八肽修饰的地塞米松、制备、纳米结构和应用
【技术领域】
[000。 本发明涉及八肤Lys (AA-Asp-Gly-Arg) -His-Gly-Glu修饰的地塞米松，八肤中的 AA为kVal或kPhe残基。涉及它们的制备方法，涉及它们的纳米结构，涉及它们对小鼠耳 后必肌移植免疫排斥反应的抑制作用，涉及它们对二甲苯导致炎症反应的抑制作用，进一 步涉及它们不像地塞米松郝样会产生骨质疏松及血栓副作用。因而本发明涉及下式的八肤 修饰的地塞米松在制备免疫抑制和抗炎药物的应用前景。本发明属于生物医药领域。
【背景技术】
[0002] 通过器官移植替换废旧器官，已经成为临床外科的常规治疗手段。器官移植中免 疫排斥反应是器官移植失败的最主要因素。接受器官移植的患者，术后服用地塞米松类糖 皮质激素免疫抑制剂，是避免排斥反应和延长移植器官存活时间的重要措施之一。地塞米 松类糖皮质激素在临床的另外的重要应用是，治疗风湿性疾病，自身免疫病和严重感染或 炎性疾病。患者长期使用地塞米松类糖皮质激素，不可避免地诱发骨质疏松和血栓性疾病。 目前，降低地塞米松类糖皮质激素副作用风险的唯一办法，就是停药。停药的后果是，降低 疗效。改造地塞米松类糖皮质激素的结构，降低或规避副作用，是地塞米松类糖皮质激素研 究的热点。
[000引发明人曾经用RGD四肤修饰皮质激素，制备了结构A的化合物。它们在1. 43 μ mol/ kg剂量下，可延长移植的乳鼠必肌存活时间。它们在25. 5 μ mol/kg剂量下，可抑制小鼠炎 症。它们在1. 43 μ mol/kg剂量下，不会诱发小鼠患骨质疏松症。它们在1. 43 μ mol/kg剂 量下，是否不存在血栓形成风险，当时没有定论。
[0004]
[0005] 发明人还曾经用尿毒素 Η肤修饰氨化可的松和泼尼松龙，制备了结构B的化合 物。它们分别在7. 5mmol/kg和2. Ommol/kg剂量下，可延长移植的乳鼠必肌存活时间。没 有发现它们的抗炎活性。它们在7. 5mmol/kg和2. Ommol/kg剂量下，是否不存在骨质疏松 和血栓形成风险，当时没有定论。
[0006]
结构B.发明人还曾经公开的尿毒素 Η化修饰的氨化可的松和泼尼松龙。
[0007] 采用新方法改造地塞米松的结构，进一步降低用药剂量，不仅消除骨质疏松副作 用，而且消除血栓形成副作用，是发明人一直努力发展的新技术。经过各种组合，发明人认 识到肤与酱体五元环被五个W上原子隔离是问题之一。于是发明人用己醜基代替了二醜 基，制备了下式的化合物。疗效没有明显改进。
[0008]
[0009] 接着，发明人采取RGD四肤逆转连接到心1^73的侧链氨基上的策略，制备了下式的 化合物。虽然疗效没有明显改进，但是骨质疏松和血栓形成副作用都不再发生。
[0010]
[0011] 最后，发明人采取尿毒素 Η肤His-Gly-Glu逆转连接到上面化合物的kLys的 α-氨基上的策略，制备了本发明的化合物，达到了降低用药剂量，消除骨质疏松副作用和 消除血栓形成副作用Η重目标。根据送些研究，发明人提出了本发明。
【发明内容】
[0012] 本发明要解决的第一个技术问题是，提出下式的八肤修饰的地塞米松结构。式中 ΑΑ为kVal和kPhe残基。
[0013]
[0014] 本发明要解决的第二个技术问题是，提供制备八肤 Lys (AA-Asp-Gly-Arg) -His-Gly-Glu 修饰的地塞米松（式中 AA 为 kVal 或 kPhe 残基）的 方法，该化合物包括Η大步骤：
[001引 1)在DMS0中，Ν址催化地塞米松17位居己醜基的居基与漠己酸己醋脱皿r，将17 位居己醜基转化为己氧撰基甲氧己醜基。再在化0H溶液中将17位己氧撰基甲氧己醜基转 化为17位駿甲氧己醜基；
[0016] 2)按照标准的液相接肤法，逐步接肤，将kBoc-Lys的侧链氨基与駿端游离的全 保护的RGDV或RGDF的駿端偶联，将kLys的駿端与α -氨基游离的全保护的化s-Gly-Glu 的 N 端偶联，制备全保护的八肤 Fmoc-Lys [AA-Asp (OMe)-Gly-Arg (Tos)-Boc) ]-His-Gly-Gl u (OBzl) -OBzl，然后在20%脈巧的DMF溶液中脱Fmoc制备N游离的全保护八肤Lys [AA-As p(OMe)-Gly-Arg灯os)-Boc)]-His-Gly-Glu(OBzl)-OBzl，式中AA为レVal或レPhe残基；
[0017] 扣在HATU，册化和NMM存在下，在无水DMF中，先将步骤1得到的地塞米 松-17-駿酸与步骤 2 得到的 Lys [AA-Asp (OMe) -Gly-Arg 灯OS) -Boc) ] -His-Gly-Glu (0B zl)-〇Bzl偶联，再在H氣己酸中用H氣甲礙酸脱去全部保护基，制得权利要求1的八肤 Lys (AA-Asp-Gly-Arg) -His-Gly-Glu 修饰的地塞米松（式中 AA 为 kVal 或 kPhe 残基）。 [001引本发明要解决的第Η个技术问题是，评价八肤 Lys (AA-Asp-Gly-Arg) -His-Gly-Glu 修饰的地塞米松（式中 ΑΑ 为 kVal 或 kPhe 残基）延 长小鼠耳后移植必肌存活时间。
