含干酪乳杆菌的微生态益生菌制剂及其制备方法
【专利摘要】本发明属于饲料微生物【技术领域】，涉及一种以豆粕、麸皮为基质，以益生菌干酪乳杆菌HM-09(Lactobacillus?casei?HM-09)进行固态发酵的应用技术，此技术可广泛应用于动物益生菌微生态等方面，一种益生菌固体制剂产品，由以下方法制得，固态发酵培养基上接种干酪乳杆菌HM-09种子液，再接种地衣芽孢杆菌BL-09，发酵结束后经干燥制备含有益生菌剂的固体培养物粉末；地衣芽孢杆菌BL-09（Bacillus?licheniformis）保藏号为CGMCC?No.5686，此制备方法生产成本低，可以提高经济效益并且操作简单。
【专利说明】含干酪乳杆菌的微生态益生菌制剂及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于饲料微生物【技术领域】，涉及一种以豆柏、麸皮为基质，以益生菌干酪乳杆菌HM-09 (Lactobacillus casei HM_09)进行固态发酵的应用技术,此技术可广泛应用于动物益生菌微生态等方面。
【背景技术】
[0002]目前，益生菌制品多采用益生菌直接与液态牛乳和豆乳发酵，得到功能性的酸牛奶或者酸豆奶，其余则采用液态发酵，直接收集益生菌菌体，制作成益生菌粉剂、片剂或者胶囊。采用液态发酵会产生大量的废水，对环境污染较大，后处理比较困难，机器设备操作繁琐。因此本申请采用干酪乳杆菌HM-09 (LactobaciIIus casei HM-09)固态发酵豆柏、麸皮为基质，采用固态发酵，其生产成本低，投资的资金较少，在下游处理方便，污染小，设备结构简单、易操作。采用干酪乳杆菌HM-09进行固态发酵，可生产出一种具有酸香气味的发酵制品，改善动物饲料的适口性。其蛋白质被分解成小肽和游离氨基酸，有利于动物肠胃消化吸收。
[0003]中国专利CN103202391A公布了一种预防及改善牛乳房炎的复合微生态制剂，技术方案是:复合微生态制剂中干酪乳杆菌HM_09(L.casei HM-09)质量份数为10%，植物乳杆菌HM-1O (L.Plant arum HM-10)质量份数为10%，其余80%为沸石粉，同时复合微生态制剂中 L.casei HM-09 活菌数量 > 2.5X 108cfu/g, L.plantarum HM-10 活菌数量≥2.5X 108cfu/g ;所述干酪乳杆菌和植物乳杆菌已于2012年10月29日在地址为北京市大屯路,中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,干酪乳杆菌HM-09 (L.caseiHM-09)保藏号:CGMCC N0.6736 ;植物乳杆菌 HM-10 (L.plantarum HM-10)保藏号:CGMCCN0.6741。
【发明内容】
[0004]本发明目的在于采用干酪乳杆菌HM-09进行固态发酵豆柏、玉米粉和麸皮，提供一种以豆柏、麸皮和玉米粉为基质可广泛应用于微生态领域的益生菌固体发酵技术，此方法可以生产出具有特殊酸香味，且豆柏、麸皮发酵产品的活菌数高，豆柏蛋白质的降解率高。此制备方法生产成本低，可以提高经济效益并且操作简单。
[0005]本发明是通过下述技术方案实现的。
[0006]一种以豆柏、麸皮和玉米粉为基质可广泛应用于微生态领域的益生菌固体发酵技术，包括干酪乳杆菌HM-09的培养及其固态发酵培养，得到益生菌的固态发酵产品。
[0007]所述干酪乳杆菌HM-09种子培养基和地衣芽孢杆菌BL-09种子培养基均为(g/L):蛋白胨10-50，葡萄糖10-50，加水至1L，ρΗ7.0-7.2。
[0008]所述地衣芽孢杆菌BL-09种子培养条件，放置于摇床上，转速为160-180r/min，温度为 33-37°C，培养 20-24h。
[0009]所述干酪乳杆菌HM-09的种子培养条件:干酪乳杆菌HM-09于恒温箱中30_37°C静置培养20-24h。
[0010]固态发酵培养基:质量比例组成为:豆柏:麸皮:玉米粉=10:8-10:0.5-1，水份含量控制在 40-75%，pH7.0-7.2。
[0011]干酪乳杆菌HM-09进行发酵pH呈缓慢下降趋势，pH最小值为5.0。干酪乳杆菌HM-09发酵36h后，再接种地衣芽孢杆菌BL-09，再混菌发酵18h后，其游离氨基态氮含量为:260.7umol/g ;发酵制品中干酪乳杆菌HM-09活菌数为3.95 X 109CFU/g，地衣芽孢杆菌的活菌数为2.16X109CFU/g。
