专利名称：军团菌属细菌生长抑制剂、沐浴剂和清洗剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及军团菌属细菌生长抑制剂和含有该生长抑制剂的沐浴剂和清洁剂。
背景技术：
军团菌属细菌是好氧性革兰氏阴性杆菌。已经发现，该细菌可能在例如沐浴设施 和冷却塔中生长。通过吸入含有军团菌属细菌的浮质造成军团菌属感染。军团菌属感染包 括军团杆菌性肺炎和庞蒂亚克热。已知军团杆菌性肺炎是一种死亡率较高的感染。专利文 献1公开，从竹叶草提取的成分抑制军团菌属细菌的生长。同时，如专利文献2中所述的，已知血桐(Oobagi)(属于大戟科血桐属)提取物具 有抗微生物作用。然而，血桐提取物对军团菌属细菌的作用还未明了，而且，专利文献2完 全没有说明这一点。专利文献1 日本专利申请公开第2006-45077号专利文献2 日本专利申请公开第2007-45754号
发明内容
本发明依据以下事实，发明人经深入研究发现，血桐(Macarangatanarius)的提 取物对军团菌属细菌的生长具有抑制作用，本发明的一个目的是提供新型的军团菌属细菌 生长抑制剂和含有该生长抑制剂的沐浴剂和清洁剂。为了达到上述目的，本发明的第一个方面提供含有作为活性成分的血桐提取物的 军团菌属细菌生长抑制剂，所述血桐提取物用包括至少一种有机溶剂的提取溶剂从血桐中 提取而得。本发明的第二个方面提供含有作为活性成分的选自宁菲-Afcymphaeol-A)、宁 菲-BOiymphaeol-B)、宁菲-C(nymphaeol-C)中至少一种的军团菌属细菌生长抑制剂。本发明的第三个方面提供含有根据以上本发明的第一个或第二个方面的军团菌 属细菌生长抑制剂的沐浴剂。本发明的第四个方面提供含有根据以上本发明的第一个或第二个方面的军团菌 属细菌生长抑制剂的清洁剂。
图1的色谱图显示实施例1的血桐提取物的高效液相色谱分析结果；和图2的色谱图显示实施例2的血桐提取物的高效液相色谱分析结果。
具体实施例方式以下将具体描述本发明的实施方式。本实施方式的军团菌属细菌生长抑制剂含有作为活性成分的血桐(Oobagi)提取 物，该提取物用包括至少一种有机溶剂的提取溶剂从Oobagi提取而得。Oobagi也称为血桐(Macaranga tanarius)，是一种属于大戟科血桐属的雌雄异株的阔叶常绿树。血桐生长在 例如东南亚，诸如冲绳(日本南部)、台湾、中国南部、马来半岛、菲律宾、马来西亚、印度尼 西亚和泰国，以及澳大利亚北部。血桐相比其它树木明显生长迅速并且能在退化土地上生
长。 血桐的所有器官和每种器官的组成部分都可以用作以提取溶剂进行提取的原材 料。提取用原材料可以是血桐的一种器官或其组成部分，或者可以是血桐的两种或多种器 官或它们的组成部分的混合物。为了增强所得血桐提取物对军团菌属细菌的生长抑制作 用，优选使用包括血桐的果实、种子、花、根、杆、茎尖、叶片、渗出物(诸如蜡)的原材料进行 提取。由于所述茎尖包括茎的生长点和叶芽并且比叶片更软，因此，容易对其进行有效的提 取。而且，中杆、根、叶占据完整血桐的比率比其它器官高。因此，从获得原材料的易得性的 观点来说，使用血桐的叶片作为提取的原材料在工业上是有利的。进行提取操作的提取用原材料的状态是刚收获；或收获后被粉碎、破碎或研碎； 或收获并干燥后被粉碎、破碎或研碎；或收获后被粉碎、破碎或研碎，然后干燥。为了有效地 实施提取，优选地，破碎提取用原材料。可以使用例如切割机、切碎机或轧碎机来进行提取 用原材料的破碎。可以使用例如磨粉机、轧碎机或研磨机粉碎提取用原材料。可以使用例 如叶片混砂机或研钵来研碎提取用原材料。