本发明涉及一种无菌蚕接种蛹虫草菌培育蚕虫草方法
背景技术：
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目前蛹虫草的培育方法有以下几种：蛹虫草菌置液体培养基中进行发酵，以获取蛹虫草菌丝体。既无虫也无孢子梗(草)。蛹虫草菌置固体培养基中培育，以获取蛹虫草孢子梗。既无虫也无菌丝体。以普通蚕和蛹为蛹虫草菌的宿主，可培育出既有虫、菌丝体和孢子梗—体的蚕虫草。其不足在于栖息在蚕和蛹上的众多其他生物体易引起蚕和蛹体污染腐败不易成功。克服办法是在生产过程中引入防腐剂或抗生素。在蚕虫草生产过程中使用防腐剂或抗生素是不符合食品药品规范的。
为解决上述问题，中国专利申请公布号CN 103798058 A，名称《一种无菌蚕虫草的培育方法》的发明专利公开了一种无菌环境下培育蚕虫草的方法，这种方法排除了蚕体本身体内的多种微生物对虫草生长的影响，较普通桑叶育家蚕幼虫的接种僵化率、出草率高，并且培养出的蚕虫草有效成分更高这种方法提高了僵化率和蚕虫草的产量。但是这种方法对设备要求较高，且培育蚕虫草的产量以及虫草素的含量还有待进一步的提高。
技术实现要素：
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为克服上述缺陷，本发明的目的在于提供一种提高蚕虫草的产量的无菌蚕接种蛹虫草菌培育蚕虫草方法。
为达到上述目的，本发明无菌蚕接种蛹虫草菌培育蚕虫草方法至少包括将注射蛹虫草菌液后得到的僵硬化无菌蚕切成两片以上的步骤。
优选地，将所述的僵硬化的无菌蚕纵向剖开腹部，並均等地切成3片。
优选地，所述的僵硬化无菌蚕是按下述方法制备的：
(1)制备全封闭无菌隔离器；
(2)将蚕卵经75％乙醇和4％甲醛灭菌后传入隔离器内继续孵化；
(3)将孵出的蚕收集在人工饲料上；在温度27±2℃、湿度70～90％、黑暗条件下，饲养至5龄备用；
(4)在隔离器内，给所述的5龄备用蚕每条腹腔注射0.2ml蛹虫草菌液；
(5)经过2-5天后，得到死亡并僵化蚕。
优选地，所述的蚕为5龄第4～7天。
优选地，还包括一个保护的步骤：将切片的无菌蚕置温度20±1℃，湿度90％左右，黑暗条件下保护8-15天。
优选地，还包括一个保护的步骤：将保护后的切片的无菌蚕转入夜间温度16～18℃；白天22～24℃；湿度100％，明暗相间保护，持续40～60天。
为达到上述目的，本发明蚕接种蛹虫草菌培育蚕虫草方法，至少包括将注射蛹虫草菌液后得到的僵化蚕切成两片以上的步骤。
优选地，将所述的僵化的蚕纵向剖开腹部，並均等地切成3片。
优选地，所述的僵硬化无菌蚕是按下述方法制备的：
(1)将蚕卵经75％乙醇和4％甲醛灭菌后进行孵化；
(3)将孵出的蚕收集在人工饲料上；在温度27±2℃、湿度70～90％、黑暗条件下，饲养至5龄第4～7天备用；
(4)在隔离器内，给所述的5龄第4～7天备用蚕每条腹腔注射0.2ml蛹虫草菌液；
(5)经过2-5天后，得到死亡并僵化蚕。
优选地，还包括下述步骤：将切片的僵化蚕置温度20±1℃，湿度90％左右，黑暗条件下保护8-15天；将保护后的切片的僵化蚕转入夜间温度16～18℃；白天22～24℃；湿度100％，明暗相间保护，持续40～60天。
