青冈树获取无菌外植体制备及初始芽的方法与流程

技术特征：

1.一种青冈树获取无菌外植体制备及初始芽的方法，其特征在于：包括外植体准备、外植体消毒处理以及初始芽诱导工序，采集青冈树当年生嫩枝作为外植体，进行消毒处理后，获得的无菌外植体接种于初始芽诱导培养基中，在适宜环境中培养20-30天后，获得生长快、活力旺盛的青冈树初始芽，其操作步骤如下：

（1）外植体准备：

在至少连续3天晴朗的气候里，采集青冈树的树冠外围生长健壮的当年生嫩枝作为外植体；

外植体消毒处理：

将外植体用无菌水冲洗干净后，置于体积浓度为0.1-0.3 %的广谱杀菌剂中浸泡20-30 min，取出外植体将其置于体积浓度为70 %酒精中浸泡1-2 min，再移入体积浓度为5-8 %的升汞溶液中浸泡10-20 min，取出放于体积浓度为10-25 %的双氧水和2-5滴吐温的混合液中搅拌浸泡20-30 min后，最后用无菌水洗3-4次，每次冲洗3-5 min；将外植体裁成带至少1个腋芽，1.5-3cm长的茎段，视茎段木质化程度分类置放容器内，备用；

（3）初始芽诱导：将步骤（2）得到的外植体接种于诱导培养基中；所述的诱导培养基为：改良1/2MS培养基 + 噻苯隆（TDZ）0.5-2.0 mg·L^-1 + MT 1.0-3.0 mg·L^-1 + NAA 1.0-3.0 mg·L^-1 + 葡萄糖30 g·L^-1 + 琼脂3.5 g·L^-1 + 0.1-0.3 %广谱杀菌剂；初始芽诱导培养周期为：20-30天，置于适宜条件下进行初始芽诱导培养，获得生长健壮、活力旺盛的青冈树初始芽。

2.根据权利要求1所述的青冈树无菌外植体制备及初始芽诱导方法，其特征在于：所述的改良MS培养基的组成为：KNO₃ 2200mg·L^-1；NH₄NO₃ 780 mg·L^-1；CaCl₂·2H₂O 230 mg·L^-1；MgSO₄·7H₂O 180 mg·L^-1；Ca(NO₃)₂·4H₂O 400 mg·L^-1；KH₂PO₄ 170 mg·L^-1；MnSO₄·H₂O 22.3 mg·L^-1；ZnSO₄·7H₂O 8.6 mg·L^-1；CuSO₄·5H₂O 0.025 mg·L^-1；H₃BO₃ 6.2 mg·L^-1；Na₂MoO₄·2H₂O 0.025 mg·L^-1；KI 0.83 mg·L^-1；CoCl₂·6H₂O 0.025 mg·L^-1；维生素B₁1.5 mg·L^-1；维生素B₆ 0.6 mg·L^-1；烟酸 0.5 mg·L^-1；甘氨酸 2.0 mg·L^-1；肌醇 200 mg·L^-1。

3.根据权利要求1所述的青冈树单株外植体制备及初始芽诱导方法，其特征在于：步骤（3）所述的适宜条件为：温度：20±3℃，光照培养时间为：16 h，光照强度为：≤1000 lx。