专利名称：一种促进水产饵料微藻繁殖的制剂的制作方法
技术领域：
本发明属于微藻领域，涉及一种促进水产饵料微藻繁殖的制剂。
背景技术：
水产饵料微藻指的是养殖鱼、虾、蟹等动物水体中含有的蓝藻门(Cyanophyta)、绿藻门(Chlorophyta)、金藻门(Choysophyta)和红藻门(Phodophyta)中的无毒微藻。饵料微藻在养殖水体中的密度，对于水产养殖业具有重要意义。作为养殖对象的饵料，微藻营养丰富，并能促进养殖动物的健康。微藻还释放氧气，避免水体缺氧而影响养殖动物生长繁殖。微藻也是养殖水体中的一些浮游动物的饵料，这些动物又是养殖对象的饵料。微藻还有分解代谢水体中有害物和氨氮、亚硝酸盐、硫化氢等的作用。
为了促进水产饵料微藻的繁殖，常用以下方法(1)往水中撒(洒)动物粪便或人粪尿。即使经过处理的粪便，也不免将病原菌带入水中。(2)撒饼粕作为微藻营养物。饼粕易被养殖动物吃掉。由于可溶性物质少，微藻很难直接利用，没有被利用的饼粕腐败产生硫化氢等有害物。(3)撒(洒)入化学肥料，如尿素、硫酸铵、氯化钾等。化肥特别是氮肥虽能被微藻利用，但残存的氮素会造成水中的氨氮和亚硝酸盐等有害物超标。(4)撒(洒)入光合细菌、EM复合菌剂等微生物制剂。大量的实验证明，这些微生物可增加水中益生菌含量，分解部分有害的化学物质如硫化氢、氨氮、亚硝酸盐等，但对微藻繁殖的促进作用不明显。(5)洒入经稀释的植物激素如2，4-D、赤霉素、芸苔素内酯、三十烷醇等。这些物质虽有一定促进微藻繁殖的作用，但价格昂贵。
发明内容
本发明之目的在于提供一种促进水产饵料微藻繁殖的制剂，以达到促进养殖水或专门培养水产饵料微藻的水中的饵料微藻繁殖之目的。
本发明是采用下列技术方案完成的(1)纳豆芽孢杆菌(Bacilluns natto)菌粉的制作。
①斜面试管(一级菌种)培养采用BPY细菌培养基。0.14MPa下灭菌30～45min，摆成斜面后在无菌条件下接入原种，在37℃恒温箱中培养24～36h，待菌落长满后，在0～4℃环境下保存备用。
②液体培养(二级菌种)采用不加琼脂的BPY细菌培养基，pH7.0。以500ml三角瓶培养。0.1MPa下灭菌45min，冷至40℃后接入斜面菌种，37℃恒温摇床培养16～24h，待细胞数达6.0亿/ml以上时终止培养，在室温下保存备用。
③液体培养(三级菌种)培养基及灭菌同二级菌种，培养容器为好氧种子罐，接入二级菌种量为10％。待细胞数达5.0亿/ml后，终止培养。保存备用。
④固体培养取脱脂大豆粉25％～35％，小麦麸65％～75％，玉米粉7％～12％，蔗糖0.5％～1.5％，硫酸铵0.2％～0.4％，蛋白胨0.1％～0.3％，酵母膏0.1％～0.2％，总重量100％。加固形物总重的50％～60％的自来水，溶解蔗糖、硫酸铵、蛋白胨、酵母膏，然后将其与剩余水一起搅拌入固体粉中，在0.14MPa下灭菌120min，冷却至40℃，在无菌条件下接入20％～30％的三级菌种。在固体好氧发酵罐中，于37℃下好氧培养36～48h，至细胞数达20.0亿/g时终止培养。
⑤干燥与粉碎发酵成功的固体培养物，在60～70℃下以真空干燥机干燥至含水量≤9.0％。粉碎并过80目筛。质量检测细胞数达20.0亿/g以上时，室温下保存备用。这样的菌粉在室温下24个月内，活细胞数能保证≥10.0亿/g。
(2)枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌粉的制作。
