专利名称:人凝血酶原复合物的制备方法
技术领域：
本发明属于生物制药领域药物制备方法，特别是ー种人凝血酶原复合物的制备方法。
背景技术：
对こ型血友病和因肝脏疾患引起的凝血功能异常，目前主要采用高纯度人凝血因子IX，或是主要含有维生素K依赖的凝血因子II、vn、ix、X的凝血因子复合物(凝血酶原复合物)血浆蛋白制剂。输注人凝血酶原复合物能提高血液中凝血因子II、vn、ix、X的浓度， 主要用于治疗先天性和获得性凝血因子II、vn、ix、X缺乏症。
现有的人凝血酶原复合物的生产方法，均采用去除冷沉淀的上清新鲜血浆或F III 沉淀为原料，包括以下エ序DEAE sephadex A_50凝胶吸附、洗涤、洗脱、超滤、S/D病毒灭活、凝胶吸附、洗涤、洗脱、超滤、除菌分装、冻干、干热灭活。如华兰生物公开的《冻干人凝血酶原复合物的生产方法》(公开号CN 1475569A)，江西博雅公开的《ー种人凝血酶原复合物的制备エ艺》(公开号CN 101974070A)，山东泰邦公开的《提高人凝血酶原复合物稳定性 F VII得率的エ艺方法》。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的上述不足，而提供ー种エ艺简单、安全性高、产品收率高、比活高的人凝血酶原复合物的制备方法。
本发明的技术方案是ー种人凝血酶原复合物的制备方法，包括化浆、调整蛋白浓度和pH值、凝胶吸附、洗涤、洗脱、稀释调整蛋白浓度和离子强度、S/D病毒灭活、再凝胶吸附、再洗涤、洗脱、超滤、除菌分装、冻干、干热灭活エ艺步骤，除菌分装时，检测浓缩液效价， 依据检测结果先加入0. 5-1. 5%的甘氨酸和0. 5-1. 5%盐酸精氨酸，再加入肝素钠。
本发明进一歩的技术方案是调整蛋白浓度和pH值时，将去除冷沉淀、澄清过滤的血浆用2-8°C 0. 9%生理盐水调整蛋白浓度至3. 0-5. 0%，然后用醋酸-醋酸钠缓冲液调pH 值至 6. 8-7.2。
稀释调整蛋白浓度和离子强度后，再加入0. 5-1. 5%的甘氨酸保护剂。
洗涤、洗脱时，洗涤液中氯化钠浓度为0. 10-0. 15mol/L,枸橼酸钠浓度为
0.01-0. 02 mol/L, pH值为6. 8-7. 2 ;洗脱液中氯化钠浓度为I. 5-2. Omol/L,枸櫞酸钠浓度为 0. 01-0. 02 mol/L, pH 值为 6. 8-7. 2。
再洗涤、洗脱时，洗涤液中氯化钠浓度为0. 02-0. 05mol/L,枸櫞酸钠浓度为
0.01-0. 02 mol/L, pH值为6. 8-7. 2 ;洗脱液中氯化钠浓度为I. 5-2. Omol/L，枸櫞酸钠浓度为 0. 01-0. 02 mol/L, pH 值为 6. 8-7. 2。
本发明与现有技术相比，具有エ艺简单、安全性高、产品收率高、比活高等特点，产品收率达到45. 28±2. 26万IU (以IX因子效价计算)/吨血浆，比活达到0. 87±0. 12IU/ mg 本发明在DEAE sephadex A_50凝胶吸附前，用2_8°C 0. 9%的生理盐水调整蛋白浓度至3. 0-5. 0%，然后用醋酸-醋酸钠缓冲液调整pH值至6. 8-7. 2，利用血浆中各组分蛋白等电点的差异，使凝血酶原II、VII、IX、X因子充分被DEAE sephadex A_50凝胶吸附，而其他蛋白尽可能不吸附或少吸附。试验结果表明，本发明与现有エ艺比较，以IX因子为例，产品得率提高 15-20%,比活由原来的 0. 62 ±0. 26IU/mg 提高至Ij 0. 87 ±0. 12IU/mg。
