专利名称：：杉木体细胞胚诱导所需球果的采集处理方法
技术领域：
：本发明属于生物
技术领域：
，具体是指杉木体细胞胚诱导所需球果的采集处理方法。
背景技术：
：杉木(Cunninghamialanceolata(lamb.)Hook)为杉科植物，在长江以南大部分地区均有分布，因其生长快、产量高、材性好、用途广，是国内重要的商品材树种。但由于杉木是异花授粉树种，用种子繁殖，个体分化大，难以保持杉木母体的性状，同时种子结实率低，杉木高世代种子园营建时间长，难以满足日益增长的市场需求；采用常规的扦插、压条或嫁接等无性繁殖方法，繁育速度慢；而采用组织培养方法，生产成本高，且由于针叶植物通过组织培养手段生产的苗木种植后容易发生侧枝效应，不利于产业化生产；因此需要探索杉木体细胞胚胎技术，而杉木体细胞胚诱导球果采集时间及处理方法作为决定杉木体胚能否成功的关键因素，目前在我国尚未见报道。体细胞胚胎是指由植物孢子体或配子体的细胞通过无性繁殖产生的一禾中类似于合子胚的结构。本发明人经研究发现，采用植物体细胞胚胎技术，既可以保持母体的优良性状，保证植物细胞的全能性，又可以提高杂种后代的繁殖速度，提高生产效率，有效节约生产成本，从而缓解目前杉木苗木的供需矛盾。本案油然而生。
发明内容本发明的目的在于提供杉木体细胞胚诱导所需球果的采集处理方法，以提供最佳的杉木球果采集时间，保证杉木球果内幼胚的发育质量，促进种子内代谢的转化及幼胚的生长，提高诱导率，确保体细胞胚诱导成功。为了实现上述目的，本发明的解决方案是-杉木体细胞胚诱导所需球果的采集处理方法，在杉木杂交授粉后的第107—149天，采集未成熟球果，将采集的球果用湿布包好，密封后放置于温度控制在4-8。C的冰箱内冷藏处理0-50天，然后将冷藏处理的球果取出，并从球果中取出种子进行消毒，将消毒后的种子吸干水分，去掉种皮，即可用于接种到杉木体胚诱导的培养基上，诱导形成ESM(胚性细胞团)。所述未成熟杉木球果的采集时间为种子授粉后的第120—130天。所述采集后的未成熟球果的冷藏处理时间为20-30天。所述消毒方法是用浓度为70%的酒精消毒20秒后，在无菌水下冲洗1-3次；再用浓度为0.1%的HgCl,消毒8分钟，置于无菌水下冲洗4-5次。采用上述杉木体细胞胚诱导所需球果的采集处理方法后，本发明可以保证杉木球果内幼胚的质量，同时冷藏处理后促进了种子内代谢的转化及幼胚的生长，提高诱导率，确保体胚诱导成功，为杉木体胚产业化生产奠定了基础。具体实施例方式下面通过具体实验来说明本发明杉木体细胞胚诱导所需球果采集处理方法。本发明选取的材料是优良杉木家系杂交授粉后的未成熟球果，先在杉木杂交授粉后的第100—149天，分8个批次对8个不同种源的未成熟球果进行采集，每批次每个种源号采集8个球果，每个球果中约有40粒未成熟种子。再将采集后的球果用湿沙布包好(湿沙布的含水量的控制将沙布在自来水浸湿后用手拧干至不出水为止)，湿沙布外套上塑料袋密封后放置于冰箱，冷藏温度控制在4-8°C，冷藏处理0-50天。然后，分别将8个种源号不同时间采集的球果都经冷藏处理25天后球果取出，从球果中取出种子进行消毒，消毒后开展诱导，探索球果最佳采集时间。(详见表l)表l8个种源不同采集时间对诱导频率的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>表1所用的种子来自不同时间段采集经冷藏处理25天后的球果，每个种源号用50粒种子做实验。