1.一种西伯利亚杏体细胞胚胎发生的方法,其特征在于包括如下步骤:
(1)将成熟的西伯利亚杏种子用刷子刷去表面残渣,以3%高锰酸钾溶液浸泡12小时后,自来水冲洗3遍,在干净的环境下破壳,取出西伯利亚杏种仁,在超净工作台中,先用无菌水将种仁冲洗三遍,用75%酒精浸泡30s后用无菌水清洗3-5次,再用 2%次氯酸钠溶液消毒3 min,然后用无菌水冲洗3-5次;
(2)将经步骤(1)处理过的种子以手术刀剥取完整的种胚后,接种于下列培养基中:B5培养基+6-BA(0.3mg/L)+2,4-D(0.9mg/L)+KT(0.25mg/L)+蔗糖(30g/L)+琼脂(6g/L),pH控制在5.8~6.0、温度为23±2℃、暗条件下进行诱导培养35天生成愈伤组织;
(3)将步骤(2)所述的愈伤组织接种于以下培养基中:B5培养基+NAA(0.5mg/L)+ KT(0.2mg/L)+蔗糖(20g/L)+ 还原型谷胱甘肽(100mg/L)+琼脂(6g/L),pH控制在5.8~6.0、温度为23±2℃、暗条件下进行继代培养30天诱导产生胚性愈伤组织;
(4)将步骤(3)所述的胚性愈伤组织接种于下列培养基中:B5培养基+NAA(0.2mg/L) +蔗糖(20g/L)+水解乳蛋白(500mg/L)+琼脂(6g/L),pH控制在5.8~6.0、温度为23±2℃、暗条件下进行增殖培养,每隔30天以相同配方继代培养进行增殖;
(5)将步骤(4)所述的胚性愈伤组织接种于下列培养基中:B5培养基+6-BA(0.5mg/L)+NAA(1.0mg/L) +蔗糖(20g/L)+水解酪蛋白(800mg/L)+谷氨酰胺(200mg/L)+琼脂(6g/L),pH控制在5.8~6.0、温度为23±2℃、暗条件下进行分化培养30天;
(6)将步骤(5)所述的分化而来的上期原胚接种于下列培养基中:B5培养基+ABA(1.5mg/L)+蔗糖(55g/L)+水解酪蛋白(800mg/L)+谷氨酰胺(200mg/L)+肌醇(500mg/L)+琼脂(6g/L),pH控制在5.8~6.0、温度为23±2℃、暗条件下同步化培养15天,使上期胚胎发生发育达到同步化;
(7)将步骤(6)所述的同步化体细胞胚接种于B5培养基+蔗糖(30g/L)+琼脂(6g/L),pH控制在5.8~6.0、温度为23±2℃、暗条件下培养20天后,体胚发育成熟,达到萌发的指标;
(8)将步骤(7)所述的分化成熟体细胞胚接种于1/2WPM培养基+蔗糖(20g/L)+琼脂(6g/L), pH控制在5.8~6.0、温度为23±2℃、3000Lx光照条件下培养30天后即可长成根茎叶健全的健壮西伯利亚杏幼苗。