本发明在洗涤、洗脱时，先用氯化钠浓度为0.050-0.075mol/L，枸櫞酸钠浓度为 0. 01-0. 02 mol/L, pH值为6. 8-7. 2的洗涤液洗涤，再用氯化钠浓度为I. 5-2. Omol/L,枸橼酸钠浓度为0. 01-0. 02 mol/L，pH值为6. 8-7. 2的洗脱液洗脱，通过控制洗涤液和洗脱液的氯化钠、枸櫞酸钠浓度以及PH值，达到既能有效去除杂蛋白，又能尽可能多的保留有效成分II、vn、ix、X因子的活性，明显提高这类相关因子的回收率。以IX因子为例，试验结果表明，本发明此步操作回收率可以达到91. 87%±2. 56%，经进ー步处理后，所得制品的总回收率达到72%以上，比现有エ艺提高了 15-20%。
本发明在S/D病毒灭活前，先将洗脱液用0. 45-1. Oum的滤芯过滤除去细小颗粒， 然后用0-8°C注射用水将洗脱液稀释至蛋白浓度为0. 5-2. 5%，离子强度为5-15mS/cm，加入
0.5-1. 5%的甘氨酸保护剂，最后加入S/D溶液，由于降低了蛋白浓度，加入了蛋白保护剂， 既保证了 s/d病毒灭活效果，在操作过程中又能使有效成分II、vn、ix、X因子的活性损失更少。
本发明在S/D病毒灭活后，先使用氯化钠浓度为0. 02-0. 05mol/L,枸橼酸钠浓度为0.01-0. 02 mol/L, pH值为6. 8-7. 2的洗涤液洗涤7_10次，再用氯化钠浓度为
1.5-2. Omol/L,枸櫞酸钠浓度为0. 01-0. 02 mol/L, pH值为6. 8-7. 2的洗脱液洗脱2-3次， 通过分别控制再洗涤、洗脱时洗涤液和洗脱液的氯化钠浓度、枸櫞酸钠浓度、PH值，以及洗涤次数、洗脱次数，达到既能有效去除S/D残留，同时又能尽可能多的保留有效成分II、vn、 IX、X因子。以IX因子为例，试验结果表明本发明此步操作比现有エ艺的回收率高3%左右。
本发明在除菌分装前加入0. 5-1. 5%的甘氨酸和0. 5-1. 5%盐酸精氨酸，以IX因子总效价的0. 2-0. 3倍加入肝素钠作为成品保护剂。由于冻干和干热灭活对制品效价有较大影响，本发明采用双氨基酸作为成品保护剂，既能保证产品能有效的进行病毒灭活，又有效的保留了有效成分n、vn、ix、x因子的活性。与单ー氨基酸保护剂比较，比活由原来的 0. 62±0. 26IU/mg 提高到 0. 87±0. 12IU/mg。
以下结合具体实施方式
对本发明的详细内容作进ー步描述。
具体实施方式
基本要求
1、原料血浆的采集和质量应符合《中国药典》血液制品生产用人血浆的要求；
2、生产设备管线器具应清洁消毒；
3、生产过程应符合血液制品生产规范要求。
实施例一
ー种人凝血酶原复合物的制备方法，包括如下エ艺步骤
(I)化浆以符合药典要求的低温冰冻血浆为原料，用酒精消毒血浆袋表面后，用注射用水化浆，混浆温度0-4°C，再离心去除冷沉淀，澄清过滤；(2)调整蛋白浓度和pH值将上述去除冷沉淀、澄清过滤的血浆调整蛋白浓度至3.0%， 然后用醋酸-醋酸钠缓冲液调PH值至6. 8-7. 2 ；
