专利名称：促进植物生长型的微生物菌剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种促进植物生长型的微生物菌剂及其制备方法，属于微生物菌种的功能应用的筛选和组合技术。
背景技术：
早在19世纪末，以单一根瘤菌制备的商业接种剂就已经出现，同时它在一定程度上带来了作物的增产丰收，在全世界范围内得到了广泛应用。随着微生物技术的发展，更多的功能菌被人们发现利用，而且各种菌之间的互生、协同作用得到了深入研究，单一的功能菌逐步向多功能菌方向发展。纵观我国的促进植物生长型的微生物菌剂，绝大多数只是几种功能菌株简单地拼凑在一起，很少对菌与菌之间可能存在的相互影响加以研究，这往往会出现菌种很多但效果不佳的状况。同时现有技术注重矿物元素的转化吸收，大量使用固氮、解磷、解钾细菌，而忽略了防止病虫害的要求。然而，及时有效防止了根部病原体，也可促进根系生长，抵御不良外界环境，达到植物茁壮生长目的。例如现行有关这方面的一个专利，它的菌群由褐色球形固氮菌(Azotobacer chroococcum)、康宁木霉(Trichoderma koningii)、解磷巨大芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)和钾细菌(Bacillus mucilaginosus)组成，它就是简单地把几种功能菌经单独培养后混配，但在这几种菌可能存在的相互影响方面缺乏了解和研究，同时也忽略了抗病虫害的要求。我们在研究各种功能菌之间的相互作用的基础上设计并制备了一种含有固氮菌，磷细菌和链霉菌的高效促进植物生长型的微生物菌剂，确保它们在使用后能抵御不良外界环境，在植物根部形成优势菌群，以满足固氮，解磷和抗病原体的多方面要求。
发明内容
本发明的目的在于提供一种促进植物生长型的微生物菌剂及其制备方法，该菌剂具有固氮、解磷、解钾和防治病虫害功能，所述的制备方法过程简单、成本低。
本发明是通过下述技术方案加以实现。经过分离和培养得到的每克含有4.3×108-5.5×108个数的棕色固氮菌(Azotobacter vinelandii)、3.0×108-4.3×108个数的固氮螺菌(Azospirillum)、9.5×108-1.1×109个数的巨大芽孢杆菌(Baciilus megaterium)和5.5×108-6.8×108个数链霉菌(Streptomyces jingyangensis)，按棕色固氮菌、固氮螺菌、巨大芽孢杆菌和链霉菌中的每克含菌数目以17-22∶12-17∶38-43∶22-27的比混合组成。
上述菌剂的制备方法包括菌剂的培养和混合。其具体步骤如下1、棕色固氮菌1)、斜面培养培养基主料配方蔗糖1％，磷酸氢二钾0.05％，碳酸钙(CaCO3)0.1％，无水硫酸镁0.02％，氯化钠0.02％，琼脂2％，pH7～7.2。将培养基装入试管；无菌；接种；在28℃下培养24h保存备用。
2)、二级三角瓶液体培养在一级培养基主料中去掉琼脂，作为二级培养主料，pH7～7.2。将培养基装入三角瓶，灭菌冷却后，把斜面菌液接种至液体培养基；在28℃下振荡培养24h，终止培养，备用。
3)、三级固体培养培养基配方为麸皮30％，玉米粉10％，豆粕粉10％，其余为水。将培养基灭菌，接种液体二级菌种，在28℃条件下培养2天，然后计数。
2、固氮螺菌1)、斜面培养培养基主料配方蛋白胨0.5％，牛肉膏0.3％，氯化钠0.5％，琼脂1.5％，pH7～7.2。将培养基装入试管；无菌；接种；在28℃下培养24h保存备用。
2)、二级三角瓶液体培养在一级培养基主料中去掉琼脂，作为二级培养主料，pH7～7.2。将培养基装入三角瓶，灭菌冷却后，把斜面菌液接种至液体培养基；在28℃下振荡培养24h，终止培养，备用。