用于从提取用原材料中提取血桐提取物的提取溶剂可以是水和有机溶剂的溶剂 混合物，或者可以是有机溶剂诸如低级醇、二甲基亚砜、乙腈、丙酮、乙酸乙酯、己烷、甘油或 丙二醇。可以使用的低级醇的例子包括甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇和丁醇。作为有机溶剂，可 以仅使用一种溶剂，或者，可以使用多种溶剂的混合物。当使用水和有机溶剂的溶剂混合物 作为提取溶剂时，该溶剂混合物中的有机溶剂的含量优选地是50体积％或更大、更优地80 体积％或更大。当溶剂混合物中的有机溶剂的含量是50体积％或更大时，可以特别有效地 提取血桐中含有的活性成分。所述有机溶剂优选地是低级醇、更优地是乙醇。在该提取溶剂中，可以溶解有机盐、无机盐、缓冲液、乳化剂和糊精。所述提取通过将提取用原材料浸没在以上提取溶剂中达预定的时间来进行。在 所述提取中，根据需要，例如可以采取搅拌或加热或同时采用这两种手段，以便提高提取效 率。而且，为了最大程度减少将不需要的杂质提取到提取溶剂中，在用提取溶剂提取之前， 通过事先用水或热水提取并除去提取水来制备提取用原材料。包含在血桐中并且被认为对 军团菌属细菌的生长具有抑制作用的成分是宁菲。宁菲是水不可溶的。通过使血桐与例如 热水一起煮沸，有效地将除了宁菲以外的杂质转移到提取水中并由此除去这些杂质。从提取用原材料中提取出的血桐提取物进行固液分离以便分离并除去提取用原 材料的残渣。所述固液分离通过已知的方法诸如过滤或离心来进行。根据需要，可以浓缩 固液分离后液体形式的血桐提取物。根据需要，可以通过除去包含在液体形式的血桐提取物中的提取溶剂来获得固体 形式的血桐提取物。从液体形式的血桐提取物中除去提取溶剂可以通过例如减压加热或冻 干法来进行。用包含至少一种有机溶剂的提取溶剂从血桐中提取出的血桐提取物含有选自以 下的至少一种物质宁菲_A(也称为5，7，3’，4’-四羟基-6-香叶基黄烷酮)、宁菲3(也称 为5，7，3’，4’-四羟基-2’-香叶基黄烷酮)和宁菲-((也成为5，7，3’，4’-四羟基-6-(3”’，3”’ - 二甲烯丙基)-2’ -香叶基黄烷酮)。血桐提取物的主要成分是选自宁菲-A、宁菲-B和睡莲酚-C的至少一种，即主要成分是宁菲类物质，并且，所述宁菲类物质被认为对军团 菌属细菌的生长具有抑制作用。血桐提取物还含有蜂胶素A(pr0p0lin A)(也称为5，7，3，，4，-四羟基_2，_ (7”-羟 基-3”，7”- 二甲基-2”-辛烯基)-黄烷酮)。而且，血桐提取物含有作为微量成分的例如5， 7，3’，4’_四羟基-5’-香叶基黄烷酮(也成为异宁菲1)、5，7，3’，4’-四羟基-5’-(7”-羟 基-3”，7”-二甲基-2”-辛烯基)-黄烷酮、5，7，3，，4，-四羟基_6-(7”-羟基-3”，7”-二 甲基-2”-辛烯基)-黄烷酮、5，7，4，-三羟基-3，-(7”-羟基-3”，7”_ 二甲基-2”-辛烯 基)_黄烷酮和5，7，4，-三羟基-3，-香叶基黄烷酮。在各种从血桐的组成部分中提取出的提取溶液中，从花、种子和果实(含有蜡)中 提取出的提取溶液特别地含有高浓度的宁菲_A、B和C和异宁菲-B。军团菌属细菌的生长抑制剂可以含有除了血桐提取物以外的成分，只要不削弱对 军团菌属细菌生长的抑制作用。除了血桐提取物以外，可以包含在军团菌属细菌生长抑制 剂中的成分的例子包括赋形剂、基料、乳化剂、稳定剂和调味剂。军团菌属细菌生长抑制剂可以是液体形式的或固体形式的。军团菌属细菌生长抑 制剂的剂型没有具体限制，可以是例如散剂、粉剂、颗粒、片剂、胶囊、丸剂或液体。制成固体 形式的军团菌属细菌生长抑制剂可以用于承载在过滤器和除菌设备上，所述过滤器设置在 用于排水装置或水循环的管道上。