整套制作工艺及设备同纳豆芽孢杆菌。不同的是①斜面试管(一级菌种)采用营养肉汁琼脂，组成如下(％)蛋白胨0.5，牛肉膏0.3，NaC10.5，琼脂1.5，pH7.0。②二、三级菌种(液体)采用不加琼脂的斜面试管(一级菌种)培养基。③固体培养基组成(％)脱脂大豆粉20～30，小麦麸70～85，蔗糖1.0～1.5，硫酸铵0.2～0.3，蛋白胨0.1～0.2，酵母膏0.1～0.2，NaHCO30.05～0.1。总重量100％。④干燥并粉碎后的菌粉，活细胞数要求≥36.0亿/g以上。这样的菌粉在室温下24个月内，活细胞数能保证12.0亿/g以上。
(3)本发明制剂的制作①组成纳豆芽孢杆菌菌粉76％～86％，枯草芽孢杆菌菌粉18％～26％，维生素B6(含量98％)0.0000001～0.0000003％，维生素B12(含量1％)0.0000001％～0.0000004％，维生素B2(含量98％)0.0000002％～0.0000005％。
优选为纳豆芽孢杆菌菌粉76％，枯草芽孢杆菌菌粉23.9999995％，维生素B60.0000001％，维生素B120.0000002％，维生素B20.0000002％。
②原料要求纳豆芽孢杆菌菌粉粒度60目，含水量≤9.0％，自出厂之曰起24个月内活细胞数≥10.0亿/g以上。
枯草芽孢杆菌菌粉粒度60目，含水量≤9.0％，自出厂之日起24个月内活细胞数≥12.0亿/g以上。
维生素B6食品添加剂。含量98％。应符合GB14573-1993之规定。过60目筛。
维生素B12含量1％。饲料添加剂。应符合GB9841-1988之规定。过60目筛。
维生素B2食品添加剂。含量98％。应符合GB14752-1993之规定。过60目筛。
③制作按组成百分比称取并过60目筛的各原料纳豆芽孢杆菌菌粉、枯草芽孢杆菌菌粉、维生素B6、维生素B12和维生素B2，合并，在不锈钢药物混和机中混匀，装入无毒塑料袋或瓶中。
(4)本发明制剂的使用方法①加入对象需要提高繁殖速度的含有水产饵料微藻的水产养殖水或专门培养水产饵料微藻的水。
②加入量每立方米水体用本制剂8～15mg。
③加入方法按水的体积计算，准确称取所需的本发明制剂，经500～1000倍的水稀释并存放2h后，尽可能均匀地泼洒入水中。
含水产饵料微藻的水中加入本发明制剂后，水产饵料微藻的繁殖速度加快。
具体实施例方式
以下通过试验例来进一步阐述本发明所述制剂的有效效果。这些试验包括了本发明制剂和其他制剂促进水产饵料微藻繁殖的效果试验。
试验例1本发明制剂促进水产饵料微藻繁殖的效果试验(1)试验材料制剂A纳豆芽孢杆菌菌粉76％，枯草芽孢杆菌菌粉23.9999995％，维生素B60.0000001％，维生素B120.0000002％，维生素B20.0000002％。
制剂B纳豆芽孢杆菌菌粉76％，枯草芽孢杆菌菌粉24％。
对照组纳豆芽孢杆菌菌粉固体培养原料76％，枯草芽孢杆菌菌粉固体培养原料24％，均过60目筛。
(2)试验方法①各制剂分别用1000倍的自来水稀释并在26～28℃(水温)下存放2h。
②各制剂加入量10mg/m3水。
③试验水及微藻各组均为1立方米养虾池水。将水加热至100℃，10min，杀死全部藻类。冷却后接种菱形藻(Nitzschia)，小球藻(Chlorella)、杜氏藻(Dunaliella)各50个/ml水。
④培养在21～25℃水温和5月睛天阳光下培养，培养池(水泥池)长×宽×高＝1m×1m×1m，每组设2个重复，72h后对微藻进行计数。
