一种毒素检测用固相萃取小柱的制作方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明设及一种萃取柱。
【背景技术】
[0002] 陈皮在加工储存过程中，由于溫度湿度等影响，很容易霉变而产生如黄曲霉等真 菌，运些真菌代谢从而产生AFTdAFT是曲霉菌及曲霉寄生菌族类产生的一类结构相似的有 毒化合物，其基本结构为二巧喃环和香豆素，是目前已知致癌性最强的一类真菌毒素代谢 物。免疫亲和柱净化样品与HPLC法联用已经成为检测AFT的主要测定方法。但是该法缺点是 一根免疫亲和柱要400余元，高昂的柱子价格使得AFT检测成本非常高，并且免疫亲和柱只 能用于特定目标物净化。作为一项样品前处理技术，固相萃取已经得到广泛的应用。但单一 填料的萃取柱依然有较多的杂质干扰目标化合物的分析。
【发明内容】
[0003] 针对上述技术问题，本发明提供一种毒素检测用固相萃取小柱，包括柱管、下筛 板、下层改性多壁碳纳米管填料层、隔离筛板、上层十八烷基键合硅胶填料层和上筛板;所 述下筛板、下层改性多壁碳纳米管填料层、隔离筛板、上层十八烷基键合硅胶填料层和上筛 板依次由下至上分布于所述柱管中；其中所述下层改性多壁碳纳米管填料层填料用量为 0.4g;所述上层十八烷基键合硅胶填料层填料用量为0.4g;所述上筛板的厚度大于所述下 筛板。
[0004] 本发明的毒素检测用固相萃取小柱采用改性多壁碳纳米管和十八烷基键合硅胶 的双层填充基质，主要用于新会陈皮及其制品中AFT检测的的前处理之中，本发明在保持分 析准确度、灵敏度的前提下，使用固相萃取小柱代替免疫亲和柱，能够大大降低分析成本， 商品免疫亲和柱400元/根，自制固相萃取小柱成本10元/根，可推广应用于AFT的前处理，又 能够实现处理样品重复性好的生产要求。由于上筛板承受更大的压力，所W上筛板的厚度 要大于下筛板。
[0005] 进一步地，所述下筛板的孔径为5~100皿、厚度为3~5mm。
[0006] 进一步地，所述上筛板的孔径为10~200皿，厚度为6~10mm。
[0007] 具体地，所述十八烷基键合硅胶的平均粒度40~60WI1，比表面积550mVg。
[000引具体地，所述改性多壁碳纳米管的直径为10~20nm，长度为0.5~500nm。
[0009] 为了更好地理解和实施，下面结合附图详细说明本发明。
【附图说明】
[0010] 图1是本实用新型的毒素检测用固相萃取小柱的剖面图；
[0011] 图2是0.40yg/L混合标准溶液色谱图，图中1-4峰依次为:AFG2、AFGi、AFB2、AFBi ;
[0012] 图3是应用实施例中新会陈皮样品色谱图；
[0013] 图4是应用实施例中新会陈皮添加 0.50iig/kg水平标准品色谱图；
[0014] 图5是应用实施例中相普茶样品色谱图；
[0015] 图6是应用实施例中陈皮月饼样品色谱图；
[0016] 图7是应用实施例中陈皮梅样品色谱图。
【具体实施方式】
[0017] 固相萃取小柱实施例
[0018] 请参阅图1，其为本实用新型固相萃取小柱的剖面图。包括柱管1、下筛板2、下层改 性多壁碳纳米管填料层3、隔离筛板4、上层十八烷基键合硅胶填料层5和上筛板6。所述下筛 板2、下层改性多壁碳纳米管填料层3、隔离筛板4、上层十八烷基键合硅胶填料层5和上筛板 6依次由下至上分布于所述柱管1中。其中所述上筛板6的厚度要大于所述下筛板2。
