降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合及制备方法
【专利摘要】降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合，其成分包括：按重量比计，淫羊藿提取物60-80份，乳酸菌发酵制剂20-40份。本发明还提供了一种降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合的制备方法。淫羊藿提取物和乳酸菌发酵制剂隶属于中药和微生态制剂范畴，是国家倡导的替代抗生素等化学药产品的有利替代者，具有安全高效、无残留、不违禁等优势。该组合通过间接增强免疫功能、直接杀菌作用、以及提供营养成分，快速起到降低奶牛体细胞数的效果，而且，本发明的制备方法简单、易操作，最大程度的得到淫羊藿提取物和乳酸菌发酵制剂，不破坏淫羊藿提取物和乳酸菌发酵制剂的有效成分。
【专利说明】降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合及制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合及制备方法。
【背景技术】
[0002] 乳房炎是困扰奶牛业的第一大疾病，临床型乳房炎一般都是由隐性乳房炎进一步 发展所致。而隐性乳房炎的一个主要特征往往是体细胞数的增加。体细胞数越高，隐性乳 房炎越严重，越容易转化成临床型乳房炎。
[0003] 体细胞数增加，说明有病原菌感染乳腺，奶牛免疫系统启动并处理病原菌，当免疫 系统不能完全清除病原菌时，体细胞数会持续上升，产奶量显著下降，并朝乳房炎的方向发 展。
[0004] 现在，越来越多的奶业公司开始关注体细胞数，当牛奶中体细胞数超过一定数量 时，会降价收奶或拒绝收奶。因此开发降低体细胞数的产品尤为急迫。目前市面上降低体细 胞数的产品主要为中药散剂、左旋咪唑，甚至是偷着添加的抗生素等。中药散剂用量大，生 物利用度低，且效果不明显，主要是以提高免疫力为主。左旋咪唑已经禁止在奶牛药物中添 力口。抗生素由于残留问题更是明令禁止。因此，发明一种高效、绿色、无残留的产品，能够快 速降低体细胞数，并将其维持在较低水平，从而减少牧场及奶农损失具有很高的经济价值。
【发明内容】
[0005] 本发明为解决现有技术中根据体细胞数增加的表现，奶牛乳房炎导致产奶量下 降、奶业经济效益降低，现有技术降低体细胞数的药物效果不明显的技术问题，设计了一种 安全、效果明显的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合及制备方法。
[0006] 本发明为实现其目的采用的技术方案是：
[0007] 降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合，其成分包括：按重量比计，淫羊藿提 取物60-80份，乳酸菌发酵制剂20-40份。
[0008] 其成分包括：按重量比计，淫羊藿提取物60份，乳酸菌发酵制剂40份。
[0009] 其成分包括：按重量比计，淫羊藿提取物65份，乳酸菌发酵制剂35份。
[0010] 其成分包括：按重量比计，淫羊藿提取物70份，乳酸菌发酵制剂30份。
[0011] 其成分包括：按重量比计，淫羊藿提取物75份，乳酸菌发酵制剂25份。
[0012] 其成分包括：按重量比计，淫羊藿提取物80份，乳酸菌发酵制剂20份。
[0013] 制备权利要求1所述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合的方法，包括 以下步骤：
[0014] A :将淫羊藿药材粉碎，得到粒度在10-20目的淫羊藿粉，然后将淫羊藿粉置于 8-10倍重量的70%乙醇中，回流提取两次，每次30-60分钟，将两次回流提取的浸提液合 并，得到合并浸提液，利用酒精回收塔回收乙醇，并将合并浸提液通过浓缩罐于80-KKTC进 行浓缩，直至浓缩至合并浸提液总体积的1/15-1/10,得到浓缩液，然后将浓缩液进行喷雾 干燥，得淫羊藿提取物，备用；
[0015] B :将试管中保存的乳酸菌菌种接种于MRS液体种子培养基中，厌氧培养48小时， 得乳酸菌液体种子，然后将该乳酸菌液体种子按体积百分比〇. 5 %的接种量接于液体改良 MRS培养基中，于30-32°C厌氧发酵60-72小时，发酵结束后，将发酵液于40-50°C浓缩至发 酵液原体积的1/10-1/6,得到发酵浓缩液，将所得发酵浓缩液进行喷雾干燥，得乳酸菌发酵 制剂，备用；