试验结果见表1。
表1加入各制剂培养72h后的水中微藻数目(X±SD，n＝2)
表1示明①本发明制剂(制剂A)对促进3种微藻繁殖有显著促进作用(制剂A与制剂B和对照组比较，p＜0.01，t检验)。②制剂B也有一定效果(制剂B与对照组比较，p＜0.01，t检验)。
试验例2本发明制剂洒入东方对虾养殖池中对促进水产饵料微藻繁殖的效果试验(1)试验材料本发明制剂(即试验例1中之制剂A)。对照组用试验例中之对照组料。
(2)试验虾池海水池，每个池1000m2，水深1.2m，养有东方对虾，每组均设2个重复。
(3)试验时间2004年8月7日～14日，共7d。其中1d为阴天，其他6d为晴天。平均水温26.7℃。
(4)试验方法制剂A和对照组料的稀释方法及用量同试验例1。统计水中微藻总数，不分类。
试验结果见表2表2加入各制剂7d后对虾池水中微藻数目(X±SD，n＝2)
从表2可见本发明制剂(制剂A)对促进虾养殖池水中微藻的繁殖有明显的促进作用(制剂A与对照组比较，p＜0.01，t检验)。
上述2个试验例表明，使用本发明制剂能显著促进水产饵料微藻的繁殖。
权利要求
1.一种促进水产饵料微藻繁殖的制剂，其特征是，它由下述原料组成纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)菌粉70％～80％，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)18％～26％，维生素B6(含量98％)0.0000001％～0.0000003％，维生素B12(含量1％)0.0000001％～0.0000004％，维生素B2(含量98％)0.0000002％～0.0000005％。
2.根据权利要求1所述的一种促进水产饵料微藻繁殖的制剂，其特征是，水产饵料微藻包括蓝藻门(Cyanophyta)，绿藻门(Chlorophyta)，金藻门(Choysophyta)和红藻门(Rhodophyta)中的无毒微藻。它们可作为水产养殖动物和养殖水中的浮游小动物的饵料。
3.根据权利要求1所述的一种促进水产饵料微藻繁殖的制剂，其特征是，其中原料的用量为纳豆芽孢杆菌菌粉76％，枯草芽孢杆菌菌粉23.9999995％，维生素B60.0000001％，维生素B120.0000002％，维生素B20.0000002％。
4.根据权利要求1或3所述的一种促进水产饵料微藻繁殖的制剂，其特征是，纳豆芽孢杆菌菌粉含纳豆芽孢杆菌活菌10.0亿个/g以上，枯草芽孢杆菌菌粉含枯草芽孢杆菌活菌12.0亿个/g以上。
5.根据权利要求1或3或4所述的一种促进水产饵料微藻繁殖的制剂，其特征是，制备方法称取经粉碎并过60目筛的各原料纳豆芽孢杆菌菌粉、枯草芽孢杆菌菌粉、维生素B6、维生素B12和维生素B2，合并，混匀，就制备成了本发明制剂。
6.根据权利要求1-5所述的一种促进水产饵料微藻繁殖的制剂，其特征是，制剂经500～1000倍水稀释后泼洒入含饵料微藻的水产养殖水中或专门培养水产饵料微藻的水中，每立方米水体用制剂8～15mg。
全文摘要
一种促进水产饵料微藻繁殖的制剂，属微藻领域，涉及一种促进水产饵料微藻繁殖的制剂，它由纳豆芽孢杆菌菌粉、枯草芽孢杆菌菌粉、维生素B
文档编号A01K61/00GK1765177SQ20041008623
公开日2006年5月3日 申请日期2004年10月28日 优先权日2004年10月28日
发明者王厚德, 张志栋, 王防修 申请人:张志栋