专利名称：：一种食用菌合生元微胶囊的制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种食用菌合生元微胶囊的制备方法,属生物工程领域。(二)
背景技术：
微胶囊技术早已广泛应用于医药、化工、食品等领域，随着益生菌微胶囊化技术的不断发展与完善，益生菌微胶囊的耐酸性、耐胆盐性、耐储性和肠溶性均有所增强；虽然益生菌受到充分保护，但新的问题接踵而至益生菌到达肠道后，由于营养缺乏、胆汁盐侵蚀等因素而使其增5直受到抑制，导致虽有一定量的益生菌进入人体，但不能在肠道中增殖、不会产生新的细菌素、定植在肠黏膜上的几率也降低，益生菌还没在人体肠道中充分发挥其益生作用便被排除体外，造成益生菌的浪费。本发明以食用菌粉作为益生素成分被添加到微胶囊中，亚麻籽胶作为壁材应用到益生菌包埋技术当中，使食用菌中的多糖成分充分作用于益生菌，使益生菌快速在肠道中定植下来，同时食用菌被粉碎至200目，增大反应表面积，以求达到增加合生元微生态制剂的营养性、功能性及益生菌与益生素的协同作用等目的。(三)
发明内容本发明目的在于提供一种食用菌合生元微胶囊的制备方法。本发明的目的是这样实现的本发明中所涉及的百分比除另有注明之外为质量比，本发明的产品采用这样的方法来制备的1.益生菌的选择及培养基的制备A菌——嗜酸乳杆菌CICC6074aa"ofe^77〃sscjWop力i"s)，培养基为蛋白胨10克，牛肉膏10克，酵母浸膏5克，葡萄糖20克，磷酸氢二钾2克，醋酸钠5克，柠檬酸铵2克，硫酸镁O.2克，硫酸锰O.2克，吐温80l毫升，水1000毫升，pH6.2-6.6。B菌——植物乳杆菌CICC6002(Zsc&力a"7^^;^朋tarw迈)5°麦芽汁中加入酵母膏0.5，无菌碳酸钙0.6。C菌——干酪乳杆菌CICC20284asctoZaciW〃s蛋白胨10克，牛肉膏10克，酵母浸膏5克，葡萄糖20克，磷酸氢二钾2克，醋酸钠5克，柠檬酸铵2克，硫酸镁0.2克，硫酸锰0.2克，吐温801毫升，水1000毫升，琼脂1.52.0%，p服.2-6.6。D菌——鼠李糖乳杆菌CICC6001aactoZaci刃us5°B6麦芽汁中加入酵母膏0.5，无菌碳酸钙0.6。2.益生菌的制备过程2.1冻干菌粉末的活化分别量取0.9%的生理盐水10ml于5只试管内，经121。C灭菌20分钟冷却至30°C，将5株乳酸菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0.9%的生理盐水中，震荡使其溶解，在3(TC恒温箱中静止活化30分钟，备用。2.2益生菌扩大培养2.2.1母发酵剂的制备分别量取4株益生菌培养基各200ml于5只500ml三角瓶内，12rC灭菌20分钟冷却至3CTC，按培养基体积的10%接种2.1步骤中己经活化的菌种，在3(TC厌氧箱内静止培养24小时，作为母发酵剂。2.2.2益生菌扩培首先配置10%的脱脂奶乳浊液，12rC灭菌20分钟冷却至3(TC，分别按2%体积比例接种母发酵剂，3(TC厌氧培养30——36小时，检测4株乳酸菌发酵液活菌数，各发酵液活菌数》1(f个/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数<109个/1111，继续培养，直至达到109个/1111，然后在无菌状态下5000转/分钟离心20分钟，弃掉上清液，留菌泥包埋待用。2.3食用菌合生元微胶囊的制备分别取每种待包埋益生菌菌泥10克，然后称取细度为200目的食用菌姬松茸粉末4克，与含有2.5%海藻酸钠与0.5%亚麻籽胶的混合胶体40g混合，200r/min进行第一次搅拌20min，将混合物缓慢倾倒入盛有1.5倍体积食用油的三角瓶中，400r/min进行第二次搅拌20min，加入1.5n/。CaCl2溶液钙化3h，用灭菌生理盐水洗涤凝胶球三次，将胶球置于0.6%，pH=5.5的壳聚糖溶液中进行成膜反应，15min后取出，用灭菌生理盐水冲洗后置于55mM的拧檬酸溶液中液化30min，灭菌生理盐水冲洗后得湿的微胶囊，150r/min离心10min收集微胶囊，预冷，最后冷冻干燥获得微胶囊。2.4食用菌合生元微胶囊的复配按各食用菌合生元微胶囊重量，取A菌微胶囊l-3份，B菌微胶囊3-5份，C菌微胶囊3-5份，D菌微胶囊l-3份，充分混匀后真空包装。3.