3)、三级固体培养培养基配方为麸皮30％，玉米粉10％，豆粕粉10％，其余为水。将培养基灭菌，接种液体二级菌种，在28℃条件下培养2天，然后计数。
3、巨大芽孢杆菌1)、斜面培养培养基配方为土豆提取液50％，蔗糖2％，琼脂2％，PH自然。将培养基装入试管；无菌；接种；在28℃下培养24h保存备用。
2)、二级三角瓶培养在一级培养基主料中去掉琼脂，作为二级培养主料，pH自然。将培养基装入三角瓶，灭菌冷却后，把斜面菌液接种至液体培养基，在28℃下振荡培养24h，终止培养，备用。
3)、三级固体培养培养基配方为麸皮30％，玉米粉10％，豆粕粉10％，其余为水。将培养基灭菌，接种液体二级菌种，在28℃条件下培养2天，然后计数。
4、链霉菌1)、斜面培养培养基主料配方为硝酸钾0.1％，可溶性淀粉2％，氯化钠0.5％，硫酸镁0.05％，磷酸氢二钾0.05％，硫酸亚铁0.001％，琼脂2％，pH7.2～7.4。将培养基装入试管；无菌；接种；在28℃下培养24h保存备用。
2)、二级三角瓶培养在一级培养基主料中去掉琼脂，作为二级培养主料，pH7～7.2。将培养基装入三角瓶，灭菌冷却后，把斜面菌液接种至液体培养基，在28℃下振荡培养24h，终止培养，备用。
3)、三级固体培养培养基配方为麸皮30％，玉米粉10％，豆粕粉10％，其余为水。将培养基灭菌，接种液体二级菌种，在28℃条件下培养2天，然后计数。
将以上培养的四种菌剂按每克含菌数目以17-22∶12-17∶38-43∶22-27的比例在室温下搅拌混合。
本发明的优点在于本品由固氮菌、磷细菌和泾阳链霉菌按优化的比例组成，组成中的泾阳链霉菌和褐色固氮菌之间以及固氮螺菌和巨大芽孢杆菌之间能发生协同作用，增强菌剂的使用效果。其制备方法过程简单、成本低。在使用过程中本菌剂能促进植物对土壤中矿物元素的吸收利用，可与部分无机肥混合制备无机生物复合肥，提高作物产量，同时还可改善作物的品质。与其他菌剂相比，本菌剂中的链霉菌在植物根部大量繁殖可抑止根部病原体，减少作物病虫害，同时还可促进植物生长。
具体实施例方式
实施例1首先单独培养这四种微生物，并对单位质量内菌的数目进行检测，培养使棕色固氮菌的每克数目达到5.0×108，固氮螺菌的每克数目达到3.75×108，巨大芽孢杆菌的每克数目达到1.0×109，链霉菌的每克数目达到6.25×108，然后将已培养好的各菌菌剂等质量混合，使得每克混合菌剂中的各菌数目比例达到20∶15∶40∶25。混合的次序为先是棕色固氮菌和泾阳链霉菌的发酵物按比例混合，接着将固氮螺菌和巨大芽孢杆菌发酵物混合，最后将两类混合物复配在一起，就得到了促进植物生长型的微生物菌剂。
实施例2将本发明所得到的多功能微生物菌剂按5％，(重量百分数)掺加到由氮、磷、钾(有效含氮量为5％，有效含磷量为7％，有效含钾量为8％)和鸡粪组成的复混肥中制备的无机生物复合肥。所得无机生物复合肥应用于黄瓜种植，并与同等量鸡粪与氮、磷、钾组成的混肥相比较。结果表明在应用无机生物复合肥对黄瓜追肥时，黄瓜在前期生长阶段，黄瓜苗的长势不如复混肥，而在中期阶段，黄瓜苗比后者较好，特别是在果实成长阶段，应用无机生物复合肥，黄瓜结果较早，得到的黄瓜个大，均匀，不出现一头大，一头小的果实。而应用复混肥时，则生长的黄瓜结果实晚，果实大小也不均匀。
实施例3将实施例2所得到的两种肥料按同样重量应用于苹果树的追肥中，结果表明应用无机生物复合肥所得到苹果无病虫害，表面光滑而且口感好。而应用复混肥所得到的苹果口感不如前者，病虫害明显增多，外观也不好看。同时，前者比后者增产高达20％。
权利要求