经过实验显示，授粉后121-128天的诱导频率最高，诱导频率分别达69.75%和72%。从实验数据可以确定杉木体细胞胚的诱导频率与授粉后球果采集时间有关。从实验的数据可确定球果最佳采集时间为杂交授粉后的120—130天。接着，分别将授粉后第128天的球果按冷藏处理0、10、20、30、40、50天的球果取出，从球果中取出种子进行消毒，.具体消毒方式为用浓度为70%的酒精消毒20秒后，在无菌水下冲洗l-3次；再用浓度为0.1%的HgCl2消毒8分钟，置于无菌水下冲洗4-5次。消毒后开展诱导，探索球果采集后最佳冷藏处理时间。(详见表2)表28个种源的杉木种子不同冷藏处理时间对诱导频率的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>表2所用的种子为授粉后121天采集的球果内的未成熟种子，每个种源号每个冷藏时间段都用50粒种子做实验。实验结果显示，经过冷藏处理20-30天时间后诱导，诱导频率较高，分别高达73%和71.75%。从实验的数据可确定要提高体细胞的诱导频率，采集后球果冷藏处理时间为20至30天。冷藏处理的球果取出后，在超净工作台内，将消毒后的种子吸干水分，去掉种皮接种到杉木诱导培养基上，经过8-15天的诱导开始形成ESM(胚性细胞团)。综上所述，本发明杉木体细胞胚诱导所需球果的来集处理方法，是在杉木杂交授粉后的第120—130天采集未成熟球果，用湿布包好并密封后放置于温度控制在4-8t:的冰箱内冷藏处理20-30天，再从球果中取出种子进行消毒，将消毒后的种子吸干水分，去掉种皮即可。本发明采集处理后的球果接种到杉木体胚诱导的培养基上，即可诱导形成ESM(胚性细胞团)。总之，杉木球果采集时间是影响体胚诱导的关键因素，提供最佳的球果采集时间是本发明重点解决的问题；本发明揭示的杉木球果冷藏处理方法，可以促进球果内的种子代谢转化及幼胚的生长，从而有效提高诱导频率。此技术完全可以满足杉木体胚产业化生产的要求。权利要求1、杉木体细胞胚诱导所需球果的采集处理方法，其特征在于在杉木杂交授粉后的第107-149天，采集未成熟球果，将采集的球果用湿布包好，密封后放置于温度控制在4-8℃的冰箱内冷藏处理0-50天，然后将冷藏处理的球果取出，并从球果中取出种子进行消毒，将消毒后的种子吸干水分，去掉种皮，即可用于接种到杉木体胚诱导的培养基上，诱导形成ESM。2、如权利要求1所述杉木体细胞胚诱导所需球果的采集处理方法，其特征在于未成熟杉木球果的采集时间为种子授粉后的第120—130天。3、如权利要求1所述杉木体细胞胚诱导所需球果的采集处理方法，其特征在于采集后的未成熟球果的冷藏处理时间为20-30天。全文摘要本发明公开一种杉木体细胞胚诱导所需球果的采集处理方法，在杉木杂交授粉后的第107-149天，采集未成熟球果，将采集的球果用湿布包好，密封后放置于温度控制在4-8℃的冰箱内冷藏处理0-50天，然后将冷藏处理的球果取出，并从球果中取出种子进行消毒，将消毒后的种子吸干水分，去掉种皮，即可用于接种到杉木体胚诱导的培养基上，诱导形成ESM。这样可以获得较高的诱导率，并与其它技术相结合，完全可以满足杉木体胚产业化生产的要求，即可实现杉木产业化生产。文档编号A01H4/00GK101189957SQ20061013524公开日2008年6月4日申请日期2006年11月22日优先权日2006年11月22日发明者鹏冯,林良科,苏智强,赖诗金,郑仁华,陆利春申请人:厦门涌泉集团有限公司