[0016] C :将步骤A和步骤B分别制得的淫羊藿提取物和乳酸菌发酵制剂按比例混合均 匀，即得。
[0017] 所述的步骤A中粒度在10-20目的淫羊藿粉，粒度分布为：100%通过10目筛， 98. 1-98. 9%不通过20目筛。
[0018] 所述的步骤B中乳酸菌菌种选自植物乳杆菌、屎肠球菌、嗜酸乳杆菌发酵中的一 种。
[0019] 所述的步骤B中MRS液体种子培养基的配方为：蛋白胨10. Og/L、牛肉膏10. Og/L、 酵母膏5. Og/L、柠檬酸氢二铵2. Og/L、葡萄糖20. Og/L、吐温一 801. OmL/L、乙酸钠5. Og/L、 磷酸二氢钾2. 0g/L、硫酸镁0· 58g/L、硫酸锰0· 25g/L，溶剂为蒸馏水，pH值6. 2?6. 6 ;液 体改良MRS培养基的配方为：蛋白胨12. 0g/L、牛肉膏5. 0g/L、酵母膏6. 0g/L、柠檬酸氢二 铵2. 0g/L、葡萄糖20. 0g/L、吐温一 801. 0mL/L、乙酸钠5. 0g/L、磷酸二氢钾2. 0g/L、硫酸镁 〇· 2g/L、硫酸锰0· 05g/L，溶剂为蒸馏水，pH值6. 2。
[0020] 本发明的有益效果是：淫羊藿提取物中含有多糖和蛋白质等营养成分，这些多糖 及蛋白等成分可以作为乳酸菌的发酵基质，促进乳酸菌的快速增殖，乳酸菌增殖过程中产 生乳酸、乳酸菌素及抗菌肽等活性杀菌物质，以及多种维生素等营养成分，经过肠道吸收 后，迅速发挥作用。而多糖类成分经过乳酸菌转化，分子结构转变，副作用降低，功效增强。 蛋白成分经过乳酸菌分解酶的降解作用，生成小分子肽或氨基酸，从而增强免疫及营养功 能。
[0021] 淫羊藿提取物还富含淫羊藿苷、黄酮等物质，通过和乳酸菌发酵制剂协同，可增加 组织中巨噬细胞的数量，显著增强巨噬细胞的吞噬活力；可增强T淋巴细胞的增殖与转化； 另外，其对NK细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞等也有明显的增强作用。 各种免疫细胞的增强，可以更快更高效的吞噬和杀灭侵入乳腺和机体的病原菌，从而快速 降低体细胞数，提高奶牛的机体免疫能力、抑制体细胞数。
[0022] 该组合物具有增强机体的免疫功能、直接杀灭入侵的病原菌，以及生成维生素、氨 基酸等营养成分三方面的功效，通过这三种功效，可快速降低体细胞，加快患病奶牛的机体 恢复。
[0023] 淫羊藿提取物和乳酸菌发酵制剂隶属于中药和微生态制剂范畴，是国家倡导的替 代抗生素等化学药产品的有利替代者，具有安全高效、无残留、不违禁等优势。该组合通过 间接增强免疫功能、直接杀菌作用、以及提供营养成分，快速起到降低奶牛体细胞数的效 果，连续使用7-10天，效果非常明显。相较于现有技术不仅效果明显而且迅速，通过本发明 的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合，大大降低了奶牛体细胞数。
[0024] 本发明的制备方法简单、易操作，最大程度的得到淫羊藿提取物和乳酸菌发酵制 齐U，不破坏淫羊藿提取物和乳酸菌发酵制剂的有效成分，其中的制备参数是通过长期的研 究和严格的的实验总结得出的，对本产品组合物的有效成分和药效有着关键的作用，是综 合组合物的生物利用度、毒副作用、理化性质以及结合后药效的发挥、药物浓度、奶牛的适 用性和安全性等多方面的考虑，而且本发明的各参数使得制得的降低奶牛体细胞数的中药 及微生态制剂组合应用到奶牛中体细胞数大大降低，相较于现有的产品效果明显而且迅 速。
【具体实施方式】
[0025] 本发明为解决现有技术中根据体细胞数增加的表现，奶牛乳房炎导致产奶量下 降、奶业经济效益降低，现有技术降低体细胞数的药物效果不明显，设计一种安全、效果明 显的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合及制备方法。下面结合具体实施例对本发 明作进一步说明。
[0026] 实施例1.降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合，其成分包括：按重量比 计，淫羊藿提取物60份，乳酸菌发酵制剂40份。