[0019] 所述柱管1的容量为IOml,可通过商业渠道购得。所述下筛板2的孔径为5~100皿、 厚度为3~5mm。所述隔离筛板4的孔径为5~100皿，厚度为2~5mm。所述上筛板6的孔径为10 ~200皿，厚度为6~10mm。
[0020] 所述下层改性多壁碳纳米管填料层3的填料为改性多壁碳纳米管，用量为0.4g，所 述改性多壁碳纳米管的纯度>95%，直径为10~20nm，长度为0.5~500nm。其制备方法在 《改性多壁碳纳米管固相萃取-高效液相色谱法测定农产品中痕量残留的4种有机氯农药》 (《色谱》杂志，Vol. 30 ,No. 9，966~970)中有所公开。
[0021 ]所述上层十八烷基键合硅胶填料层5的填料为十八烷基键合硅胶，用量为0.4g，所 述十八烷基键合硅胶的平均粒度为40~60WI1，比表面积为550mVg。
[0022] 本实用新型的固相萃取小柱的制备方法如下:取柱管1，加装下筛板2,称取0.4g的 改性多壁碳纳米管，置于所述下筛板2上，轻轻敲打使填料均匀填充，用隔离筛板4压平，再 称取0.4g的十八烷基键合硅胶，置于所述隔离筛板4上，轻轻敲打，用上筛板6压平，即得。
[0023] 与现有技术相比，本实用新型的毒素检测用固相萃取小柱，通过选择性吸附、净 化，除去新会陈皮及其制品中特有的某些挥发油、黄酬、生物碱等化学成分，W及氨基酸、皂 武类、多糖、脂肪酸、维生素等杂质，达到净化样品，延长分析仪器的使用寿命;而且检测的 灵敏度高，样品的前处理简单；用本发明自制固相萃取小柱代替免疫亲和柱，可大幅降低检 测成本。
[0024] 改性多壁碳纳米管的制备实施例
[00剧称取1.2g多壁碳纳米管置于SOOmL单口烧瓶中，加入90mL浓硫酸，超声振荡2h;再 向烧瓶中加入30mL浓硝酸，超声振荡化;移入恒溫油浴槽中，于120°C下回流化，冷却，静置， 小屯、用吸管吸除上层混酸清液，然后加入1000血去离子水稀释，稀释液过微孔滤膜，反复用 水冲洗滤渣10次W上直至滤液的抑值为7,所得黑色固体经真空烘箱50°C下干燥即得改性 多壁碳纳米管。
[00%] 固相萃取小柱的应用实施例
[0027] 本实施例利用本实用新型的固相萃取小柱测定新会陈皮及其制品中AFT残留的测 定。
[0028] 1样品加标：在新会陈皮、相普茶和陈皮月饼中，分别按0.20iig/kg、0.50iig/kg和 7. ^igAg =种浓度添加 AFT标准品。
[0029] 2样品提取:称取4.OOg步骤1制得的加标新会陈皮、相普茶和陈皮月饼于50ml具塞 离屯、管中，加入IOmL水，振荡Imin，再加入乙腊lOmL，振荡1111；[]1，1000〇1'/111；[]1离屯、5111；[]1。
[0030] 3样品净化:吸取5ml步骤2制得的上清液，转移至"固相萃取小柱实施例"中制得的 固相萃取小柱中，调节真空累的压力整个固相萃取过程流速不超过2ml/min，接收流出液， 氮气吹干，加入〇.5mL正己烧和0.5mLS氣乙酸，密闭振荡Imin,在45°C烘箱中衍生lOmin，氮 气吹干，Wo. 5mL流动相A与流动相B的体积比为82:18的混合溶液溶解，振荡Imin，过0.22皿 微孔滤膜后供HPLC测定。
[0031] 色谱条件：Shim-pack VP-ODS C18色谱柱（250mmX4.6mm，5皿）；流动相A为水，流 动相B为40%(V/V)乙腊溶液，流动相A的体积百分比与流动相B的体积百分比的和始终保持 为100%，按表1进行梯度洗脱；流速：1. OOml/min;柱溫30°C ;进样体积：2化1;激发波长： 360nm，发射波长：440nm。