(3)凝胶吸附按I.0-1. 5kg干胶/IOOOkg血浆量加入用平衡液处理后DEAE sephadex A-50凝胶，搅拌吸附45-60分钟，收集凝胶，上清液并入血浆罐中，平衡液中氯化钠浓度为 0. 050-0. 075mol/L,枸櫞酸钠浓度为 0. 01-0. 02 mol/L, pH 值为 6. 8-7. 2 ；
(4)洗涤、洗脱先用洗涤液洗涤凝胶2-3次，再用洗脱液洗脱凝胶2-3次，收集洗脱
液；
(5)稀释调整蛋白浓度和离子强度将上述洗脱液用0.45-1. Oum的滤芯过滤除去细小颗粒，然后用0-8°C注射用水将洗脱液稀释至蛋白浓度为0. 5-2. 5%，离子强度为5-15ms/ cm ；
(6)S/D病毒灭活在洗脱液中加入S/D溶液，使TNBP (磷酸三丁酷)和TWeen80 (吐温-80)终浓度分别为0. 3%和1%，24-26°C保温6小时;
(7)再凝胶吸附将S/D病毒灭活后的蛋白溶液，按0.8-1. 2kg干胶/IOOOkg血浆量加入用平衡液处理后DEAE sephadex A_50凝胶，搅拌吸附45-60分钟，收集凝胶；
(8)再洗涤、洗脱用洗涤液洗涤凝胶7-10次，再用洗脱液洗脱凝胶2-3次，收集洗脱
液；
(9)超滤将洗脱液用0.45-1. Oum的滤芯过滤，收集滤液，用十万分子量膜的超滤器超滤预浓缩至洗脱液一半，然后用透析液对半超滤3-5次，透析液中枸櫞酸钠浓度为 0. 01-0. 02 mol/L, pH 值为 6. 8-7. 2 ；
(10)除菌分装检测浓缩液效价，依据检测结果先加入0.5-1. 5%的甘氨酸和0. 5-1. 5% 盐酸精氨酸，再以IX因子总效价的0. 2-0. 3倍加入肝素钠作为成品保护剂，然后进行配制、 除囷分装；
(11)冻干、干热灭活冻干、出柜、轧盖后用99.5-100. 5°C水浴干热病毒灭活30分钟。 实施例ニ
ー种人凝血酶原复合物的制备方法，包括如下エ艺步骤
(1)化浆以符合药典要求的低温冰冻血浆为原料，用酒精消毒血浆袋表面后，用注射用水化浆，混浆温度0-4°C，再离心去除冷沉淀，澄清过滤；
(2)调整蛋白浓度和pH值将上述去除冷沉淀、澄清过滤的血浆用2-8°C0. 9%生理盐水调整蛋白浓度至3. 5%，然后用醋酸-醋酸钠缓冲液调pH值至6. 8-7. 2 ；
(3)凝胶吸附按I.0-1. 5kg干胶/IOOOkg血浆量加入用平衡液处理后DEAE sephadex A-50凝胶，搅拌吸附45-60分钟，收集凝胶，上清液并入血浆罐中，平衡液中氯化钠浓度为 0. 050-0. 075mol/L,枸櫞酸钠浓度为 0. 01-0. 02 mol/L, pH 值为 6. 8-7. 2 ；
(4)洗涤、洗脱先用洗涤液洗涤凝胶2-3次，再用洗脱液洗脱凝胶2-3次，收集洗脱
液；
(5)稀释调整蛋白浓度和离子强度将上述洗脱液用0.45-1. Oum的滤芯过滤除去细小颗粒，然后用0-8°C注射用水将洗脱液稀释至蛋白浓度为0. 5-2. 5%，离子强度为5-15ms/ cm ；
(6)S/D病毒灭活在洗脱液中加入S/D溶液，使TNBP (磷酸三丁酷)和TWeen80 (吐温-80)终浓度分别为0. 3%和1%，24-26°C保温6小时;(7)再凝胶吸附将S/D病毒灭活后的蛋白溶液，按0.8-1. 2kg干胶/IOOOkg血浆量加入用平衡液处理后DEAE sephadex A-50凝胶，搅拌吸附45-60分钟，收集凝胶；
