专利名称：一种番茄培养基和番茄栽培方法
技术领域：
本发明涉及植物的组织培养技术，特别涉及一种番茄培养基和番茄栽培方法。
背景技术：
Micro-Tom是一个番茄矮化品种，属有限生长型，极矮生，植株高仅10 20cm， 由 FloridaBasket 禾口 Ohio 4013—3 杂交而成(1、Scott Jff, Harbaugh BK. Micro-Tom-a miniature dwarftomato. Florida Agric Exp Station Circ,1989, 370 :1-6)。Micro-Tom 番茄的根系发达，茎蔓非常紧凑，叶色深绿，果实味道甜美，是一种深受大众欢迎的盆栽观果植物。近年来，随着人们生活水平的提高，作为观赏价值高、管理简易、不受季节影响、携带方便的新型室内观赏花卉，Micro-Tom番茄备受人们的欢迎。通过组织培养的方法，诱导 Micro-Tom番茄在试管内开花结果，这种研究具有潜在的实际应用和广阔的市场前景。果实是植物有性生殖最后阶段形成的器官，也是植物个体发育最后阶段所分化的器官。通过组织培养的方法诱导Micro-Tom番茄在试管内开花结果，在探讨器官分化机理以及全能性的表达方面也具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种番茄开花结果诱导培养基。本发明的第二目的在于提供一种番茄芽增殖培养基。本发明的第三目的在于提供一种番茄栽培方法。所述番茄开花结果诱导培养基的配方为6-苄基嘌呤0. 1 0. 3mg/L或玉米素 0. 1 0. 3mg/L, 3-吲哚乙酸 0. 02 0. 05mg/L,蔗糖 20 40g/L 和琼脂粉 6. 0 8. 0g/L, 其余为MS培养基，pH值为5. 5 5. 9。所述番茄芽增殖培养基的配方为玉米素0. 1 0. 3mg/L,蔗糖20 40g/L和琼脂粉6. 0 8. 0g/L,其余为MS培养基，pH值为5. 5 5. 9。所述一种番茄栽培方法包括以下步骤1)番茄种子的无菌播种将经过处理的番茄种子播种到番茄培养基中，于番茄生长条件下进行培养，得番茄种子无菌苗；2)番茄愈伤组织的诱导和不定芽的形成将番茄种子无菌苗的子叶剪接成小叶片，接种于诱导愈伤组织和不定芽形成的诱导培养基中进行诱导培养，获得番茄不定芽；3)番茄试管内开花结果将番茄不定芽接种到开花结果的诱导培养基中进行培养，番茄植株长出花苞并结果。在步骤1)中，所述处理的具体方法为将番茄种子用清水浸泡10 60min后催芽，再用含体积百分比为0. 0. 2%的洗洁精的水浸泡1 池，浸泡后的番茄种子用水冲洗30 60min，移入超净台，依次用乙醇和HgCl2溶液消毒，然后用无菌水冲洗3 6次； 所述番茄培养基的配方可为蔗糖20 40g/L，琼脂粉6. 0 8. 0g/L,余为1/2MS培养基 (即所含大量元素减半后的MS培养基)，调节pH值为5. 5 5. 9 ；所述番茄生长条件可为温度为25°C 士2°C，光照强度为1500 ;35001ux，光周期为16h光照/8h暗。在步骤2)中，所述小叶片的长度最好为0. 5 1. Ocm0所述诱导培养基配方可为 6-苄基嘌呤1. 0 2. Omg/L或玉米素1. O 2. Omg/L, 3-吲哚乙酸0. 2 0. 5mg/L,蔗糖 20 40g/L，琼脂粉6. O 8. Og/L,其余为MS培养基，调pH值为5. 5 5. 9 ；所述诱导培养的条件为温度25°C 士2°C，光照强度1500 20001uX，每天IMi光照/ 暗的光周期下培养，每15d更换一次新鲜诱导培养基。