[0032] <表1〉
[0033]
[0034] 实验结果如表2~4所示，气相色谱图见图2~7。
[0035] <表2新会陈皮AFT测定结果和加标回收率(n = 5)〉
[0036]
[OC
[003引 <表3相普茶AFT测定结果和加标回收率(n = 5)〉
[00391
[0040] <表4陈皮月饼AFT测定结果和加标回收率(n = 5)〉
[0041]
[00创表2~4中"-"表示未检出。从W上数据可W看出，在样品中添力日3个水平的AFT标准 品进行加标回收率试验，平均回收率为78.5 %~103 %，相对标准偏差（RSD)为2.6 %~ 6.5%，表明用本发明制备的AFT固相萃取小柱性能稳定、结果可靠，完全满足AFT痕量分析 的要求。
[0043]本发明并不局限于上述实施方式，如果对本发明的各种改动或变形不脱离本发明 的精神和范围，倘若运些改动和变形属于本发明的权利要求和等同技术范围之内，则本发 明也意图包含运些改动和变形。
【主权项】
1. 一种毒素检测用固相萃取小柱，其特征在于:包括柱管、下筛板、下层改性多壁碳纳 米管填料层、隔离筛板、上层十八烷基键合硅胶填料层和上筛板;所述下筛板、下层改性多 壁碳纳米管填料层、隔离筛板、上层十八烷基键合硅胶填料层和上筛板依次由下至上分布 于所述柱管中；其中所述下层改性多壁碳纳米管填料层填料用量为〇.4g;所述上层十八烷 基键合硅胶填料层填料用量为0.4g;所述上筛板的厚度大于所述下筛板。2. 根据权利要求1所述的毒素检测用固相萃取小柱，其特征在于:所述下筛板的孔径为 5~100μπι、厚度为3~5mm。3. 根据权利要求2所述的固相萃取小柱，其特征在于:所述上筛板的孔径为10~200μπι， 厚度为6~10mm。4. 根据权利要求3所述的固相萃取小柱，其特征在于:所述隔离筛板的孔径为5~100μ m，厚度为2~5mm。5. 根据权利要求2~4任意一项所述的固相萃取小柱，其特征在于:所述十八烷基键合 硅胶的平均粒度40~60μπι，比表面积550m 2/g。6. 根据权利要求2~4任意一项所述的固相萃取小柱，其特征在于:所述改性多壁碳纳 米管的直径为10~20nm，长度为0 · 5~500nm〇
【专利摘要】一种毒素检测用固相萃取小柱，包括柱管、下筛板、下层改性多壁碳纳米管填料层、隔离筛板、上层十八烷基键合硅胶填料层和上筛板；所述下筛板、下层改性多壁碳纳米管填料层、隔离筛板、上层十八烷基键合硅胶填料层和上筛板依次由下至上分布于所述柱管中；其中所述下层改性多壁碳纳米管填料层填料用量为0.4g；所述上层十八烷基键合硅胶填料层填料用量为0.4g；所述上筛板的厚度大于所述下筛板。与现有技术相比，本实用新型的毒素检测用固相萃取小柱，通过选择性吸附、净化，除去新会陈皮及其制品中特有的某些挥发油、黄酮、生物碱等化学成分，以及一些杂质，达到净化样品；而且检测的灵敏度高，样品的前处理简单；还可大幅降低检测成本。
【IPC分类】G01N30/14
【公开号】CN205374391
【申请号】CN201620082988
【发明人】彭晓俊, 蔡璇, 梁伟华, 庞晋山, 李蓉
【申请人】新会出入境检验检疫局综合技术服务中心
【公开日】2016年7月6日
【申请日】2016年1月27日