例如，可以在军团菌属细菌生长抑制剂中加入表面活性剂、螯合剂、乳化剂或乙 醇，以便改善血桐提取物的水分散性和水溶性。抑制军团菌属细菌的生长非常重要，以便防止通过吸入含有军团菌属细菌的浮质 造成的军团菌属感染，诸如军团杆菌性肺炎和庞蒂亚克热。军团菌属细菌生长抑制剂用于 通过抑制军团菌属细菌的生长来防止人被军团菌属细菌感染。虽然嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)被称为是代表性的军团菌属细菌，但 是，目前已经有几十种军团菌属细菌被鉴定，它们所有都被认为有可能造成军团菌属感染。军团菌属细菌生长抑制剂可以无任何具体限制地应用于军团菌属细菌的预计生 长位置。具体地，军团菌属细菌生长抑制剂可被加入例如沐浴设施、水和热水供应设施、冷 却塔、增湿器、水景设施和储热槽中使用的水中。由军团菌属细菌造成的感染有可能在特别 是老年人、新生儿、婴儿和儿童等抵抗力较低的人群中发生。由于本实施方式的军团菌属细 菌生长抑制剂的活性成分是源自天然物质的血桐提取物，所以，该生长抑制剂可以安全地 用于医疗设施和老年人福利设施。该军团菌属细菌生长抑制剂可以用作例如沐浴剂、清洁剂、除臭剂和芳香剂。由 于该生长抑制剂可容易地应用于如上所述的细菌产生源的位置，所以，它优选用作沐浴剂 或清洁剂。它的使用希望以这样的方式进行，即军团菌属细菌的产生源位置处宁菲-A、宁 菲-B、宁菲-C的总浓度(即宁菲类物质的浓度)优选地是15ppm或更大、更优地20ppm或 更大。当所有宁菲的浓度是15ppm或更大时，能特别好地发挥对军团菌属细菌生长的抑制 作用。本实施方式的沐浴剂含有上述军团菌属细菌生长抑制剂。沐浴剂的剂型可以是例 如固体、液体或粉末。除了上述军团菌属细菌生长抑制剂以外，所述沐浴剂含有选自以下的至少一种物质，例如水溶性无机盐、着色剂、香料、湿润剂、PH调节剂、维生素、草药、有机 盐和酶。所述水溶性无机盐的例子包括碳酸盐诸如碳酸钠和碳酸氢钠、硅酸盐诸如偏硅酸 钠、磷酸盐诸如正磷酸钠、硫酸盐诸如硫酸钠和硫酸镁、和氯化物诸如氯化钠、氯化钙和氯
化铵。 使用此类沐浴剂时，通过将其混合在沐浴设施中的沐浴水中，可以在沐浴设施运 行时抑制浴缸、使沐浴水流至浴缸的管道、与该管道连接的过滤器和热交换器中军团菌属 细菌的生长。因此，本实施方式的沐浴剂适用于预防人受各种沐浴设施中军团菌属细菌的 感染。可以根据沐浴水中将混合的沐浴剂的量，来适当设置沐浴剂中血桐提取物的含量。沐 浴剂的使用希望以这样的方式进行，即沐浴水中宁菲-A、宁菲-B、宁菲-C的总浓度(即宁 菲类物质的浓度)优选地是15ppm或更大、更优地20ppm或更大。当沐浴水中所有宁菲的 浓度是15ppm或更大时，能特别好地发挥对军团菌属细菌生长的抑制作用。本实施方式的清洁剂含有上述军团菌属细菌生长抑制剂。清洁剂的剂型可以是例 如固体、液体或粉末。除了上述军团菌属细菌生长抑制剂以外，所述清洁剂含有选自以下的 至少一种物质，例如表面活性剂、螯合剂和PH调节剂。所述清洁剂根据需要还可以含有氯 基或氧基消毒剂。所述清洁剂的使用可以通过例如定期与军团菌属细菌产生源位置接触预定时间 来进行。更具体地，可以将军团菌属细菌产生源位点浸没在清洁剂的稀释液中，所述稀释液 通过适当地稀释清洁剂来获得。或者，可以直接对军团菌属细菌产生源位点喷洒清洁剂。可 以根据清洁剂的施用形式，适当设置清洁剂中血桐提取物的含量。沐浴剂的使用希望以这 样的方式进行，即可能成为军团菌属细菌生长源的位点处宁菲-A、宁菲-B、宁菲-C的总浓 度(即宁菲类物质的浓度)优选地是15ppm或更大、更优地20ppm或更大。当所有宁菲的 浓度是15ppm或更大时，能特别好地发挥对军团菌属细菌生长的抑制作用。