在步骤幻中，所述番茄不定芽可预先接种到芽增殖培养基中培养，获得番茄幼苗后再接种到开花结果的诱导培养基中进行培养；所述培养的条件为25°C 士2°C、光照强度 1500 32001uX，每天IMi光照/8h暗的光周期下培养，每30d更换一次新鲜培养基。本发明通过番茄种子无菌播种，切取子叶和胚轴为外植体，诱导愈伤组织和不定芽形成，进行芽增殖培养，并在试管内开花结果。本发明中的番茄组织培养及试管内开花结果的培育周期短，不受季节影响，番茄开花诱导率可达45% 60%，番茄结果诱导率可达 30 % 45 %。本发明所用的MS培养基为国际通用的植物组织培养基，其成分和配制方法可参考文献(2、H. S.乔拉.植物生物技术导论(影印版)[M].北京科学出版社，2004 20)。
具体实施例方式实施例1一、番茄种子的无菌播种1)将番茄种子用清水浸泡10min，5(TC温水中催芽30min，然后将番茄种子用含 0. 1% (ν/ν)洗洁精的水中浸泡Ih。2)浸泡后的番茄种子用流水冲洗30min，移入超净台，75%乙醇消毒0.5min， 0. 1% HgCl2溶液消毒5min，无菌水冲洗3次后将种子播种到1/2MS培养基上培养。3)在25°C 士2°C、光照强度15001UX，每天16h光/8h暗的光周期下培养。所用培养基含蔗糖20g/L，琼脂粉6g/L，pH 5. 5 5. 9 ；培养5d后种子陆续发芽， 培养IOd后，种子发芽率95 %，种子消毒成功率100 %。二、番茄愈伤组织的诱导和不定芽的形成将番茄种子无菌播种IOd后，在超净台上将充分展开的番茄无菌苗的子叶剪成 0. 5cm长、下胚轴0. 5cm长的小段，接种于设计好的诱导愈伤组织和不定芽形成的培养基中，25°C 士2°C、光照强度15001UX，每天IMi光/8h暗的光周期下培养，每15d更换一次新
鲜培养基。所用培养基含有6-苄基嘌呤1. Omg/L或玉米素1. Omg/L, 3_吲哚乙酸0. 2mg/L, 蔗糖20g/L和琼脂粉6. 0g/L,其余为MS培养基，pH 5. 5 5. 9。培养3d后番茄叶片出现皱缩，5d左右番茄子叶明显加厚，切口卷曲，叶片切口上靠近主脉部分出现深绿色斑块，胚轴变粗，两端切口膨大、外翻，有大量愈伤组织形成，7d左右深绿色斑块处开始出现圆形突起，随着培养时间延长，突起逐渐增多。统计数据表明子叶的出愈率为97% 100%，芽分化率85. 6% 98. 5% ；胚轴的出愈率为90% 95%，芽分化率为43. 5% 57%。三、番茄芽增殖培养将步骤二诱导获得的番茄不定芽，单芽切下接种到芽增殖培养基中培养，250C 士2°C、光照强度1500 20001uX，每天IMi光/8h暗的光周期下培养，每20d更换一
次新鲜培养基。所用培养基含有玉米素0. lmg/L，蔗糖20g/L和琼脂粉6.0g/L，其余为MS培养基，pH5. 5 5. 9 ；培养20d后芽增殖倍数为5 8倍，继续5代后仍然保持增殖率。四、番茄试管苗的试管内开花结果将苗高2 3cm，2 4片番茄叶，切下并接种到开花结果的诱导培养基中， 25 V 士2°C、光照强度1500 32001uX，每天16h光/8h暗的光周期下培养，每30d更换一
