本发明属于食用菌及生物技术领域，尤其涉及一种玉米芯块食用菌固定化菌种生产和栽培方法。
背景技术：
食用菌是一类可产生具有极高营养和药用价值子实体的大型真菌，具有重要的经济价值，常见种类有香菇、双孢蘑菇、平菇、杏鲍菇、银耳等。研究表明食用菌营养成分丰富，如含有蛋白质、不饱和脂酸酸、氨基酸、膳食纤维、维生素、微量元素等，其蛋白质含量显著高于蔬菜。食用菌还含有一些特殊风味物质，使其味道鲜美，因此，食用菌是一种良好的食物资源。此外，食用菌还含有多种生物活性成分，以多糖最为著名，具有抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、免疫调节等多种药理活性，因此，食用菌不仅是一种良好食物，也已成为新药开发的重要来源，其潜力越来越受到人们的重视。
近年来，种类繁多的不同食用菌从自然界中成功分离并驯化。随食用菌相关研究的不断深入，可栽培食用菌种类不断扩大。目前人工代料栽培已成为食用菌生产的主要方式，主要利用林业、农业、食品工业等所产生的各种废弃物如木屑、棉籽壳、甘蔗渣、玉米芯、稻草、麦杆、豆杆、花生壳、莲子壳、野草、酒渣等作为主料，提供食用菌生长的碳源，麸皮、玉米粉、米糠等作为氮源，添加适量即可，此外还常添加石灰、石膏等，防止食用菌生长过程培养料过度酸化，影响食用菌菌丝生长和出菇产量。由于这些原料大都为可再生材料，来源广泛，价格低，易于大量获得，因此食用菌属于可持续发展产业，具有极大的发展空间。此外食用菌栽培还可减轻废弃物对生态环境的极大破坏作用，具有重要的生态意义。
我国是食用菌生产大国，是世界上最重要的食用菌生产国家，食用菌栽培分布全国各地，产量占世界总产量70%以上，已成为我国农业的重要组成部分。食用菌栽培中需要使用大量菌种，目前栽培中主要使用木屑种、枝条种、谷粒种以及液体菌种等4种，其中木屑种应用最为普遍。木屑种以木屑为主要原料，少量添加麸皮，采用固态发酵法生产，但其生产周期过长，通常超过30天以上，同时木屑来源受限，此外栽培过程中木屑种的使用还具有接种不方便，接种效率低，接种量不易准确控制等明显缺点，因此开发一种生产周期短、易于接种操作、非木屑作为培养料的低成本新型食用菌菌种十分必要。
技术实现要素：
为解决上述问题，本发明提供了一种以玉米芯块作为载体，利用自然吸附技术生产食用菌固定化菌种及其栽培应用的方法。
具体技术方案如下：
固定化菌种具体生产方法为：将干燥、去籽玉米芯轴向垂直横切，控制其厚度为1-1.5cm；柱状切片进一步对称切割为4片均一性玉米芯块，作为固定化载体；每20玉米芯块放置于250ml摇瓶，移入100ml发酵培养基，配方（每升）为葡萄糖35g、蛋白胨5g、酵母粉4g、磷酸二氢钾1.0g、硫酸镁0.5g；胶塞封口、121℃灭菌30min；接入10ml经均质处理（研磨、均质机或超声波破碎）的食用菌液体菌种，150rev/min、30℃培养5-7d，摇床培养过程食用菌菌丝吸附至玉米芯块表面并大量生长；用无菌纱布过滤收集表面吸附大量食用菌菌丝体的玉米芯块，即为玉米芯粒食用菌固定化菌种，用于食用菌栽培接种菌种或4℃和常温保存后再使用。
本发明的有益效果是：与采用固态发酵法生产木屑种生产周期（通常30d以上）相比，固定化菌种生产周期仅为5-7d，生产周期缩短极为明显；本发明采用玉米芯为食用菌细胞的固定化材料，易于大量获得，成本极低，可显著降低菌种生产成本；本发明生产的固定化菌种应用于食用菌栽培，接种操作方便，降低劳动成本；本发明的固定化菌种使用中可降低菌包杂菌污染率；本发明方法可实现定量化接种，提高接种精度，因而提高食用菌生长和出菇的同步性，便于科学管理；与木屑种相比，本发明的固定化菌种可缩短发菌周期2-5d，提高生产效率。本发明具有极大的应用和推广价值。
具体实施方式
本发明提供了一种以玉米芯为载体，利用液体培养自然吸附技术生产食用菌固定化菌种及其栽培方法，下面实施例来进一步描述本发明的使用方法，但这些实施例仅是规范性的，并不对本发明的范围构成任何限制。此外，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换仍在本发明保护范围。
实施例1
平菇玉米芯块固定化菌种生产制备及栽培应用