(8)再洗涤、洗脱用洗涤液洗涤凝胶7-10次，再用洗脱液洗脱凝胶2-3次，收集洗脱
液；
(9)超滤将洗脱液用0.45-1. Oum的滤芯过滤，收集滤液，用十万分子量膜的超滤器超滤预浓缩至洗脱液一半，然后用透析液对半超滤3-5次，透析液中枸櫞酸钠浓度为 0. 01-0. 02 mol/L, pH 值为 6. 8-7. 2 ；
(10)除菌分装检测浓缩液效价，依据检测结果先加入0.5-1. 5%的甘氨酸和0. 5-1. 5% 盐酸精氨酸，再以IX因子总效价的0. 2-0. 3倍加入肝素钠作为成品保护剂，然后进行配制、 除囷分装；
(11)冻干、干热灭活冻干、出柜、轧盖后用99.5-100. 5°C水浴干热病毒灭活30分钟。
实施例三
ー种人凝血酶原复合物的制备方法，包括如下エ艺步骤
(1)化浆以符合药典要求的低温冰冻血浆为原料，用酒精消毒血浆袋表面后，用注射用水化浆，混浆温度0-4°C，再离心去除冷沉淀，澄清过滤；
(2)调整蛋白浓度和pH值将上述去除冷沉淀、澄清过滤的血浆用2-8°C0. 9%生理盐水调整蛋白浓度至4. 0%，然后用醋酸-醋酸钠缓冲液调pH值至6. 8-7. 2 ；
(3)凝胶吸附按I.0-1. 5kg干胶/IOOOkg血浆量加入用平衡液处理后DEAE sephadex A-50凝胶，搅拌吸附45-60分钟，收集凝胶，上清液并入血浆罐中，平衡液中氯化钠浓度为
0.050-0. 075mol/L,枸櫞酸钠浓度为 0. 01-0. 02 mol/L, pH 值为 6. 8-7. 2 ；
(4)洗涤、洗脱先用洗涤液洗涤凝胶2-3次，再用洗脱液洗脱凝胶2-3次，收集洗脱
液；
(5)稀释调整蛋白浓度和离子强度将上述洗脱液用0.45-1. Oum的滤芯过滤除去细小颗粒，然后用0-8°C注射用水将洗脱液稀释至蛋白浓度为0. 5-2. 5%，离子强度为5-15ms/ cm,再加入0. 8%的甘氨酸保护剂。
(6) S/D病毒灭活在洗脱液中加入S/D溶液，使TNBP (磷酸三丁酷)和TWeen80 (吐温-80)终浓度分别为0. 3%和1%，24-26°C保温6小时;
(7)再凝胶吸附将S/D病毒灭活后的蛋白溶液，按0.8-1. 2kg干胶/IOOOkg血浆量加入用平衡液处理后DEAE sephadex A-50凝胶，搅拌吸附45-60分钟，收集凝胶；
(8)再洗涤、洗脱用洗涤液洗涤凝胶7-10次，再用洗脱液洗脱凝胶2-3次，收集洗脱
液；
(9)超滤将洗脱液用0.45-1. Oum的滤芯过滤，收集滤液，用十万分子量膜的超滤器超滤预浓缩至洗脱液一半，然后用透析液对半超滤3-5次，透析液中枸櫞酸钠浓度为
0.01-0. 02 mol/L, pH 值为 6. 8-7. 2 ；
(10)除菌分装检测浓缩液效价，依据检测结果先加入0.5-1. 5%的甘氨酸和0. 5-1. 5% 盐酸精氨酸，再以IX因子总效价的0. 2-0. 3倍加入肝素钠作为成品保护剂，然后进行配制、 除囷分装；
(11)冻干、干热灭活冻干、出柜、轧盖后用99.5-100. 5°C水浴干热病毒灭活30分钟。
实施例四ー种人凝血酶原复合物的制备方法，包括如下エ艺步骤