次新鲜培养基，所用培养基含有6-苄基嘌呤0. 1 0. 3mg/L或玉米素0. 1 0. 3mg/L，3_吲哚乙酸0. 02 0. 05mg/L,蔗糖20g/L和琼脂粉6. Og/L,其余为MS培养基，pH 5. 5 5. 9 ；培养20d后，番茄植株出现第一个花苞，35d后开第一朵花，45d后结第一个果，最后统计开花率为45% 60%，结果率为30% 45%，结果株上结1 2果/株，结果30d后果实陆续转为红色。实施例2一、番茄种子的无菌播种1)将番茄种子用清水浸泡60min，5(TC温水中催芽45min，然后将番茄种子用含 0.2% (ν/ν)洗洁精的水中浸泡池。2)浸泡后的番茄种子用流水冲洗60min，移入超净台，75%乙醇消毒5min，0. 1% HgCl2溶液消毒20min，无菌水冲洗6次后将种子播种到1/2MS培养基上培养。3)在25°C 士2°C、光照强度35001ux，每天16h光/8h暗的光周期下培养。所用培养基含蔗糖40g/L，琼脂粉8. Og/L, pH 5. 5 5. 9 ；培养5d后种子陆续发芽，培养IOd后，种子发芽率96 %，种子消毒成功率100 %。二、番茄愈伤组织的诱导和不定芽的形成将番茄种子无菌播种IOd后，在超净台上将充分展开的番茄无菌苗的子叶剪成 0. 5 1. Ocm长、下胚轴0. 5 1. Ocm长的小段，接种于设计好的诱导愈伤组织和不定芽形成的培养基中，250C 士2°C、光照强度1500 20001UX，每天IMi光/ 暗的光周期下培养，
每15d更换一次新鲜培养基。所用培养基含有6-苄基嘌呤2. Omg/L或玉米素2. Omg/L, 3_吲哚乙酸0. 5mg/L, 蔗糖40g/L和琼脂粉8. Og/L,其余为MS培养基，pH 5. 5 5. 9。 培养3d后番茄叶片出现皱缩，5d左右番茄子叶明显加厚，切口卷曲，叶片切口上靠近主脉部分出现深绿色斑块，胚轴变粗，两端切口膨大、外翻，有大量愈伤组织形成，7d左右深绿色斑块处开始出现圆形突起，随着培养时间延长，突起逐渐增多。统计数据表明子叶的出愈率为96% 100%，芽分化率86. 6% 98. 5% ；胚轴的出愈率为90% 96%，芽分化率为43. 5% 58%。三、番茄芽增殖培养将步骤二诱导获得的番茄不定芽，单芽切下接种到芽增殖培养基中培养， 250C 士2°C、光照强度20001UX，每天1 光/ 暗的光周期下培养，每20d更换一次新鲜培养基。所用培养基含有玉米素0. 3mg/L,蔗糖40g/L和琼脂粉8. 0g/L,其余为MS培养基，pH 5. 5 5. 9 ；培养20d后芽增殖倍数为5 8倍，继续5代后仍然保持增殖率。四、番茄试管苗的试管内开花结果将苗高2 3cm，2 4片番茄叶，切下并接种到开花结果的诱导培养基中， 250C 士2°C、光照强度32001UX，每天1 光/ 暗的光周期下培养，每30d更换一次新鲜培养基。所用培养基含有6-苄基嘌呤0. 3mg/L或玉米素0. :3mg/L，3_吲哚乙酸0. 05mg/L, 蔗糖40g/L和琼脂粉8. Og/L,其余为MS培养基，pH 5. 5 5. 9 ；培养20d后，番茄植株出现第一个花苞，36d后开第一朵花，47d后结第一个果，最后统计开花率为48% 60%，结果率为33% 45%，结果株上结1 2果/株，结果30d后果实陆续转为红色。
权利要求
1.番茄开花结果诱导培养基，其特征在于其配方为6-苄基嘌呤0.1 0. 3mg/L或玉米素0. 1 0. 3mg/L, 3-吲哚乙酸0. 02 0. 05mg/L,蔗糖20 40g/L和琼脂粉6. 0 8. Og/ L,其余为MS培养基，pH值为5. 5 5. 9。