[0027] 制备上述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合的方法，包括以下步骤：
[0028] A :将7kg淫羊藿药材粉碎，得到粒度在10-20目的淫羊藿粉，粒度分布为：100% 通过10目筛，98. 1%不通过20目筛，然后将淫羊藿粉置于8倍重量的70%乙醇中，回流 提取两次，每次30-60分钟，将两次回流提取的浸提液合并，得到合并浸提液163L，利用酒 精回收塔回收乙醇，并将合并浸提液通过浓缩罐于80°C进行浓缩，直至合并浸提液浓缩至 16L，得到浓缩液，然后将浓缩液进行喷雾干燥，得淫羊藿提取物1. 38kg，备用。
[0029] B :将试管中保存的植物乳杆菌菌种接种于MRS液体种子培养基中，厌氧培养48小 时，得植物乳杆菌液体种子，然后将植物乳杆菌液体种子180mL按体积百分比0. 5%的接种 量接于液体改良MRS培养基中，于30°C厌氧发酵62小时，发酵结束后，得到发酵液34. 6L， 将发酵液于45°C浓缩至4. 7L，得到发酵浓缩液，将所得发酵浓缩液进行喷雾干燥，得植物 乳杆菌发酵制剂〇. 73kg，备用。
[0030] C :将步骤A和步骤B分别制得的淫羊藿提取物和植物乳杆菌发酵制剂按比例，称 取淫羊藿提取物1. lkg，植物乳杆菌发酵制剂0. 73kg，混合均匀，分装即得。
[0031] 实施例2.降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合，其成分包括：按重量比 计，淫羊藿提取物65份，乳酸菌发酵制剂35份。
[0032] 制备上述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合的方法，包括以下步骤：
[0033] A :将10kg淫羊藿药材粉碎，得到粒度在10-20目的淫羊藿粉，粒度分布为：100% 通过10目筛，98. 3%不通过20目筛，然后将淫羊藿粉置于8. 5倍重量的70%乙醇中，回流 提取两次，每次30-60分钟，将两次回流提取的浸提液合并，得到合并浸提液185L，利用酒 精回收塔回收乙醇，并将合并浸提液通过浓缩罐于85°C进行浓缩，直至合并浸提液浓缩至 15. 1L，得到浓缩液，然后将浓缩液进行喷雾干燥，得淫羊藿提取物1. 8kg，备用。
[0034] B :将试管中保存的屎肠球菌菌种接种于MRS液体种子培养基中，厌氧培养48小 时，得屎肠球菌液体种子，然后将屎肠球菌液体种子200mL按体积百分比0. 5%的接种量接 于液体改良MRS培养基中，于30°C厌氧发酵64小时，发酵结束后，得到发酵液39. 4L，将发 酵液于45°C浓缩至5. 5L，得到发酵浓缩液，将所得发酵浓缩液进行喷雾干燥，得屎肠球菌 发酵制剂〇.87kg，备用。
[0035] C :将步骤A和步骤B分别制得的淫羊藿提取物和屎肠球菌发酵制剂按比例，称取 淫羊藿提取物1. 58kg，屎肠球菌发酵制剂0. 85kg，混合均匀，分装即得。
[0036] 实施例3.降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合，其成分包括：按重量比 计，淫羊藿提取物70份，乳酸菌发酵制剂30份。
[0037] 制备上述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合的方法，包括以下步骤：
[0038] A :将15kg淫羊藿药材粉碎，得到粒度在10-20目的淫羊藿粉，粒度分布为：100% 通过10目筛，98. 8%不通过20目筛，然后将淫羊藿粉置于10倍重量的70%乙醇中，回流提 取两次，每次30-60分钟，将两次回流提取的浸提液合并，得到合并浸提液277. 2L，利用酒 精回收塔回收乙醇，并将合并浸提液通过浓缩罐于90°C进行浓缩，直至合并浸提液浓缩至 20. 7L，得到浓缩液，然后将浓缩液进行喷雾干燥，得淫羊藿提取物2. 7kg，备用。
[0039] B :将试管中保存的嗜酸乳杆菌菌种接种于MRS液体种子培养基中，厌氧培养48小 时，得嗜酸乳杆菌液体种子，然后将嗜酸乳杆菌液体种子250mL按体积百分比0. 5%的接种 量接于液体改良MRS培养基中，于30°C厌氧发酵67小时，发酵结束后，得到发酵液49. 3L， 将发酵液于48 °C浓缩至5L，得到发酵浓缩液，将所得发酵浓缩液进行喷雾干燥，得嗜酸乳 杆菌发酵制剂1. 2kg，备用。
