专利名称：：微生物溶菌酶在饲料中替代抗生素的应用方法
技术领域：
：本发明涉及畜牧行业，尤其涉及一种微生物溶菌酶在词料中替代抗生素的应用方法。
背景技术：
：20世纪50年代，动物学家发现在饲料中添加低剂量的抗生素可以明显的促进畜禽的生长，随即其在饲料中广泛的使用。据统计在世界上有20多种的抗生素以及十几种的合成抗菌药物在饲料中的使用。词料抗生素在预防动物疾病，促进动物生长，提高饲料报酬都起到了积极的作用。但是，随着时间的发展，细菌的抗药性的增加、畜产品的药物残留等问题已经对人体健康构成了严重的威胁，词用抗生素所导致的负面的效应成为人们灌注的焦点。绿色、无污染、有效的的抗生素的替代产品是未来畜牧业发展的趋势，这对促进我国畜牧业的发展，保障人们身体健康具有深远的意义。
发明内容本发明的目的是提供一种可以避免在饲料中加入抗生素的微生物溶菌酶在饲料中替代抗生素的应用方法。为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下微生物溶菌酶在饲料中替代抗生素的应用方法，在饲料中加入溶菌酶，添加量为60400克/吨饲料。本发明的一个优化方案是，微生物溶菌酶在饲料中替代抗生素的应用方法，在猪词料中加入溶菌酶，添加量为150300克/吨饲料。本发明的又一个优化方案如下所述的微生物溶菌酶在词料中替代抗生素的应用方法，在水产养殖的饲料中添加溶菌酶，添加量为100-400g/吨饲料。本发明的再一个优化方案是，所述的微生物溶菌酶在饲料中替代抗生素的应用方法，在肉禽养殖的词料中添加溶菌酶，添加量为60-120g/吨饲料。进一步，所述的在肉禽养殖的饲料中添加溶菌酶，在肉禽生长的前期饲料中的添加量为80-120g/吨饲料。进一步，所述的在肉禽养殖的饲料中添加溶菌酶，在肉禽生长的后期饲料中的添加量为60-90g/吨饲料。本发明的有益效果如下溶菌酶具有良好的抗菌杀菌效果，有效对抗炎症、感染，对那些抗生素已产生耐药性的菌株也有很强的杀灭作用，保证动物的肠道的健康，防治动物下痢，提高动物生产性能。其疗效好、安全性高，成本低廉，无耐药性、无药物残留、无毒副作用、是绿色环保的活性物质。具体实施例方式溶菌酶是能溶解细菌细胞壁的一种酵，是一类物质的的总称。作为非特异性免疫的重要成员，溶菌酶在防御外源微生物入侵方面发挥重要的作用，其在动物的免疫细胞和巨噬细胞中含量比较高。溶菌酶对革兰氏阳性菌、好气性孢子形成的菌、枯草杆菌、耐辐射微球菌均具有良好的分解作用，对大肠杆菌、普通变球菌和副血性弧菌等革兰氏阴性菌也具有溶解作用。其具有抗生素的杀菌的促生长的作用，是饲料中替代抗生素的使用的首选。本专利所用的溶菌酶的要求为通过药敏试验，在100ppm时应有明显的抑菌圈，即抑菌圈的直径M0mm。药敏试验过程如下做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。做沙门氏菌可选择血清培养基。一、一般LB培养基的配制1、液体培养基的配制蛋白胨lg、NaCllg、酵母提取物0.5g(建议选用国外公司产品)溶于100ml水中。2、固体培养基的配制在液体培养基的基础上每100ml中添加琼脂1.7g或琼脂粉2g。二、灭菌整个实验过程中所用的培养基、平板、枪头、棉签、生理盐水以及缓冲溶液均需要灭菌。三、操作过程1、将指示菌(大肠杆菌、沙门氏菌等等)从培养液(基)中接种于平板活化培养，待菌落长出后在平板上挑选典型菌落接种于试管中的液体培养基中培养4-6小时后比浊。2、用涂菌棒(或者灭菌棉签)将待检细菌混悬液涂抹于平皿培养基表面，要求涂布均匀致密。3、以无菌操作将灭菌的不锈钢小管(也可用玻璃管、瓷管)，放置在培养基上打孔，将孔中的培养基用针头挑出，并以火焰封底，使培养基能充分的与平皿融合(以防药液渗漏，影响结果)。