根据本实施方式，可获得以下有益效果。本实施方式的军团菌属细菌生长抑制剂是含有作为活性成分的血桐提取物的新 型的军团菌属细菌生长抑制剂。该生长抑制剂用于通过抑制军团菌属细菌的生长来防止军 团菌属细菌造成的感染。此外，由于血桐相比其它树木明显生长迅速并且能在退化土地上生长，所以培育 不费太大精力。而且，由于所述血桐提取物源自植物，所以，它是非常安全的。因此，本实施 方式的军团菌属细菌生长抑制剂在稳定供应原材料、生产率和安全性方面也是优良的。由于本实施方式的沐浴剂和清洁剂含有上述军团菌属细菌生长抑制剂，所以，它 们对军团菌属细菌的生长具有抑制作用。对上述实施方式可以作如下修改。代替所述血桐提取物或除了该物质以外，以上实施方式的军团菌属细菌生长抑制 剂可以含有作为活性成分的选自宁菲-A、宁菲-B和宁菲-C的至少一种物质，所述各宁菲非 来源于血桐提取物。非源自血桐提取物的宁菲-A、宁菲-B和宁菲-C可以通过例如化学合 成来获得。军团菌属细菌存在于天然环境诸如泥土中。因此，军团菌属细菌可能在土壤中或 保存于由树脂制成的密封袋中的园艺肥料中生长。鉴于以上所述，为了防止人通过土壤或 园艺肥料受到军团菌属细菌造成的感染，上述实施方式的军团菌属细菌生长抑制剂可以用于加入到泥土或园艺肥料中。由于军团菌属细菌生长抑制剂的活性成分是源自天然物质的 血桐提取物，所以，当使用含有军团菌属细菌生长抑制剂的泥土或肥料来培育园艺植物时， 几乎不会抑制植物的生长。接下来，将参考实施例进一步具体地说明本发明。
实施例1〈血桐提取物的制备1>融解冲绳收获的冰冻的血桐原叶，用剪刀将这些叶子切割成小片。将三十克切碎 的原叶浸没在IOOmL由90份(以体积计)乙醇和10份(以体积计)水组成的溶剂混合物 中，并且在室温下保持2周，随后过滤以便得到作为血桐提取溶液的滤液。将该血桐提取 溶液冻干以制备血桐提取物，所述血桐提取物是包含在血桐提取溶液中的固体内容物的粉 末。当根据图1中显示的色谱图计算时，该粉末形式的血桐提取物中的宁菲-A、宁菲-B和 宁菲-C的总浓度(即宁菲类物质的浓度)是50质量％，所述色谱图通过在以下HPLC条件 下分析血桐提取物而获得。HPLC 条件系统PDA-HPLC系统(岛津公司(Shimadzu Corp. ))，LCIOADvp 系列，UV SPD-I OAvp, PDA :SPD_M10Avp，柱子LunaC18(2X250mm)(岛津气液色谱(Shimadzu GLC))，溶剂=A 水(5 %乙酸)，B 乙腈(5 %乙酸)溶解条件0-20 分钟(梯度溶解A B = 80 20 — A B = 30 70)20-50 分钟(梯度溶解A B = 30 70 — A B = 0 100)50-60 分钟(A B = 0 100)60-75 分钟(A B = 80 20)流速0· 2mL/minPDA 检测:190-370nm UVUV 检测UV 287nm进样量20μ L温度40°C<血桐提取物对军团菌属细菌的抗微生物活性的测试>预培养使用补充了 L-半胱氨酸的缓冲炭酵母浸膏(BCYE)培养基在37°C对军团菌属细菌 菌株-嗜肺军团菌(GIFU9134)-培养4天。然后，将由此获得的细菌悬浮在磷酸盐缓冲液 中以制备用于接种的菌液，该菌液的细菌数是106-107CFU/mL。样品液体的制备将上述粉末形式的血桐提取物与99.醇混合以便制备样品液体，所述样 品液体的血桐提取物的浓度是100X 103ppm。而且，通过用99. 5V/V%乙醇稀释该样品液 体，制备一系列二倍稀释液体样品，即血桐提取物的浓度分别为50X 103ppm、25X 103ppm、12. 