[0040] C :将步骤A和步骤B分别制得的淫羊藿提取物和嗜酸乳杆菌发酵制剂按比例，称 取淫羊藿提取物2. 67kg，屎肠球菌发酵制剂1. 16kg，混合均匀，分装即得。
[0041] 实施例4.降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合，其成分包括：按重量比 计，淫羊藿提取物75份，乳酸菌发酵制剂25份。
[0042] 制备上述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合的方法，包括以下步骤：
[0043] A :将12kg淫羊藿药材粉碎，得到粒度在10-20目的淫羊藿粉，粒度分布为：100% 通过10目筛，98. 5%不通过20目筛，然后将淫羊藿粉置于9倍重量的70%乙醇中，回流提 取两次，每次30-60分钟，将两次回流提取的浸提液合并，得到合并浸提液232. 3L，利用酒 精回收塔回收乙醇，并将合并浸提液通过浓缩罐于95°C进行浓缩，直至合并浸提液浓缩至 18. 3L，得到浓缩液，然后将浓缩液进行喷雾干燥，得淫羊藿提取物2. 3kg，备用。
[0044] B :将试管中保存的嗜酸乳杆菌菌种接种于MRS液体种子培养基中，厌氧培养48小 时，得嗜酸乳杆菌液体种子，然后将嗜酸乳杆菌液体种子200mL按体积百分比0. 5%的接种 量接于液体改良MRS培养基中，于30°C厌氧发酵69小时，发酵结束后，得到发酵液42. 7L， 将发酵液于50°C浓缩至4. 3L，得到发酵浓缩液，将所得发酵浓缩液进行喷雾干燥，得嗜酸 乳杆菌发酵制剂1. 〇3kg，备用。
[0045] C :将步骤A和步骤B分别制得的淫羊藿提取物和嗜酸乳杆菌发酵制剂按比例，称 取淫羊藿提取物2. lkg，嗜酸乳杆菌发酵制剂0. 7kg，混合均匀，分装即得。
[0046] 实施例5.降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合，其成分包括：按重量比 计，淫羊藿提取物80份，乳酸菌发酵制剂20份。
[0047] 制备上述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合的方法，包括以下步骤：
[0048] A :将13kg淫羊藿药材粉碎，得到粒度在10-20目的淫羊藿粉，粒度分布为：100% 通过10目筛，98. 7%不通过20目筛，然后将淫羊藿粉置于9. 5倍重量的70%乙醇中，回流 提取两次，每次30-60分钟，将两次回流提取的浸提液合并，得到合并浸提液245. 7L，利用 酒精回收塔回收乙醇，并将合并浸提液通过浓缩罐于l〇〇°C进行浓缩，直至合并浸提液浓缩 至16. 4L，得到浓缩液，然后将浓缩液进行喷雾干燥，得淫羊藿提取物2. 43kg，备用。
[0049] B :将试管中保存的植物乳杆菌菌种接种于MRS液体种子培养基中，厌氧培养48小 时，得植物乳杆菌液体种子，然后将植物乳杆菌液体种子220mL按体积百分比0. 5%的接种 量接于液体改良MRS培养基中，于30°C厌氧发酵72小时，发酵结束后，得到发酵液44. 3L， 将发酵液于48°C浓缩至7. 3L，得到发酵浓缩液，将所得发酵浓缩液进行喷雾干燥，得植物 乳杆菌发酵制剂1. 12kg，备用。
[0050] C :将步骤A和步骤B分别制得的淫羊藿提取物和植物乳杆菌发酵制剂按比例，称 取淫羊藿提取物2. 4kg，植物乳杆菌发酵制剂0. 6kg，混合均匀，分装即得。
[0051] 选取600头体细胞数较高的奶牛样本，奶牛平均初始体细胞数为158. 2万/mL，随 机分成6组，分别为对照组和实施例组，每组100头奶牛，按每头奶牛每天投喂产品50g，对 照组投喂市场上现有的产品，实施例组分别投喂上述5组实施例产品，连用10天。每天采 用CMT检测法进行体细胞数测定，结果如下：
[0052] 投喂市场上现有产品的对照组奶牛的体细胞数测定值，见表1 :
[0053] 表 1 :
[0054]
【权利要求】
1. 降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合，其特征在于：其成分包括：按重量比 计，淫羊藿提取物60-80份，乳酸菌发酵制剂20-40份。