[0012]所述固态发酵培养方法为:固态发酵培养基上接种干酪乳杆菌HM-09种子液,接种量为3-8%(v/w)，控制发酵温度34-38°C，湿度40_60%，发酵12_36h ;再接种地衣芽孢杆菌BL-09，接种量为2-8%(v/w)，控制发酵温度30-33°C，湿度40_50%，混菌培养12_18h。发酵结束后经干燥制备含有益生菌剂的固体培养物粉末。
[0013]干酪乳杆菌HM-09于2012年10月29日保藏，保藏号为CGMCC N0.6736。保藏地址为:北京市朝阳区北辰西路I号院3号，保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
[0014]地衣芽抱杆菌BL-09分类名称分别为Bacillus licheniformis BL-09、地衣芽抱杆菌BL-09于2011年12月31日保藏,保藏号为CGMCC N0.5686。
[0015]地衣芽孢杆菌BL-09分离自内蒙古自治区呼和浩特市地区健康牛肠道样品中芽孢杆菌，属于兼性厌氧的、革兰氏阳性芽孢杆菌；菌体呈棒杆状，偶尔见长杆状，芽孢中生，呈椭圆形；最适生长温度为37土 1°C，最适生长pH为7.0-7.4，固态发酵烘干产物常温储存6个月，芽孢损失率低于5% ;营养琼脂平板培养12h左右，菌落不规则、边缘不光滑，菌落中央具有明显的凸起峰，培养至24-36h，菌落褶皱明显且褶皱内物质呈液体状，接种环挑取具有拉丝情况，镜检芽孢基本脱落，经过伯杰氏细菌手册(第9版)生理生化试验及细菌、菌落形态确定为地衣芽孢杆菌，命名为地衣芽孢杆菌BL-09。体外实验证实，该菌株具有良好的耐高温、耐酸、耐胆盐等生化特性地衣芽孢杆菌BL-09还具有高产蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等多种酶类及氨基酸、维生素、抗菌物质等多种生理活性物质，发酵后的固态培养基粘度很大，拉丝严重，培养器皿底部可见少量液体物质，证明其固态发酵中的保湿能力相对较强。
[0016]耐酸试验:
[0017]地衣芽孢杆菌BL-09于肉汤种子液中，370C，180r/min培养24h，于4°C、4000r/min离心10min收集菌体，用0.85%无菌生理盐水漂洗一次后，悬浮于pH分别为2.0、3.0及4.0的缓冲溶液中，37°C培养I~3h，检测活菌数变化，结果显示地衣芽孢杆菌BL-09具有良好
的耐酸性。
[0018]
【权利要求】
1.一种益生菌固体制剂产品，由以下方法制得，固态发酵培养基上接种干酪乳杆菌HM-09种子液，接种量为3-8%(v/w)，控制发酵温度34-38°C，湿度40_60%，发酵12_36h ；再接种地衣芽孢杆菌BL-09，接种量为2-8%(v/w)，控制发酵温度30-33°C，湿度40_50%，混菌培养12_18h ;发酵结束后经干燥制备含有益生菌剂的固体培养物粉末；地衣芽孢杆菌BL-09 (Bacillus licheniformis)保藏号为 CGMCC N0.5686。
2.一种如权利要求1所述益生菌固体制剂产品的制备方法，包括如下步骤:固态发酵培养基上接种干酪乳杆菌HM-09种子液，接种量为3-8%，控制发酵温度34-38°C，湿度40-60%，发酵12-36h ;再接种地衣芽孢杆菌BL-09，接种量为2-8%(v/w)，控制发酵温度30-330C，湿度40-50%，混菌培养12-18h ;发酵结束后经干燥制备含有益生菌剂的固体培养物粉末。
3.—种如权利要求2所述益生菌固体制剂产品的制备方法，所述固态发酵培养基质量比例组成为:豆柏:麸皮:玉米粉=10:8-10:0.5-1，水份含量控制在40-75%, ρΗ7.0-7.2。
4.一种如权利要求2和3所述益生菌固体制剂产品的制备方法，所述固态发酵培养基上接种干酪乳杆菌腿-09种子液，接种量为5%(v/w)，控制发酵温度37°C，湿度50%，发酵36h ;再接种地衣芽孢杆菌BL-09，接种量为6%(v/w)，控制发酵温度3°C，湿度45%，混菌培养18h ;发酵结束后经干燥制备含有益生菌剂的固体培养物粉末，其游离氨基态氮含量为:260.7umol/g。
5.一种如权利要求2和3所述益生菌固体制剂产品在畜禽养殖中的应用。
【文档编号】A23K1/16GK103937715SQ201410153954
【公开日】2014年7月23日 申请日期:2014年4月17日 优先权日:2014年4月17日
【发明者】高鹏飞, 张善亭, 包维臣 申请人:青岛九和宜生生物科技有限公司