(1)化浆以符合药典要求的低温冰冻血浆为原料，用酒精消毒血浆袋表面后，用注射用水化浆，混浆温度0-4°C，再离心去除冷沉淀，澄清过滤；
(2)调整蛋白浓度和pH值将上述去除冷沉淀、澄清过滤的血浆用2-8°C0. 9%生理盐水调整蛋白浓度至4. 5%，然后用醋酸-醋酸钠缓冲液调pH值至6. 8-7. 2 ；
(3)凝胶吸附按I.0-1. 5kg干胶/IOOOkg血浆量加入用平衡液处理后DEAE sephadex A-50凝胶，搅拌吸附45-60分钟，收集凝胶，上清液并入血浆罐中，平衡液中氯化钠浓度为 0. 05-0. 075mol/L,枸櫞酸钠浓度为 0. 01-0. 02 mol/L, pH 值为 6. 8-7. 2 ；
(4)洗漆、洗脱先用洗漆液洗漆凝胶2-3次，洗漆液中氯化钠浓度为0.12mol/L,枸橼酸钠浓度为0. 015 mol/L, pH值为6. 8-7. 2 ;再用洗脱液洗脱凝胶2_3次，收集洗脱液，洗脱液中氯化钠浓度为I. 8mol/L,枸櫞酸钠浓度为0. 015 mol/L, pH值为6. 8-7. 2 ；
(5)稀释调整蛋白浓度和离子强度将上述洗脱液用0.45-1. Oum的滤芯过滤除去细小颗粒，然后用0-8°C注射用水将洗脱液稀释至蛋白浓度为0. 5-2. 5%，离子强度为5-15ms/ cm，再加入I. 2%的甘氨酸保护剂。
(6) S/D病毒灭活在洗脱液中加入S/D溶液，使TNBP (磷酸三丁酷)和TWeen80 (吐温-80)终浓度分别为0. 3%和1%，24-26°C保温6小时;
(7)再凝胶吸附将S/D病毒灭活后的蛋白溶液，按0.8-1. 2kg干胶/IOOOkg血浆量加入用平衡液处理后DEAE sephadex A-50凝胶，搅拌吸附45-60分钟，收集凝胶；
(8)再洗涤、洗脱用洗涤液洗涤凝胶7-10次，再用洗脱液洗脱凝胶2-3次，收集洗脱
液；
(9)超滤将洗脱液用0.45-1. Oum的滤芯过滤，收集滤液，用十万分子量膜的超滤器超滤预浓缩至洗脱液一半，然后用透析液对半超滤3-5次，透析液中枸櫞酸钠浓度为
0.01-0. 02 mol/L, pH 值为 6. 8-7. 2 ；
(10)除菌分装检测浓缩液效价，依据检测结果先加入0.5-1. 5%的甘氨酸和0. 5-1. 5% 盐酸精氨酸，再以IX因子总效价的0. 2-0. 3倍加入肝素钠作为成品保护剂，然后进行配制、 除囷分装；
(11)冻干、干热灭活冻干、出柜、轧盖后用99.5-100. 5°C水浴干热病毒灭活30分钟。
实施例五
ー种人凝血酶原复合物的制备方法，包括如下エ艺步骤
(1)化浆以符合药典要求的低温冰冻血浆为原料，用酒精消毒血浆袋表面后，用注射用水化浆，混浆温度0-4°C，再离心去除冷沉淀，澄清过滤；
(2)调整蛋白浓度和pH值将上述去除冷沉淀、澄清过滤的血浆用2-8°C0. 9%生理盐水调整蛋白浓度至5. 0%，然后用醋酸-醋酸钠缓冲液调pH值至6. 8-7. 2 ；
(3)凝胶吸附按I.0-1. 5kg干胶/IOOOkg血浆量加入用平衡液处理后DEAE sephadex A-50凝胶，搅拌吸附45-60分钟，收集凝胶，上清液并入血浆罐中，平衡液中氯化钠浓度为
0.05-0. 075mol/L,枸櫞酸钠浓度为 0. 01-0. 02 mol/L, pH 值为 6. 8-7. 2 ；