2. 根据权利要求1所述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合，其特征在于： 其成分包括：按重量比计，淫羊藿提取物60份，乳酸菌发酵制剂40份。
3. 根据权利要求1所述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合，其特征在于： 其成分包括：按重量比计，淫羊藿提取物65份，乳酸菌发酵制剂35份。
4. 根据权利要求1所述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合，其特征在于： 其成分包括：按重量比计，淫羊藿提取物70份，乳酸菌发酵制剂30份。
5. 根据权利要求1所述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合，其特征在于： 其成分包括：按重量比计，淫羊藿提取物75份，乳酸菌发酵制剂25份。
6. 根据权利要求1所述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合，其特征在于： 其成分包括：按重量比计，淫羊藿提取物80份，乳酸菌发酵制剂20份。
7. 制备权利要求1所述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合的方法，其特征 在于：包括以下步骤： A :将淫羊藿药材粉碎，得到粒度在10-20目的淫羊藿粉，然后将淫羊藿粉置于8-10倍 重量的70%乙醇中，回流提取两次，每次30-60分钟，将两次回流提取的浸提液合并，得到 合并浸提液，利用酒精回收塔回收乙醇，并将合并浸提液通过浓缩罐于80-KKTC进行浓缩， 直至浓缩至合并浸提液总体积的1/15-1/10,得到浓缩液，然后将浓缩液进行喷雾干燥，得 淫羊藿提取物，备用； B :将试管中保存的乳酸菌菌种接种于MRS液体种子培养基中，厌氧培养48小时，得乳 酸菌液体种子，然后将该乳酸菌液体种子按体积百分比0.5 %的接种量接于液体改良MRS 培养基中，于30-32°C厌氧发酵60-72小时，发酵结束后，将发酵液于40-50°C浓缩至发酵 液原体积的1/10-1/6,得到发酵浓缩液，将所得发酵浓缩液进行喷雾干燥，得乳酸菌发酵制 齐U，备用； C :将步骤A和步骤B分别制得的淫羊藿提取物和乳酸菌发酵制剂按比例混合均匀，即 得降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合。
8. 根据权利要求7所述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合的制备方法，其 特征在于：所述的步骤A中粒度在10-20目的淫羊藿粉，粒度分布为：100%通过10目筛， 98. 1-98. 9%不通过20目筛。
9. 根据权利要求7所述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合的制备方法，其 特征在于：所述的步骤B中乳酸菌菌种选自植物乳杆菌、屎肠球菌、嗜酸乳杆菌发酵中的一 种。
10. 根据权利要求7所述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合的制备方 法，其特征在于：所述的步骤B中MRS液体种子培养基的配方为：蛋白胨10. Og/L、牛肉膏 10. Og/L、酵母膏5. Og/L、柠檬酸氢二铵2. Og/L、葡萄糖20. Og/L、吐温一 801. OmL/L、乙酸钠 5. 0g/L、磷酸二氢钾2. 0g/L、硫酸镁0· 58g/L、硫酸锰0· 25g/L，溶剂为蒸馏水，pH值6. 2? 6. 6 ;液体改良MRS培养基的配方为：蛋白胨12. 0g/L、牛肉膏5. 0g/L、酵母膏6. 0g/L、柠檬 酸氢二铵2. 0g/L、葡萄糖20. 0g/L、吐温一 801. 0mL/L、乙酸钠5. 0g/L、磷酸二氢钾2. 0g/L、 硫酸镁0. 2g/L、硫酸锰0. 05g/L，溶剂为蒸馏水，pH值6. 2。
【文档编号】A61K36/296GK104208118SQ201410463657
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年9月11日 优先权日:2014年9月11日
【发明者】郭立佳, 徐立萧, 田继业, 李定刚, 邵谱 申请人:保定冀中药业有限公司