应用效果下面通过具体实验来证明本发明专利的应用效果_表1益生菌对肠道致病菌的抑制效果_<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>经测定合生元微胶囊经消化处理后活菌浓度10"cfu/ml，由表1可以看出，消化前各个益生菌对三种肠道致病菌抑制效果比消化后的要好，但包埋不同益生菌的微胶囊经人工肠液消化后对三种肠道致病菌均有一定的抑制效果，并且干酪乳杆菌和植物乳杆菌的抑菌圈较大。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明作更详细的描述实施例一本发明采用的4株益生菌均采购于中国工业微生物菌种保藏中心，分别为嗜酸乳杆菌CICC6074，植物乳杆菌CICC6002，干酪乳杆菌CTCC20284，鼠李糖乳杆菌CTCC6001，本发明中将上述菌株简称为A菌、B菌、C菌、D菌。1.益生菌的选择及培养基的制备A菌——嗜酸乳杆菌CICC6074asctoZ;sciW"ssci^^力i7〃s)，培养基为蛋白胨10克，牛肉膏10克，酵母浸膏5克，葡萄糖20克，憐酸氢一钾2克，醋酸钠5克，柠檬酸铵2克，硫酸镁O.2克，硫酸锰0.2克，吐温80l毫升，水1000毫升，p服.2-6.6。B菌——植物乳杆菌CICC6002aacfo&3ciW"sA/s加sru历)5°B6麦芽汁中加入酵母膏0.5，无菌碳酸钙O.6。C菌——T酪乳杆菌CICC20284(Zacto/児cj7/u,case/)蛋白胨10克，牛肉膏10克，酵母浸膏5克，葡萄糖20克，磷酸氢二钾2克，醋酸钠5克，拧檬酸铵2克，硫酸镁0.2克，硫酸锰O.2克，吐温80l毫升，水1000毫升，琼脂1.52.0%，pH6.2-6.6。D菌——鼠李糖乳杆菌CICC6001(L3cto力aciWwr/s/zmo犯s)5°B6麦芽汁中加入酵母膏0.5，无菌碳酸钙0.6。2.益生菌的制备过程2.1冻干菌粉末的活化分别量取0.9%的生理盐水10ml丁-5只试管内，经12rC灭菌20分钟冷却至30°C，将5株乳酸菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0.9%的生理盐水中，震荡使其溶解，在3(TC恒温箱中静止活化30分钟，备用。2.2益生菌扩大培养2.2.1母发酵剂的制备分别量取4株益生菌培养基各200ml于5只500ml三角瓶内，121'C灭菌20分钟冷却至3(TC，按培养基体积的10%接种2.1歩骤屮已经活化的菌种，在30'C厌氧箱内静止培养24小时，作为母发酵剂。2.2.2益生菌扩培首先配置10%的脱脂奶乳浊液，121'C灭菌20分钟冷却至30°C，分别按2%体积比例接种母发酵剂，30'C厌氧培养30——36小时，检测5株乳酸菌生产发酵剂活菌数，各生产发酵剂活菌数》10;'个一1，视同为发酵成熟，如果活菌数〈109个/ml，继续培养，直至达到1(f个/ml，然后在无菌状态下5000转/分钟离心20分钟，弃掉上清液，留菌泥包埋待用。2.3食用菌合生元微胶囊的制备分别取每种待包埋益生菌菌泥取10克，然后称取细度为200目的食用菌姬松茸粉末4克，与含有2.5%海藻酸钠与0.5%亚麻籽胶的混合胶体40g混合，200r/min进行第一次搅拌20min，将混合物缓慢倾倒入盛有1.5倍体积食用油的三角瓶中，400r/min进行第二次搅拌20min，加入1.5y。CaCl,溶液钙化3h，用灭菌生理盐水洗涤凝胶球三次，将胶球置于0.6%，pH=5.5的壳聚糖溶液中进行成膜反应，15min后取出，用火菌生理盐水冲洗后置于55mM的柠檬酸溶液中液化30min，灭菌生理盐水冲洗后得湿的微胶囊，i50r/min离心iOmin收集微胶囊，预冷，最后冷冻干燥获得微胶囊。2.4食用菌合生元微胶囊的复配按各食用菌合生元微胶囊重量，取A菌微胶囊1份，B菌微胶囊3份，C菌微胶囊3份，D菌微胶囊1份，充分混匀后真空包装。实施例二1.益生菌的选择及培养基的制备A菌——嗜酸乳杆菌CICC6074Ua"o6sci"wsa"Wop/7'^A)，培养基为蛋白胨10克，牛肉膏10克，酵母浸膏5克，葡萄糖20克，磷酸氢二钾2克，醋酸钠5克，柠檬酸铵2克，硫酸镁O.2克，硫酸锰O.2克，吐温80l毫升，水1000毫升，pH6.2-6.6。R菌——植物乳杆菌CICC6002(丄actote"'""s/^朋&7^7)5°麦芽汁中加入酵母膏0.5，无菌碳酸钙0.6。C菌——干酪乳杆菌CICC20284a3"o6s"7"scasei)蛋白胨10克，牛肉膏10克，酵母浸膏5克，葡萄糖20克，磷酸氢二钾2克，醋酸钠5克，柠檬酸铵2克，硫酸镁0.2克，硫酸锰O.2克，吐温80l毫升，水1000毫升，琼脂1.52.0%，p服.2-6.6。