(4)洗漆、洗脱先用洗漆液洗漆凝胶2-3次，洗漆液中氯化钠浓度为0.15mol/L,枸橼酸钠浓度为0. 02 mol/L, pH值为6. 8-7. 2 ;再用洗脱液洗脱凝胶2_3次，收集洗脱液，洗脱液中氯化钠浓度为2. 0mol/L,枸櫞酸钠浓度为0. 02 mol/L, pH值为6. 8-7. 2 ；(5)稀释调整蛋白浓度和离子强度将上述洗脱液用0. 45-1. Oum的滤芯过滤除去细小颗粒，然后用0-8°C注射用水将洗脱液稀释至蛋白浓度为0. 5-2. 5%，离子强度为5-15ms/ cm，再加入I. 5%的甘氨酸保护剂。
(6) S/D病毒灭活在洗脱液中加入S/D溶液，使TNBP (磷酸三丁酷)和TWeen80 (吐温-80)终浓度分别为0. 3%和1%，24-26°C保温6小时;
(7)再凝胶吸附将S/D病毒灭活后的蛋白溶液，按0.8-1. 2kg干胶/IOOOkg血浆量加入用平衡液处理后DEAE sephadex A-50凝胶，搅拌吸附45-60分钟，收集凝胶；
(8)再洗涤、洗脱用洗涤液洗涤凝胶7-10次，洗涤液中氯化钠浓度为0.05mol/L，枸橼酸钠浓度为0. 02 mol/L, pH值为6. 8-7. 2 ;再用洗脱液洗脱凝胶2_3次，收集洗脱液，洗脱液中氯化钠浓度为2. Omol/L,枸櫞酸钠浓度为0. 02 mol/L, pH值为6. 8-7. 2 ；
(9)超滤将洗脱液用0.45-1. Oum的滤芯过滤，收集滤液，用十万分子量膜的超滤器超滤预浓缩至洗脱液一半，然后用透析液对半超滤3-5次，透析液中枸櫞酸钠浓度为
0.01-0. 02 mol/L, pH 值为 6. 8-7. 2 ；
(10)除菌分装检测浓缩液效价，依据检测结果先加入I.5%的甘氨酸和0. 5-1. 5%盐酸精氨酸，以K因子总效价的0. 2-0. 3倍加入肝素钠作为成品保护剂，再进行配制、除菌分装;
(11)冻干、干热灭活冻干、出柜、轧盖后用99.5-100. 5°C水浴干热病毒灭活30分钟。
将本发明上述方法得到的凝血酶原复合物制品与现有エ艺处理得到的凝血酶原复合物比较，试验结果见表一。
表I 本发明方法与现有ェ艺制备凝血酶原复合物各ェ序IX因子效价对照试验结果
权利要求
1.ー种人凝血酶原复合物的制备方法，包括化浆、调整蛋白浓度和PH值、凝胶吸附、洗涤、洗脱、稀释调整蛋白浓度和离子强度、S/D病毒灭活、再凝胶吸附、再洗涤、洗脱、超滤、除菌分装、冻干、干热灭活エ艺步骤，其特征是除菌分装时，检测浓缩液效价，依据检测结果先加入0. 5-1. 5%的甘氨酸和·0. 5-1. 5%盐酸精氨酸，再以IX因子总效价的0. 2-0. 3倍加入肝素钠作为成品保护剂，然后进行配制、除菌分装。
2.根据权利要求
I所述的人凝血酶原复合物的制备方法，其特征是调整蛋白浓度和pH 值时，将去除冷沉淀、澄清过滤的血浆用2-8°C 0. 9%生理盐水调整蛋白浓度至3. 0-5. 0%，然后用醋酸-醋酸钠缓冲液调PH值至6. 8-7. 2。
3.根据权利要求
I或2所述的人凝血酶原复合物的制备方法，其特征是稀释调整蛋白浓度和离子强度后，再加入0. 5-1. 5%的甘氨酸保护剂。
4.根据权利要求
I或2所述的人凝血酶原复合物的制备方法，其特征是洗涤、洗脱时，洗涤液中氯化钠浓度为0. 10-0. 15mol/L，枸櫞酸钠浓度为0. 01-·0. 02 mol/L, pH值为 6. 8-7. 2 ;洗脱液中氯化钠浓度为I. 5-2. OmoI/L,枸櫞酸钠浓度为0. 01-0. 02 mol/L, pH值为 6. 8-7. 2。