按照上述方法，提高了僵化蚕与空气接触的面积，能促使菌丝体和孢子梗的生长，从而可提高虫草素的含量和产量；经检测，虫草素的含量较现有技术 提高20％以上，产量提高30％以上。
具体实施方式
本发明的方法是将注射蛹虫草菌液后得到的僵硬化无菌蚕切成两片以上，提高了僵化蚕与空气接触的面积，能促使菌丝体和孢子梗的生长，从而可提高虫草素的含量和产量；。经过实验，这种方法在无菌环境和非无菌环境下，均能大幅提高同等环境下无菌蚕蛹虫草的产量和虫草素的含量。为了便于说明，本发明下述的实施例均以无菌环境下培育蛹虫草为例。
所述的僵硬化无菌蚕，可以沿长度方向无菌蚕纵向剖开腹部，並均等地切成2-5片；也可垂直于蚕的轴向切成若干片。
实施例1
制备全封闭无菌隔离器；
将蚕卵经75％乙醇和4％甲醛灭菌后传入隔离器内继续孵化；
将孵出的蚕收集在人工饲料上；在温度27±2℃、湿度70～90％、黑暗条件下，饲养至5龄第6-7天备用；
在隔离器内，给所述的5龄第6-7天备用蚕每条腹腔注射0.2ml蛹虫草菌液；经过2-5天后，得到死亡并僵化蚕。将僵化蚕沿长度方向纵向剖开腹部，并均等地切成3片；
将切片的无菌蚕置温度20±1℃，湿度90％左右，黑暗条件下保护10天。
经10天保护的僵硬蚕转入夜间温度16～18℃；白天22～24℃；湿度100％，明暗相间保护，持续50天。其间菌丝体由少渐增多，颜色由白色渐成黄色至橙黄色，蚕体开始萌发孢子梗原基并逐渐长成长短不等、粗细不同的橙黄色孢子梗。无菌蚕虫草孢子梗多为丛生，萌发率可达95％以上。
用无菌蚕作为蛹虫草菌的宿主，既可避免防腐剂和抗生素的使用，且可常年培育高效、优质、环保蚕虫草。无菌隔离器是个全封闭的屏障系统，经用2％过氧乙酸灭菌后，无菌度可达100％以上，保证无菌蚕饲养的绝对安全。凡传入隔离器的物品、饲料、饮水..等均必须严格灭菌。最终培育蚕虫草的虫 草素的含量较现有技术提高20％以上，蚕虫草产量较现有技术提高30％以上。.
实施例2
制备全封闭无菌隔离器；
将蚕卵经75％乙醇和4％甲醛灭菌后传入隔离器内继续孵化；
将孵出的蚕收集在人工饲料上；在温度27±2℃、湿度70～90％、黑暗条件下，饲养至5龄第4-5天备用；
在隔离器内，给所述的5龄第4-5天备用蚕每条腹腔注射0.2ml蛹虫草菌液；经过2-5天后，得到死亡并僵化蚕。将僵化蚕垂直于蚕的轴向切成若干片，每片2-3毫米；
将切片的无菌蚕置温度20±1℃，湿度90％左右，黑暗条件下保护10天。
经10天保护的僵硬蚕转入夜间温度16～18℃；白天22～24℃；湿度100％，明暗相间保护，持续50天。其间菌丝体由少渐增多，颜色由白色渐成黄色至橙黄色，蚕体开始萌发孢子梗原基并逐渐长成长短不等、粗细不同的橙黄色孢子梗。无菌蚕虫草孢子梗多为丛生，萌发率可达95％以上。
用无菌蚕作为蛹虫草菌的宿主，既可避免防腐剂和抗生素的使用，且可常年培育高效、优质、环保蚕虫草。无菌隔离器是个全封闭的屏障系统，经用2％过氧乙酸灭菌后，无菌度可达100％以上，保证无菌蚕饲养的绝对安全。凡传入隔离器的物品、饲料、饮水..等均必须严格灭菌。最终培育蚕虫草的虫草素的含量较现有技术提高20％以上，最高达到18.5mg/g，蚕虫草产量较现有技术提高30％以上。