1、将干燥、去籽玉米芯轴向垂直横向切割，控制其厚度为1cm；每一短柱状切片进一步对称切为4个均一性块状物；
2、每20玉米芯块放置于250ml摇瓶，分装入100ml发酵培养基，配方（每升）为葡萄糖35g、蛋白胨5g、酵母粉4g、磷酸二氢钾1.0g、硫酸镁0.5g；胶塞封口，121℃灭菌30min；
3、培养基冷却后无菌条件下接入10ml经均质处理的液体菌种。其制备方法为：将斜面平菇菌种转管至新鲜斜面培养基，25℃培养7d进行活化；活化后的菌种用接种耙捣碎，以每支管1/2的菌种量接种至装有80ml发酵培养基（其配方同上）的250ml摇瓶，28℃培养5-7d，即为液体菌种，采用研磨、均质机进行均质或超声波破碎均质。
4、接种的摇瓶150rev/min、30℃培养5d，培养过程中平菇菌丝体吸附至玉米芯块表面并大量生长，达到平菇菌丝的固定化；
5、无菌纱布过滤收集发酵培养基中表面吸附大量平菇菌丝体的玉米芯块，即为平菇固定化菌种；
6、将平菇固定化菌种接种于灭菌的菌包培养料表面（每一菌包接种一块固定化菌种）。菌包对折径规格为17cm×33cm，装料量为750g，配方为60%棉籽壳、20%木屑、18%麸皮、2%石膏，调含水量为63%。
7、菌包放置菇棚并暗培养，温度保持在20℃，相对湿度70%，每2天通风一次；
8、菌包菌丝吃料完全后(约34d)开袋并提供光照1000lux，温度控制在15℃，每天早晚喷水，共2次，每天通风3次诱导原基形成和子实体生长；
9、子实体菇盖长至近平展时采收，采收一潮菇，称重,计算生物转化率。
与利用木屑种栽培相比，本发明固定化菌种菌种制备时间缩短25d(本发明的固定化菌种生产时间仅为5d，木屑种通常需30d)；固定化菌种走菌时间缩短3d（本发明固定化菌种走菌时间为34d，木屑种为37d）；固定化菌种生物转化率为66%,木屑种为62%；栽培中固定化菌种接种方便，降低劳动成本；相同菌种体积下固定化菌种接种菌包数为木屑种的3-5倍。本发明利用玉米芯生产固定化菌种，不需要使用木屑，可避免对森林的破坏。
实施例2
玉米芯块为载体的杏鲍菇固定化菌种生产及其栽培应用
1、将干燥、去籽玉米芯轴向垂直横向切割，控制其厚度为1cm；每一短柱状切片进一步对称切为4个均一性块状物；
2、每20玉米芯块放置于250ml摇瓶，分装入100ml发酵培养基，配方（每升）为葡萄糖35g、蛋白胨5g、玉米粉4g、磷酸二氢钾1.0g、硫酸镁0.5g；
胶塞封口，121℃灭菌30min；
3、培养基冷却后无菌条件下接入5ml经均质处理（研磨、均质机或超声波破碎）的液体菌种。其制备方法为：将斜面杏鲍菇菌种转管至新鲜斜面，25℃培养7d进行活化；活化后的菌种接种耙捣碎，以每支管1/2的菌种量接种至装有80ml发酵培养基（其配方同上）的250ml摇瓶，30℃培养7d，即为液体菌种，采用研磨、均质机进行均质或超声波破碎均质。
4、摇瓶150rev/min、30℃培养5d，培养过程均质化的杏鲍菇菌丝吸附至玉米芯块表面并大量生长，达到杏鲍菇菌丝固定化；
5、无菌纱布过滤收集发酵培养基中表面吸附大量杏鲍菇菌丝体的玉米芯块，即为杏鲍菇固定化菌种；
6、将杏鲍菇固定化菌种接种于灭菌的菌包培养料表面（每一菌包接种一块固定化菌种）。菌包对折径规格为17cm×33cm，装料量为750g，配方为60%棉籽壳、15%木屑、18%麸皮、5%玉米粉、2%石膏，调含水量为63%。
7、菌包放置菇房并暗培养，温度保持在25℃，相对湿度70%，并适当通风；
8、菌包菌丝吃料完全后(约28d)开袋并提供光照800lux，温度控制在15℃，湿度90%，co2浓度低于0.1%,诱导原基形成和子实体生长；
9、子实体菇盖长至近平展时采收，采收一潮菇，称重,计算生物转化率。
与利用木屑种栽培相比，本发明的固定化菌种菌种制备时间缩短25d(本发明的固定化菌种生产时间仅为5d，木屑种通常需30d)；固定化菌种走菌时间缩短2d（本发明固定化菌种走菌时间为28d，木屑种为30d）；固定化菌种生物转化率为46%,木屑种为44%；栽培中过程固定化菌种接种方便，人工接种效率提高3倍以上；相同菌种体积下，本发明的固定化菌种接种菌包数为木屑种的3-5倍。