[0019] 本发明要解决的第四个技术问题是，评价八肤 Lys (AA-Asp-Gly-Arg) -His-Gly-Glu 修饰的地塞米松（式中 AA 为 kVal 或 kPhe 残基）抑 制小鼠炎症的活性。
[0020] 本发明要解决的第五个技术问题是，评价八肤 Lys (AA-Asp-Gly-Arg) -His-Gly-Glu 修饰的地塞米松（式中 AA 为 kVal 或 kPhe 残基）抑 制大鼠血栓形成的活性。
[0021] 本发明要解决的第六个技术问题是，评价八肤 Lys (AA-Asp-Gly-Arg) -His-Gly-Glu 修饰的地塞米松（式中 AA 为 kVal 或 kPhe 残基）抑 制小鼠骨质疏松的活性。
【附图说明】
[0022] 图 1 八肤 Lys (AA-Asp-Gly-Arg) -His-Gly-Glu 修饰的地塞米松（式中 AA 为 kVal 或レPhe残基）的合成路线.i)DMS0，BrCH2C02C2H5，N址；ii)Me0H，化0H;iii)DCC，册Bt，NMM; iv)4N肥l/?t0Ac，v/v)H2，Pt/CパリHATU，H0Bt，NMM;viリ20%脈巧/DMF;viii)TFMSA，TFA。
[0023] 图 2 浓度为 1. 43X 10 6M 的八肤 Lys(AA-Asp-Gly-Arg)-His-Gly-Glu 修饰的地塞 米松（式中AA为L-Val或L-Phe残基）在水溶液中的透射电镜照片。
[0024] 图3化合物对小鼠耳后必肌移植必肌存活的影响，η = 10, 口服给药，0. 1 μ mol/ kg/day，连续给药15天。
【具体实施方式】
[00巧]为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。送些实施例完全是例证性的，它 们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
[0026] 实施例 1 制备 Boc-Gly-Glu (OBzl) -OBzl
[0027] 称取（30. 0mmol)Boc-Gly 5. 294g，4. 353g(32. 5mmol)H0Bt，干燥四氨巧喃灯HF) 溶解，冰浴下揽拌，向其中滴加 THF溶解的7. 406g(35. 9mmol)DCC，揽拌活化30分钟后加入 15. 572g(31. 3mmol)TosH · Glu((ffizl)-(ffizl，NMM 调抑=8,室温反应 12 小时，TLCKHzClz/ MeOH = 20/1)，显示原料点消失。过滤除去DCU，滤液减压浓缩，残留物用200血己酸己醋溶 解，得到的己酸己醋溶液依次用50mL饱和碳酸氨钢水溶液，50mL饱和氯化钢水溶液，50mL 饱和硫酸氨钟水溶液，50mL饱和氯化钢水溶液，50mL饱和碳酸氨钢水溶液，50mL饱和氯化 钢水溶液各洗3次，己酸己醋层用无水硫酸钢干燥，过滤，滤液减压浓缩，得13. Og(88. 4% ) 标题化合物。
[0028] 实施例 2 制备肥1 . Gly-Glu (OBzl) -OBzl
[0029] 冰浴下向 13. Og (26. 9mmol) Boc-Gly-Glu (OBzl)-〇Bz 加入 200血 4M 的氯化氨的己 酸己醋溶液，反应2小时后，化C(CH2Cl2/MeOH = 20/1)显示原料点消失。减压浓缩。残留 物用无水己酸己醋溶解，减压浓缩。该操作重复3次。残留物用无水己離溶解，减压浓缩。 该操作也重复3次。得12. 5g(96. 1% )标题化合物。
[0030] 实施例 3 制备 Boc-His 度OC) -Gly-Glu (0化1) -0化1
[0031] 称取 1. 400g(3. 9mmol)Boc-His 度OC)，0. 561g(4. OmmoDHOBt，干燥四氨巧喃 灯Η巧溶解，冰浴下揽拌，向其中滴加 THF溶解的0. 975g(4. 7mmol)DCC，揽拌活化30分 钟后加入2. 0g(4. 8臟〇^肥1 · Gly-Glu(0Bzl)-0Bzl，NMM调抑=8,室温反应12小时， 化C(CH2Cl2/MeOH= 20/1)，显示原料点消失。过滤除去DCU，滤液减压浓缩，残留物用lOOmL 己酸己醋溶解，得到的己酸己醋溶液依次用饱和碳酸氨钢20mL饱和碳酸氨钢水溶液，饱和 20mL氯化钢水溶液，20mL饱和硫酸氨钟水溶液，20mL饱和氯化钢水溶液，20mL饱和碳酸氨 钢水溶液，饱和氯化钢水溶液洗涂3次，己酸己醋层用无水硫酸钢干燥30分钟，过滤， 滤液减压浓缩，得1. 700g化0. 7% )标题化合物。
[0032] 实施例 4 制备肥1 . His-Gly-Glu (0化1) -0化1
[0033] 冰浴下向 1. 7g (2. 4mmo1) Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl) -OBzl 加入 10血浓度为 4M 的氯化氨的己酸己醋溶液，反应2小时后，化"CHzClz/MeOH = 20/1)显示原料点消失。减 压浓缩。残留物用无水己酸己醋溶解，减压浓缩。该操作重复3次。残留物用无水己離溶 解，减压浓缩。该操作也重复3次，得1. 2g巧2. 3% )标题化合物。
[0034] 实施例 5 制备 Fmoc-Lys (Boc) -His-Gly