5X103ppm、6. 25X 103ppm、3. 13X103ppm 禾口 1. 56X 103ppm 的样品液体。用于敏感性测试的平板培养基的制备 向99质量％ B-SYEa培养基中加入1质量％各样品液体并彻底混合，所述 B-SYEa培养基已经在灭菌后在50-60°C下保持温热。将该混合物分散到皮氏培养皿中并 使其固化。由此，制备血桐提取物浓度分别为1，000ppm、500ppm、250ppm、125ppm、62. 5ppm、 31.3ppm和15. 6ppm的用于敏感性测试的平板培养基。在净化操作台中使由此制备的平 板培养基干燥。B-SYEa培养基由1.5g淀粉、l.Og酵母浸膏、1.3g琼脂、1小瓶军团菌属 BSYEa生长补充剂(OXOID)和IOOmL纯水组成。军团菌属细菌的接种和培养使用内径为Imm的接种环将用于接种的菌液在用于敏感性测试的平板培养基上 划线。随后，使各平板培养基上的菌株在37°C生长3天。评估和结果培养后观察平板培养基的结果是，在血桐提取物的浓度为31. 3ppm或更高的平板 培养基中，军团菌属细菌的生长被抑制。换句话说，实施例1的血桐提取物抑制军团菌属 细菌的最小抑制浓度(MIC)是31. 3ppm。如上所述，由于实施例1的血桐提取物含有50质 量％宁菲，所以，从以上的结果推测，实际应用中宁菲的浓度优选地为15. 6ppm或更大。实施例2〈血桐提取物的制备2>将30g切碎的血桐原叶浸没在95°C的水中达30分钟。过滤除去水，将剩下的叶 子浸没在100%乙醇中3天，随后过滤以便获得作为血桐提取溶液的滤液。将该血桐提取 溶液冻干以制备血桐提取物，所述血桐提取物是包含在血桐提取溶液中的固体内容物的粉 末。当根据图2中显示的色谱图计算时，该粉末形式的血桐提取物中的宁菲-A、宁菲-B和 宁菲-C的总浓度(即宁菲类物质的浓度)是40质量％，所述色谱图通过在上述HPLC条件 下分析血桐提取物而获得。<血桐提取物对军团菌属细菌的抗微生物活性的测试>如实施例1中实施抗微生物试验关于实施例2中制备的血桐提取物，得到与实施 例1中制备的血桐提取物类似的结果，这显示，实施例1和实施例2中制备的血桐提取物的 抗微生物活性相类似。
权利要求
一种军团菌属细菌生长抑制剂，其特征在于，其包含作为活性成分的血桐提取物，所述提取物用包括至少一种有机溶剂的提取溶剂从血桐中提取而得。
2.一种军团菌属细菌生长抑制剂，其特征在于，其包含作为活性成分的选自宁 菲-A(nymphaeol-A)、宁菲-B(nymphaeol-B)和宁菲-C(nymphaeol-C)的至少一种物质。
3.如权利要求2所述的军团菌属细菌生长抑制剂，其中，所述选自宁菲-A、宁菲-B、宁 菲-C的至少一种物质来源于血桐(Macaranga tanarius)的提取物。
4.一种沐浴剂，其特征在于，其包含如权利要求1-3中任意一项所述的军团菌属细菌 生长抑制剂。
5.一种清洁剂，其特征在于，其包含如权利要求1-3中任意一项所述的军团菌属细菌 生长抑制剂。
全文摘要
一种军团菌属细菌生长抑制剂，其包含作为活性成分的血桐提取物，所述提取物用包括至少一种有机溶剂的提取溶剂从血桐中提取而得。或者，所述军团菌属细菌生长抑制剂包含作为活性成分的选自宁菲-A(nymphaeol-A)、宁菲-B(nymphaeol-B)、宁菲-C(nymphaeol-C)的至少一种物质。所述军团菌属细菌生长抑制剂通过混入例如沐浴剂或清洁剂来使用。
文档编号A01P3/00GK101959408SQ20098010835
公开日2011年1月26日 申请日期2009年2月26日 优先权日2008年3月10日
发明者后藤崇辉, 福本修一 申请人:百佳株式会社