D菌——鼠李糖乳杆菌CICC6001(丄a"otecj7J"sr力a/ff/7osus)5°B6麦芽汁中加入酵母膏0.5，无菌碳酸钙0.6。2.益生菌的制备过程2.1冻干菌粉末的活化分别量取0.9%的生理盐水10ml于5只试管内，经121'C灭菌20分钟冷却至30°C,将5株乳酸菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0.9%的生理盐水中，震荡使其溶解，在3(TC恒温箱中静止活化30分钟，备用。2.2益生菌扩大培养2.2.1母发酵剂的制备分别量取4株益生菌培养基各200ml于5只500ml三角瓶内，12rC灭菌20分钟冷却至30°C,按培养基体积的10%接种2.1歩骤中已经活化的菌种，在30。C厌氧箱内静止培养24小时，作为母发酵剂。2.2.2益生菌扩培首先配置10%的脱脂奶乳浊液，121。C灭菌20分钟冷却至3CTC，分别按2%体积比例接种母发酵剂，3(TC厌氧培养30——36小时，检测5株乳酸菌生产发酵剂活菌数，各生产发酵剂活菌数》l(f个/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数<109个/1111，继续培养，直至达到1()9个/ml，然后在无菌状态下5000转/分钟离心20分钟，弃掉上清液，留菌泥包埋待用。2.3食用菌合生元微胶囊的制备分别取每种待包埋益生菌菌泥取10克，然后称取细度为200目的食用菌姬松茸粉术4克，与含有2.5%海藻酸钠与0.5%亚麻籽胶的混合胶体40g混合，200r/min进行第一次搅拌20min，将混合物缓慢倾倒入盛有1.5倍体积食用油的三角瓶中，400r/min进行第二次搅拌20min，加入1.5。/。CaCl2溶液钙化3h，用灭菌生理盐水洗涤凝胶球三次，将胶球置于0.6%，pH=5.5的壳聚糖溶液中进行成膜反应，15min后取出,-用灭菌生理盐水冲洗后置于55mM的柠檬酸溶液中液化30min，灭菌生理盐水冲洗后得湿的微胶囊，150r/min离心10min收集微胶囊，预冷，最后冷冻干燥获得微胶囊。2.4食用菌合生元微胶囊的复配按各食用菌合生元微胶囊重量，取A菌微胶囊3份，B菌微胶囊5份，C菌微胶囊5份，D菌微胶囊3份，充分混匀后真空包装。权利要求1、一种食用菌合生元微胶囊的制备方法，其特征是制备嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌4株益生菌发酵液，然后在5000转/分钟后弃掉上清液，分别取每种益生菌菌泥10克，添加细度为200目的食用菌姬松茸粉末4克，与含有2.5％海藻酸钠与0.5％亚麻籽胶的混合胶体40g混合，200r/min进行第一次搅拌20min，将混合物倒入盛有1.5倍体积食用油的三角瓶中，400r/min进行第二次搅拌20min，加入1.5％CaCl2溶液钙化3h，用灭菌生理盐水洗涤凝胶球三次，将胶球置于0.6％，pH＝5.5的壳聚糖溶液中成膜反应15min后取出，用灭菌生理盐水冲洗后置于55mM的柠檬酸溶液中液化30min，灭菌生理盐水冲洗后得湿的微胶囊，150r/min离心10min收集微胶囊，预冷，最后冷冻干燥获得微胶囊。全文摘要本发明提供了一种食用菌合生元微胶囊的制备方法。首先制备嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌4株益生菌发酵液，然后在5000转/分钟后弃掉上清液，留菌泥包埋待用。分别取每种待包埋益生菌菌泥10克，细度为200目的食用菌姬松茸粉末4克，与含有2.5％海藻酸钠与0.5％亚麻籽胶的混合胶体40g混合，200r/min进行第一次搅拌20min，将混合物倒入盛有1.5倍体积食用油的三角瓶中，400r/min进行第二次搅拌20min，加入1.5％CaCl<sub>2</sub>溶液钙化3h，用灭菌生理盐水洗涤凝胶球三次，将胶球置于0.6％，pH＝5.5的壳聚糖溶液中成膜反应15min后取出，用灭菌生理盐水冲洗后置于55mM的柠檬酸溶液中液化30min，灭菌生理盐水冲洗后得湿的微胶囊，150r/min离心10min收集微胶囊，预冷，最后冷冻干燥获得微胶囊。文档编号A23P1/04GK101401638SQ200810137349公开日2009年4月8日申请日期2008年10月17日优先权日2008年10月17日发明者涛程,成陈,韩建春申请人:东北农业大学