5.根据权利要求
3所述的人凝血酶原复合物的制备方法，其特征是洗涤、洗脱吋， 洗涤液中氯化钠浓度为0. 10-0. 15mol/L,枸櫞酸钠浓度为0.01-·0.02 mol/L, pH值为 6. 8-7. 2 ;洗脱液中氯化钠浓度为I. 5-2. Omol/L，枸櫞酸钠浓度为0. 01-0. 02 mol/L, pH值为 6. 8-7. 2。
6.根据权利要求
I或2所述的人凝血酶原复合物的制备方法，其特征是再洗涤、洗脱吋，洗涤液中氯化钠浓度为0. 02-0. 05mol/L,枸櫞酸钠浓度为0. 01-·0. 02 mol/L, pH值为 6. 8-7. 2 ;洗脱液中氯化钠浓度为I. 5-2. Omol/L，枸櫞酸钠浓度为0. 01-0. 02 mol/L, pH值为 6. 8-7. 2。
7.根据权利要求
3所述的人凝血酶原复合物的制备方法，其特征是再洗涤、洗脱吋， 洗涤液中氯化钠浓度为0.02-0. 05mol/L，枸櫞酸钠浓度为0.01-·0.02 mol/L, pH值为 6. 8-7. 2 ;洗脱液中氯化钠浓度为I. 5-2. Omol/L，枸櫞酸钠浓度为0. 01-0. 02 mol/L, pH值为 6. 8-7. 2。
8.根据权利要求
4所述的人凝血酶原复合物的制备方法，其特征是再洗涤、洗脱吋， 洗涤液中氯化钠浓度为0.02-0. 05mol/L，枸櫞酸钠浓度为0.01-·0.02 mol/L, pH值为 6. 8-7. 2 ;洗脱液中氯化钠浓度为I. 5-2. 0mol/L,枸櫞酸钠浓度为0. 01-0. 02 mol/L, pH值为 6. 8-7. 2。
9.根据权利要求
5所述的人凝血酶原复合物的制备方法，其特征是再洗涤、洗脱吋， 洗涤液中氯化钠浓度为0. 02-0. 05mol/L,枸櫞酸钠浓度为0. 01-·0. 02 mol/L, pH值为·6.8-7. 2 ;洗脱液中氯化钠浓度为I. 5-2. Omol/L，枸櫞酸钠浓度为0. 01-0. 02 mol/L, pH值为 6. 8-7. 2。
专利摘要
一种高收率人凝血酶原复合物的制备方法，包括化浆、调整蛋白浓度和pH值、凝胶吸附、洗涤、洗脱、稀释调整蛋白浓度和离子强度、S/D病毒灭活、再凝胶吸附、再洗涤、洗脱、超滤、除菌分装、冻干、干热灭活工艺步骤，除菌分装时，检测浓缩液效价，依据检测结果先加入0.5-1.5%的甘氨酸和0.5-1.5%盐酸精氨酸，再以Ⅸ因子总效价的0.2-0.3倍加入肝素钠作为成品保护剂，然后进行配制、除菌分装。本发明与现有技术相比，具有工艺简单、安全性高、产品收率高、比活高等特点，产品收率达到45.28±2.26万IU(以IX因子效价计算)/吨血浆，比活达到0.87±0.12IU/mg。
文档编号C12N9/74GKCN102604920SQ201210098909
公开日2012年7月25日 申请日期2012年4月6日
发明者单永红, 岳跃飞, 资道凤, 黄忠文 申请人:湖南紫光古汉南岳制药有限公司导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan