蜜环菌菌剂的制备方法及该方法制成的蜜环菌菌剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及真菌菌剂制备领域，具体而言，涉及一种蜜环菌菌剂的制备方法及该 方法制成的蜜环菌菌剂。
【背景技术】
[0002] 蜜环菌 Armillaria mellea (vahl. ex Fr.) Quel 是一种药（食）用菌，隶属于 担子菌亚门（Basidomycotina)，层菌纲（Hymenomycetes)，伞菌目（Agaricales)，口蘑科 (Tricholomataceae)，又名糖蕈、蜜色环菌、蜜蘑、栎菌、小蜜环菌、蜜环蕈、青冈菌；该菌是 仅有的几个具有菌索的种类之一，在东北地区俗称"榛蘑"。当前，蜜环菌人工栽培产量有 限。
[0003] 在相关技术中，蜜环菌菌索生长缓慢、形成菌球时间长、出菇条件苛刻，进而使得 蜜环菌菌材的产量不能得到保障。随着蜜环菌菌材在作为药材（或食材）方面的需求不断 增大，因此，提供一种能够直接侵染枝条（以实现蜜环菌菌材制备）的蜜环菌菌剂是生产中 亟待解决的一个技术问题。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于一种蜜环菌菌剂的制备方法，以解决上述的技术问题。
[0005] 在本发明的实施例中提供了一种蜜环菌菌剂的制备方法，包括以下步骤：
[0006] 1)、将蜜环菌原菌的菌索段接入菌株保藏培养基中进行培养，待所述菌索段的尖 端长至所述菌株保藏培养基深度的1/2时，置于22-25?的温度下放置3天，得到待活化菌 种；
[0007] 其中，按照重量份数计，所述菌株保藏培养基的原料组份包括：玉米粉提取液 38-42份、蔗糖18-22份、麸皮28-32份、琼脂8-12份、硫酸镁0. 5份、磷酸二氢钾0. 5-1. 5 份；
[0008] 2)、将所述待活化菌种的尖端菌索转接至菌种活化培养基中进行活化，得到活化 后菌种；
[0009] 其中，按照重量份数计，所述菌种活化培养基的原料组份包括：麦粒提取液38-42 份、琼脂8-12份、葡萄糖18-22份、磷酸二氢钾1-2份、硫酸镁2-4份；
[0010] 3)、将所述活化后菌种接种到另一新的所述菌种活化培养基中进行扩繁，得到扩 繁后的固体菌种；
[0011] 4)、利用麸皮液体培养基将所述扩繁后的固体菌种进行两次暗培养，得到二级液 体菌种；
[0012] 其中，按照重量份数计，所述麸皮液体培养基包括：麸皮提取液48-52份、葡萄糖 18-22份、磷酸二氢钾1-2份、硫酸镁0. 75份、维生素0. 01份；
[0013] 5)、将所述二级液体菌种接入所述麸皮液体培养基中进行深层发酵培养，得到能 够直接侵染枝条的蜜环菌菌剂。
[0014] 本发明提供的这种蜜环菌菌剂的制备方法，通过探索蜜环菌的生长条件，依次将 其原菌的菌索段（一般来源于与其伴生的猪苓或天麻专用菌株）接种到菌株保藏培养基 中，该培养基含有大量的玉米粉提取液以及碳源等，可供菌株的营养所需。接种后，菌索段 的尖端会向着培养基的内部生长，待其伸入到培养基后，置于〇_4°C的温度下保藏（半年内 蜜环菌的种性不会发生明显变化），使其处于半休眠状态，以后使用时进行活化。
[0015] 在活化的过程中，优选利用菌种活化培养基，该培养基的组份配比最适于菌种的 生长，一般而言，仅需7-10天即可布满整个培养基。得到活化后菌种后，为了保证所获菌材 的质量，需要将其利用优选的培养基（菌种活化培养基）进行扩繁，该培养基会使得活化 后的固体菌种的菌丝球生长状况非常好（萌发天数、满皿天数短、菌索干重量大）。扩繁之 后，将扩繁后的固体菌种利用液体培养基进行培养，进而得到二级液体菌种；最后再通过深 层发酵培养之后即可获得能够直接侵染枝条的蜜环菌菌剂。通过实验测定，该蜜环菌菌剂 可直接侵染枝条，接种枝条约30天之后即可形成栽培用的菌枝。
[0016] 综上，通过本发明实施例提供的这种方法可获得用于直接侵染枝条的蜜环菌菌 剂，该菌剂接种到枝条后约30天即可用于人工种植猪苓或天麻，与现有技术相比，缩短了 菌材的获取时间（不经过原种阶段），进而使得蜜环菌菌材的产量得到保障，还可为医药业 获取其药用成分提供充足的物质来源。
[0017] 可选的，在步骤2)中：具体包括：将所述待活化菌种常温放置46-50小时后，挑选 其菌索尖端的白色或淡黄色的生长点并转接至活化培养基中培养7-10天，得到活化后菌 种。
[0018] 可选的，在步骤4)具体包括：将所述扩繁后的固体菌种接入至所述麸皮液体培养 基中，暗培养8-12天，得到一级液体菌种；
[0019] 将所述一级液体菌种按照8-12%的接种量转接至另一新的麸皮液体培养基继续 暗培养，得到二级液体菌种。
[0020] 可选的，在所述将所述扩繁后的固体菌种接入至所述麸皮液体培养基中，暗培养 8-12天，得到一级液体菌种的步骤中；
[0021] 暗培养的温度为28-30°C、转速为140-160转/分钟。
[0022] 可选的，在步骤5)中：在所述深层发酵培养的过程中，溶氧量为48-52%、pH为7、 温度为28-30°C、消泡剂体积浓度2%〇。
[0023] 可选的，在步骤5)中，所述深层发酵培养的时间为8-12天。
[0024] 可选的，在步骤5)之后，还包括：将所述蜜环菌菌剂接种到枝条上，培养28-32天， 得到能够人工栽培的菌枝。
[0025] 可选的，所述枝条选自桃树、山楂树、柳树、海棠树、楼桃树、橡树、柿子树、榛树、杏 树、榆树、小叶杨、山丁子树、桦树、苦栎、板栗中的一种或多种。
[0026] 上述的制备方法制成的蜜环菌菌剂。
【附图说明】
[0027] 为了更清楚地说明本发明【具体实施方式】或现有技术中的技术方案，下面将对具体 实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的 附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前 提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
[0028] 图1为本发明实施例一提供的蜜环菌菌剂的制作方法的制备流程示意图。
【具体实施方式】
[0029] 为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行 清楚、完整的描述，基于本发明中的【具体实施方式】，本领域普通技术人员在没有做出创造性 劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。
[0030] 实施例一
[0031] 请参考图1，本发明提供的这种蜜环菌菌剂的制备方法，包括以下步骤：
[0032] 步骤101 :将蜜环菌原菌的菌索段接入菌株保藏培养基中进行培养，待所述菌索 段的尖端长至所述菌株保藏培养基深度的1/2时，置于22-25?的温度下放置3天，得到待 活化菌种；
[0033] 步骤101为菌株保藏的阶段，在该步骤中，于菌株保藏培养基中接入需要保藏的 蜜环菌原菌的菌索段（优选源于相伴生的猪苓或天麻专用菌株）。
[0034] 另外，按照重量份数计，所述菌株保藏培养基