性差，可比性不强，极大地限 制了其在临床上的推广。此外，光学比浊法不能直接检测全血样品，需要对全血样品进行离 心处理，去除红细胞、白细胞等血液中的成分，并不能完全反映血小板在人体环境内受诱导 后聚集的反应性和全过程，使测定结果的准确性没有可靠的保证。
[0004] 因此，全血样品检测血小板聚集功能就显得极为重要，同时也成为了光学比浊法 监测抗血小板药物临床疗效的关键。本发明者们致力于探寻一种能够快速有效检测噻吩并 吡啶类抗血小板药物疗效检测试剂卡和其检测方法，以全血为检测样品，检测血小板聚集 功能和抗血小板药物的抑制率，以期获得质量更优，检测效果更佳的血小板聚集功能检测 方法。从而为医院临床和患者提供更有保障的服务和治疗。
[0005] 然而，目前还没有关于采用光学比浊法检测全血样品血小板聚集功能的报道，因 此，在本领域亟需开发一种能够更加准确地检测血小板聚集功能的检测试剂。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种检测噻吩并吡啶类抗血小板药物疗效的试剂卡及其 使用方法和应用。
[0007] 为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
[0008] 一方面，本发明提供一种检测噻吩并吡啶类抗血小板药物疗效的试剂卡，所述试 剂卡包括如图1所示依次并行排列的彼此独立的四个检测通道，检测通道I中含有通道I检 测试剂，所述通道I检测试剂含有将活化后的染料微球与血小板Gp n b/ma受体配基通过酰 胺键牢固结合，而后加入凝血因子，冻干制得的冻干剂;检测通道II中含有通道II检测试 剂，所述通道II检测试剂含有血小板最大激活剂的冻干剂;检测通道III不含有检测试剂， 检测通道IV中含有通道IV检测试剂，所述通道IV检测试剂含有血小板P2Y12受体激活剂和 P2Y1受体拮抗剂的冻干剂。
[0009] 本发明所述的检测试剂卡能同时从血小板聚集率和抗血小板药物抑制率两个方 面实现对全血样品中血小板聚集功能进行有效评估，相比于传统光学比浊法和一般的血小 板聚集功能检测方法更具有实用价值，更有效，更便捷。
[0010] 优选地，所述染料微球为蓝色染料微球和/或绿色染料微球。
[0011] 优选地，所述染料微球的粒径为2-6微米，例如2微米、2.5微米、3微米、3.5微米、4 微米、4.5微米、5微米、5.5微米或6微米。
[0012] 优选地，所述染料微球为聚苯乙烯或聚二苯乙烯材质。
[0013] 优选的，所述染料微球功能基团为羧基基团，GpIIb/IIIa受体配基的氨基基团与 微球羧基基团通过酰胺键牢固结合，均匀分布在微球表面。
[0014] 在本发明中，染料微球在反应过程中起载体的作用，通常是过量的，GpIIb/IIIa受 体配基用量是根据染料微球的用量而进行适当选择。
[0015] 优选地，所述Gpnb/ma受体配基为兔纤维蛋白原、牛纤维蛋白原或人纤维蛋白原 中的任意一种或至少两种的组合。
[0016] 优选地，所述凝血因子为凝血因子IV。
[0017]优选地，当试剂卡中通入待测液体样品后，所述凝血因子的浓度为〇.5-3mM，例如 0?5mM、0?8mM、ImM、1?2mM、1?4mM、1?6mM、1?8mM、2mM、2?3mM、2?5mM、2?8mM或3mM 〇
[0018] 优选地，所述血小板最大激活剂为凝血酶、凝血酶受体激活肽TRAP-14或其衍生物 中的任意一种或至少两种的组合。
[0019] 优选地，当试剂卡中通入待测液体样品后，所述血小板最大激活剂的浓度为20-100處，例如 20處、25處、30處、35uM、40iiM、45處、50處、55處、60處、6 5uM、70處、75處、80處、85 yM、90yM、95yM或100yM。
[0020] 优选地，所述P2Y12受体激活剂为二磷酸腺苷或其钠盐、钾盐或水合物。
[0021] 优选地，当试剂卡中通入待测液体样品后，所述P2Y12受体激活剂的浓度为10-50y M，例如10處、15虚、18虚、20處、24虚、28處、30虚、3 5虚、38處、40虚、44虚、48處或50虚。优选 地，所述P2Y1受体拮抗剂为A2P5P和/或A3P5P。
[0022]优选地，当试剂卡中通入待测液体样品后，所述P2Y1受体拮抗剂的浓度为20-200y 1，例如20虚、30虚、40處、50處、60處、70處、80虚、90處、100處、120處、140處、160處、180處或 200iiM〇
[0023] 在本发明中，所述检测试剂均以冻干的形式储存在试剂卡的相应通道中。
[0024] 优选地，所述通道I检测试剂、通道II检测试剂和通道IV检测试剂中还含有冻干保 护剂、助悬剂及防腐剂。
[0025]优选地，所述冻干保护剂为蔗糖、乳糖、牛血清白蛋白或吐温80中的任意一种或至 少两种的组合。
[0026]优选地，当试剂卡中通入待测液体样品后，所述冻干保护剂的浓度为20g/L_100g/ L，例如 20g/L、25g/L、30g/L、35g/L、40g/L、50g/L、60g/L、70g/L、80g/L、90g/LS100 g/L。 [0027]优选地，所述助悬剂为微晶纤维素、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮中的任意一种或至 少两种的组合。
[0028]优选地，当试剂卡中通入待测液体样品后，所述助悬剂的浓度为30g/L_80g/L，例 如30g/L、35g/L、40g/L、45g/L、50g/L、55g/L、60g/L、65g/L、70g/L、75g/LS80g/L。
[0029]优选地，所述防腐剂为叠氮化钠。
[0030] 优选地，当试剂卡中通入待测液体样品后，所述防腐剂的浓度为0.1g/L-lg/L，例 如0? lg/L、0.2g/L、0.3g/L、0.4g/L、0.5g/L、0.6g/L、0.7g/L、0.8g/L、0.9g/Ui!Ug/L。
[0031] 本发明所述各物质浓度是指当加入样品后，这些物质溶解在样品中的浓度，同时 也是发生反应或相互作用的最佳浓度范围。
[0032] 优选地，本发明所述噻吩并吡啶类抗血小板药物为噻氯匹定、氯吡格雷或普拉格 雷中的任意一种或至少两种的组合。
[0033] 优选地，本发明所述试剂卡的检测样品可以为全血样品或含血小板的血浆样品。
[0034] 优选地，所述试剂卡还包括进样口、储液池和样品流动通道，进样口与储液池连 通，储液池与样品流动通道连通，样品流动通道与所述四个检测通道连通。
[0035] 另一方面，本发明提供了利用如第一方面所述的试剂卡进行检测的方法，所述方 法为：
[0036] 使待测液体样品通过进样口进入试剂卡的样品流动通道，样品沿着样品流动通道 流动至所述四个检测通道中，检测通道III不含检测试剂作为空白对照，检测通道1、11和 III中的检测试剂溶解在样品中，检测试剂与样品中成分发生反应，相对于空白对照产生信 号变化，通过信号变化来完成对样品的检测。
[0037] 本发明所述试剂卡可以实现对噻吩并吡啶类抗血小板药物临床疗效以及血小板 抑制率的检测，其检测方法为：
[0038] (1)采集枸橼酸钠抗凝全血，全血中含有抗血小板药物，