4、将配制好的待测样品液80微升加入样孔中，样品加完后放入30-37'C的培养箱中培养12-18小时后观察结果。注意试验的过程在无菌的条件下操作。四、溶菌酶样品液的配制1、粉状样品的配制取溶菌酶样品用灭菌好的生理盐水逐级稀释到浓度梯度为300卯m，200ppm，100ppm，50ppm然后分别取80微升稀释好的溶液置于样品孔中。(注在温度较低的情况下，可能会出现稍微的不溶的情况，可加热至35-40'C即可溶解)2、注意事项1)配置好的样品液不要放在冷冻的条件下保存，也不能放在无菌操作台上被紫外线照射；2)样品液在配制稀释过程中注意要逐级稀释。根据上述方法检验合格的溶菌酶可以用于本专利。因不同的动物的种类差异，不同动物饲料中需要添加的溶菌酶的量而有所不同，下面分别针对猪、肉禽、水产品进行试验，将溶菌酶制剂添加到不同的动物的饲料中，替代原有饲料中的抗生素的使用，研究溶菌酶制剂在不同的动物不同阶段的饲料中替代抗生素使用的最佳的使用比例，本专利所用的溶菌酶的要求为通过药敏试验，在100ppm时应有明显的抑菌圈，即抑菌圈的直径HOmm。一、针对仔猪的试验(1)试验设计60头28日龄仔猪随机分成六组，每组10头。分别为对照组(不添加溶菌酶)试验1组(每吨添加150g)、试验2组(每吨添加200g)、试验3组(每吨添加300g)，试验4组(每吨添加400g)，每组设一个重复组，试验期4周。(2)观测指标与管理观测各组耗料量、增重、腹泻头次数等，并作记录。同栋分栏饲养，饲喂颗粒饲料，分餐饲喂，每天四次(时间分别为7:00、11:00、15:00、19:00)，按常规仔猪饲养管理，出现腹泻立刻用抗生素治疗。(3)对腹泻的影响从表1可以看出,对照组的平均腹泻率为65%，试验1组的平均腹泻率为15%，比对照组平均腹泻率降低了78%，试验2组腹泻率10%,试验3组和4组的平均腹泻率为0%。从以上结果可以看出，断奶仔猪中不添加任何抗菌素或其它抗腹泻的添加剂，腹泻严重，在断奶仔猪日粮中添加溶菌酶300g/t基本可以控制腹泻，可以替代抗生素，超过300g/t对预防腹泻没有贡献，造成原料的浪费，故将加入量控制在150300克/吨饲料。腹泻率=化沐:7S工躲x100%仔猪总头数x天数表l腹泻情况组别栏号腹泻头次数腹泻率(％)平均腹泻率(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>二、针对水产养殖的试验(1)试验设计选取体重为50g左右的鲫鱼2400尾随机分为4组，即对照组、50mg/kg溶菌酶、100mg/kg溶菌酶组和150mg/kg溶菌酶组，每组3个重复，每个重复200尾。(2)饲养管理试验期间日投料2次，换水1次。(3)试验指标测定生长性能指标主要测试验鱼的增重率和饵料系数。于试验始末称量空腹试验鱼体重。(4)试验期试验期为30天。(5)试验结果表4溶菌酶对鲫鱼生长性能的影响项目对照组溶菌酶50mg/kg溶菌酶100mk/kg溶菌酶150mg/kg<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>饵料系数3.67a3.03b2.71c2.70c注同一行上标字母相同表示差异不显著(P>0.05);字母相邻表示差异显著(P<0.05);字母相间表示差异显著(PO.Ol)。下同。由表4可知,添加溶菌酶组鲫鱼的增重率和佴料系数显著优于对照组，其中添加lOOmg/kg溶菌酶组和添加150mg/kg溶菌酶组鲫鱼的增重率比对照组分别提高了43.73%和52.98%，饵料系数分别下降26.18%和26.43%，差异极显著(P<0.01);添加lOOmg/kg溶菌酶组和添加150mg/kg溶菌酶组鲫鱼的增重率比50mg/kg溶菌酶添加组分别提高了14.36%和21.72%,饵料系数分别下降10.56%和10.89%，差异极显著(P<0.05)。