1.一种促进植物生长型的微生物菌剂，其特征在于是将经过分离和培养得到的每克含有4.3×108-5.5×108个数的棕色固氮菌、3.0×108-4.3×108个数的固氮螺菌、9.5×108-1.1×109个数的巨大芽孢杆菌和5.5×108-6.8×108个数链霉菌，按棕色固氮菌、固氮螺菌、巨大芽孢杆菌和链霉菌中的每克含菌数目以17-22∶12-17∶38-43∶22-27的比例混合组成。
2.按权利要求1所述的促进植物生长型的微生物菌剂的制备方法，该方法包括菌种的培养和混合，其特征在于步骤如下1)、棕色固氮菌的培养斜面培养培养基主料配方蔗糖1％，磷酸氢二钾0.05％，碳酸钙(CaCO3)0.1％，无水硫酸镁0.02％，氯化钠0.02％，琼脂2％，pH7～7.2，将培养基装入试管；无菌；接种；在28℃下培养24h保存备用；二级三角瓶液体培养在一级培养基主料中去掉琼脂，作为二级培养主料，pH7～7.2，将培养基装入三角瓶，灭菌冷却后，把斜面菌液接种至液体培养基；在28℃下振荡培养24h，终止培养，备用；三级固体培养培养基配方为麸皮30％，玉米粉10％，豆粕粉10％，其余为水，将培养基灭菌，接种液体二级菌种，在28℃条件下培养2天，然后计数；2)、固氮螺菌的培养斜面培养培养基主料配方蛋白胨0.5％，牛肉膏0.3％，氯化钠0.5％，琼脂1.5％，pH7～7.2，将培养基装入试管；无菌；接种；在28℃下培养24h保存备用；二级三角瓶液体培养在一级培养基主料中去掉琼脂，作为二级培养主料，pH7～7.2。将培养基装入三角瓶，灭菌冷却后，把斜面菌液接种至液体培养基；在28℃下振荡培养24h，终止培养，备用；三级固体培养培养基配方为麸皮30％，玉米粉10％，豆粕粉10％，其余为水，将培养基灭菌，接种液体二级菌种，在28℃条件下培养2天，然后计数；3)、巨大芽孢杆菌的培养斜面培养培养基配方为土豆提取液50％，蔗糖2％，琼脂2％，pH自然，将培养基装入试管；无菌；接种；在28℃下培养24h保存备用；二级三角瓶培养在一级培养基主料中去掉琼脂，作为二级培养主料，pH自然，将培养基装入三角瓶，灭菌冷却后，把斜面菌液接种至液体培养基，在28℃下振荡培养24h，终止培养，备用；三级固体培养培养基配方为麸皮30％，玉米粉10％，豆粕粉10％，其余为水，将培养基灭菌，接种液体二级菌种，在28℃条件下培养2天，然后计数；4)、链霉菌的培养斜面培养培养基主料配方为硝酸钾0.1％，可溶性淀粉2％，氯化钠0.5％，硫酸镁0.05％，磷酸氢二钾0.05％，硫酸亚铁0.001％，琼脂2％，pH7.2～7.4，将培养基装入试管；无菌；接种；在28℃下培养24h保存备用；二级三角瓶培养在一级培养基主料中去掉琼脂，作为二级培养主料，pH7～7.2，将培养基装入三角瓶，灭菌冷却后，把斜面菌液接种至液体培养基，在28℃下振荡培养24h，终止培养，备用；三级固体培养培养基配方为麸皮30％，玉米粉10％，豆粕粉10％，其余为水，将培养基灭菌，接种液体二级菌种，在28℃条件下培养2天，然后计数；5)、将按1)、2)、3)、4)步骤培养的四种菌剂按每克含菌数目以17-22∶12-17∶38-43∶22-27的比例在室温下搅拌混合。
全文摘要
本发明公开了一种促进植物生长型的微生物菌剂制备方法，属于微生物菌种的功能应用的筛选和组合技术。所述的微生物菌剂由棕色固氮菌、固氮螺菌、巨大芽孢杆菌和泾阳链霉菌按比例组成。所述的制备方法包括菌种的培养和混合，主要的步骤是按三级培养法培养每种菌种，然后在室温下将培养的菌种按比例进行混合。本发明的优点在于，本发明菌剂能促进植物对土壤中矿物元素的吸收利用，抑止根部病原体，可与部分无机肥混合制备无机生物复合肥，提高作物产量，同时还可改善作物的品质。其制备方法过程简单、成本低。
文档编号A01N63/02GK1442063SQ03109679
公开日2003年9月17日 申请日期2003年4月11日 优先权日2003年4月11日
发明者张毅民, 万先凯 申请人:天津大学