2.番茄芽增殖培养基，其特征在于其配方为玉米素0.1 0. :3mg/L，蔗糖20 40g/L 和琼脂粉6. 0 8. Og/L，其余为MS培养基，pH值为5. 5 5. 9。
3.一种番茄栽培方法，其特征在于包括以下步骤1)番茄种子的无菌播种将经过处理的番茄种子播种到番茄培养基中，于番茄生长条件下进行培养，得番茄种子无菌苗；2)番茄愈伤组织的诱导和不定芽的形成将番茄种子无菌苗的子叶剪接成小叶片，接种于诱导愈伤组织和不定芽形成的诱导培养基中进行诱导培养，获得番茄不定芽；3)番茄试管内开花结果将番茄不定芽接种到如权利要求1所述番茄开花结果诱导培养基中进行培养，番茄植株长出花苞并结果。
4.如权利要求3所述的一种番茄栽培方法，其特征在于在步骤1)中，所述处理的具体方法为将番茄种子用清水浸泡10 60min后催芽，再用含体积百分比为0. 0.2%的洗洁精的水浸泡1 池，浸泡后的番茄种子用水冲洗30 60min，移入超净台，依次用乙醇和HgC12溶液消毒，然后用无菌水冲洗3 6次。
5.如权利要求3所述的一种番茄栽培方法，其特征在于在步骤1)中，所述番茄培养基的配方为蔗糖20 40g/L，琼脂粉6. 0 8. Og/L,余为1/2MS培养基，调节pH值为5. 5 5 · 9 。
6.如权利要求3所述的一种番茄栽培方法，其特征在于在步骤1)中，所述番茄生长条件为温度为25°C 士2°C，光照强度为1500 35001UX，光周期为16h光照/8h暗。
7.如权利要求3所述的一种番茄栽培方法，其特征在于在步骤2)中，所述小叶片的长度为0. 5 1. Ocm ；所述诱导培养基配方为6-苄基嘌呤1. 0 2. Omg/L或玉米素1. 0 2. Omg/L, 3-吲哚乙酸0. 2 0. 5mg/L,蔗糖20 40g/L,琼脂粉6. 0 8. Og/L,其余为MS 培养基，调PH值为5. 5 5. 9。
8.如权利要求3所述的一种番茄栽培方法，其特征在于在步骤幻中，所述诱导培养的条件为温度25°C 士2°C，光照强度1500 20001uX，每天IMi光照/ 暗的光周期下培养， 每15d更换一次新鲜诱导培养基。
9.如权利要求3所述的一种番茄栽培方法，其特征在于在步骤幻中，所述将番茄不定芽接种到如权利要求1所述番茄开花结果诱导培养基中进行培养之前，番茄不定芽预先接种到如权利要求2所述芽增殖培养基中培养。
10.如权利要求3所述的一种番茄栽培方法，其特征在于在步骤；3)中，所述培养的条件为25°C 士2°C、光照强度1500 32001uX，每天IMi光照/ 暗的光周期下培养，每30d 更换一次新鲜培养基。
全文摘要
一种番茄培养基和番茄栽培方法，涉及植物的组织培养技术。提供番茄开花结果诱导培养基和番茄芽增殖培养基；将经过处理的番茄种子播种到番茄培养基中，于番茄生长条件下进行培养，得番茄种子无菌苗；将番茄种子无菌苗的子叶剪接成小叶片，接种于诱导愈伤组织和不定芽形成的诱导培养基中进行诱导培养，获得番茄不定芽；将番茄不定芽接种到开花结果的诱导培养基中进行培养，番茄植株长出花苞并结果。通过番茄种子无菌播种，切取子叶和胚轴为外植体，诱导愈伤组织和不定芽形成，进行芽增殖培养，并在试管内开花结果。番茄组织培养及试管内开花结果的培育周期短，不受季节影响，番茄开花诱导率达45％～60％，番茄结果诱导率达30％～45％。
文档编号A01H4/00GK102187811SQ20111006918
公开日2011年9月21日 申请日期2011年3月21日 优先权日2011年3月21日
发明者张文珠, 林德钦, 林炳英, 童庆宣, 郑国华 申请人:厦门华侨亚热带植物引种园