搅拌反应30min ；
[0029](3)加入3mL 10 %牛血清白蛋白，搅拌反应30min ；
[0030](4)在4°C的条件下，8000rpm，离心30min，弃掉上清；
[0031](5)沉淀用3mL复溶液复溶，4°C保存备用。
[0032]三、盐酸克伦特罗胶体金检测卡的组装
[0033](I)在湿度35%以下，温度20_30°C条件下，用划膜喷金仪将制备好的抗盐酸克伦特罗鼠单抗-胶体金结合物喷涂在样品结合垫22上，在37°C环境下干燥2h，置于干燥缸保存备用。
[0034](2)在湿度40-60%，温度20_30°C条件下，用划膜喷金仪将适当浓度的盐酸克伦特罗-牛血清白蛋白偶联物与羊抗鼠IgG抗体喷涂在硝酸纤维素膜23上，分别作为检测线25与质控线26，在37°C环境下干燥过夜，置于干燥缸保存备用。
[0035](3)将已喷好的硝酸纤维素膜23贴于检测底板2上，然后将吸水垫24贴于硝酸纤维素膜23的一端，两者交叠2mm，将已喷好的样品结合垫22贴于硝酸纤维素膜23的另一端，交叠2_，最后在样品结合垫22那端粘贴聚酯膜21，样品结合垫22的二分一区域覆盖在聚酯膜21之下。
[0036](4)用切条机将粘贴好的大板纵向切成4_宽的试纸条，并装入卡壳I中，即为盐酸克伦特罗胶体金检测卡，将该盐酸克伦特罗胶体金检测卡置于带有干燥剂的铝箔袋中封口常温避光保存。
[0037]四、标准曲线的拟合
[0038]用阴性猪尿作为稀释液，配制系列盐酸克伦特罗标准品:0、0.5、1.5,3.0,4.5、6.0ppb，用盐酸克伦特罗胶体金检测卡检测时，每个浓度分别作4组平齐，用胶体金读卡仪读出τ/c值，以标准品浓度为横坐标，对应的τ/c值(均值)为纵坐标，通过读卡仪内置分析软件，拟合出一条标准曲线，并将该标准曲线记录到二维条形码13中。
[0039]五、样本检测
[0040](I)动物尿液的处理
[0041]尿液不用处理，直接检测。如果尿液混池，实验前先进行6000rpm，离心5min或者进行过滤，取上清进行检测。
[0042](2)检测步骤
[0043]①测试前，将未开封的盐酸克伦特罗胶体金检测卡及待检尿液恢复至室温；
[0044]②胶体金读卡仪打开开关，出现检测界面；
[0045]③将待检尿液用一次性塑料滴管滴加3滴至盐酸克伦特罗胶体金检测卡的加样孔12中，待检尿液按照图1中箭头方向流动；
[0046]④反应3-5min后，在观察窗11中即可看到检测线25、质控线26的显色情况，进一步，将盐酸克伦特罗胶体金检测卡放入胶体金读卡仪的检测区域检测，点击“样品测量”即可，根据二维条形码13中记录的标准曲线，可计算出待检尿液中盐酸克伦特罗的含量，30min后判读无效；
[0047]⑤点击“数据上传”和“打印”即可实现数据上传及结果打印；
[0048]⑥点击“关闭系统”，关闭开关，即可关闭仪器。
[0049]六、盐酸克伦特罗胶体金检测卡使用注意事项
[0050](I)盐酸克伦特罗胶体金检测卡在室温下一次性使用，从原包装铝箔袋中取出盐酸克伦特罗胶体金检测卡在半小时内使用；
[0051](2)检测时避免阳光直射和风直吹。
[0052]以上实施例只是阐述了本实用新型的基本原理和特性，本实用新型不受上述实施例限制，在不脱离本实用新型精神和范围的前提下，本实用新型还有各种变化和改变，这些变化和改变都落入要求保护的本实用新型范围内。本实用新型要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
【主权项】
1.一种定量检测盐酸克伦特罗的胶体金检测卡，其特征在于:包括卡壳及设置于卡壳内的检测底板，所述检测底板上沿液体流动方向依次设置有聚酯膜、样品结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫，所述硝酸纤维素膜上邻近样品结合垫的一端设置有检测线，且硝酸纤维素膜上邻近吸水垫的一端设置有质控线，所述检测线上包被有盐酸克伦特罗-载体蛋白偶联物，所述质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体，所述样品结合垫上包被有抗盐酸克伦特罗鼠单抗-胶体金结合物。
2.根据权利要求1所述的一种定量检测盐酸克伦特罗的胶体金检测卡，其特征在于:所述卡壳由塑料材料制成，所述检测底板由聚氯乙稀材料制成。
3.根据权利要求1所述的一种定量检测盐酸克伦特罗的胶体金检测卡，其特征在于:所述卡壳的正面开有加样孔，所述加样孔位于检测底板的聚酯膜上方。
4.根据权利要求1所述的一种定量检测盐酸克伦特罗的胶体金检测卡，其特征在于:所述卡壳的正面开有观察窗，所述观察窗位于检测底板的硝酸纤维素膜的上方。
5.根据权利要求1所述的一种定量检测盐酸克伦特罗的胶体金检测卡，其特征在于:所述卡壳的正面印刷有二维条形码，所述二维条形码中记录有用于计算盐酸克伦特罗浓度的标准曲线。
6.根据权利要求1所述的一种定量检测盐酸克伦特罗的胶体金检测卡，其特征在于:所述样品结合垫上包被的抗盐酸克伦特罗鼠单抗-胶体金结合物中胶体金颗粒大小为20nm ?40nmo
7.根据权利要求1所述的一种定量检测盐酸克伦特罗的胶体金检测卡，其特征在于:所述检测线上包被有盐酸克伦特罗-载体蛋白偶联物中的载体蛋白为牛血清白蛋白或鸡卵白蛋白或血蓝蛋白。
8.根据权利要求1所述的一种定量检测盐酸克伦特罗的胶体金检测卡，其特征在于:所述吸水垫为滤纸。
【专利摘要】本实用新型公开一种定量检测盐酸克伦特罗的胶体金检测卡，包括卡壳及设置于卡壳内的检测底板，所述检测底板上沿液体流动方向依次设置有聚酯膜、样品结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫，所述硝酸纤维素膜上邻近样品结合垫的一端设置有检测线，且硝酸纤维素膜上邻近吸水垫的一端设置有质控线，所述检测线上包被有盐酸克伦特罗-载体蛋白偶联物，所述质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体，所述样品结合垫上包被有抗盐酸克伦特罗鼠单抗-胶体金结合物。所述一种定量检测盐酸克伦特罗的胶体金检测卡操作简单，成本低，能快速、简单、灵敏、准确地用于动物尿液中盐酸克伦特罗残留量的高通量在线定量检测。
【IPC分类】G01N33-558
【公开号】CN204287190
【申请号】CN201420812213
【发明人】史爱武, 徐波, 刘春梅, 杨晓慧, 李林
【申请人】无锡中德伯尔生物技术有限公司
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2014年12月19日