添加150mg/kg溶菌酶组和添加100mg/kg溶菌酶组相比鲫鱼的增重率提高6.44%，饵料系数下降0.37%,差异不显著(PX).05)。所以在鲫鱼的饲料中的添加量大于100m^g为宜。基于现有水产饲料可承受成本压力建议小于400mg/kg。三、针对肉鸡的试验(1)试验设计选取3200羽1日龄艾维茵肉仔鸡随机分为四组，每组4个重复，每个重复200羽。其中在肉仔鸡生长前期对照组为基础日粮组，试验1组是在基础日粮的基础上添加溶菌酶80g，试验2组是在基础日粮的基础上添加溶菌酶90g，试验3组在基础日粮的基础上添加溶菌酶120g，试验4组在基础日粮的基础上添加溶菌酶150g;在肉仔鸡生长后期对照组为基础日粮组，试验1组是在基础日粮的基础上添加溶菌酶40g，试验2组在基础日粮的基础上添加溶菌酶60g，试验3组在基础日粮的基础上添加溶菌酶90g，试验4组在基础日粮的基础上添加溶菌酶120g。试验全程为42天。(2)结果与分析表2溶菌酶对肉仔鸡前期生长性能的影响项目对照组试验1组试验2组试验3组试验4组SE平均日增重(g)76.19a76.95a81.71b83.33b83.56b1.32日采食量(g)98.60a94.95b95.65ab94.91b95.01b1.12料重比1.294a1.243a1.162b1.139b1.140b0.03成活率(％)98.4797.8798.8799.2199.25—注同一行不同字母表示差异显著(p<0.05)。从表2可以看出在肉仔鸡的前期的饲料中添加溶菌酶可以有效提高肉仔鸡的生产性肯l其中添加量在80-120g/T即能达到明显的效果。表3溶菌酶对肉仔鸡后期生长性能的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注同一行不同字母表示差异显著(p<0.05)。从表3可以看出在肉仔鸡后期的饲料中添加溶菌酶制剂60-90g/T可以达到一个良好的生产性能，肉仔鸡的料重比及成活率都有很好的体现。权利要求1、微生物溶菌酶在饲料中替代抗生素的应用方法，在饲料中加入溶菌酶，添加量为60～400克/吨饲料。2、权利要求1所述的微生物溶菌酶在词料中替代抗生素的应用方法，在猪词料中加入溶菌酶，添加量为150300克/吨饲料。3、权利要求1所述的微生物溶菌酶在词料中替代抗生素的应用方法，在水产养殖的饲料中添加溶菌酶，添加量为100-400g/吨饲料。4、权利要求1所述的微生物溶菌酶在饲料中替代抗生素的应用方法，在肉禽养殖的饲料中添加溶菌酶，添加量为60-120g/吨饲料。5、权利要求4所述的微生物溶菌酶在饲料中替代抗生素的应用方法，所述的在肉禽养殖的饲料中添加溶菌酶，在肉禽生长的前期饲料中的添加量为80-120g/吨饲料。6、权利要求4所述的微生物溶菌酶在饲料中替代抗生素的应用方法，所述的在肉禽养殖的饲料中添加溶菌酶，在肉禽生长的后期饲料中的添加量为60-90g/吨饲料。全文摘要本发明公开了一种微生物溶菌酶在饲料中替代抗生素的应用方法，通过把添加量控制在60～400克/吨饲料，可以起到良好的效果，并对不同的动物的饲料中的添加量作相应的调整。使用本方法，利用溶菌酶具有的良好的抗菌杀菌效果，能够有效对抗炎症、感染，对那些抗生素已产生耐药性的菌株也有很强的杀灭作用，可以保证动物的肠道的健康，防治动物下痢，提高动物生产性能。使用本方法疗效好、安全性高，成本低廉，无耐药性、无药物残留、无毒副作用、是绿色环保的活性物质。文档编号A23K1/165GK101611765SQ20091014777公开日2009年12月30日申请日期2009年6月19日优先权日2009年6月19日发明者潘宏涛申请人:杭州康源饲料科技有限公司