本发明涉及一种香樟组织培养繁殖方法，属于林木组培繁育技术领域。
背景技术：
香樟(cinnamomumcamphora(l.)presl)为亚洲东部亚热带常绿阔叶林的代表树种，主要分布在我国台湾省和长江以南数省，为我国南方地区珍贵的多用途乡土经济树种，是国家二级重点保护野生植物。香樟枝干圆浑，冠大荫浓，叶色丰富，在美化环境的同时，还有绿化、香化环境的功能，具备隔音、驱虫、净化空气等诸多生态功能，自古以来就是南方村庄、宅院、道路、水边最好的风水林和风景林树种，也是现代庭园观赏、城市绿化不可缺少的树种，市场前景广泛，推广价值极高。
目前，香樟主要采用三种方式育苗。一是实生育苗，这是当前香樟苗木培育的主要方式。但实生育苗存在季节性强、难以保留优良性状等缺点。二是扦插育苗，但需要较多采穗母株，同时扦插受环境条件的影响较大，生根效果难稳定。三是组培技术。组培技术最适用于母本材料有限时进行快速扩繁的技术。然而，由于香樟植物的自身特点，在常规组培过程中仍存在芽诱导率低下、继代增殖培养中茎段容易褐化、组培苗瘦弱、移栽成活率低等困难，这些都是香樟产业化推广应用难度较大的重要原因。本发明针对上述研究中存在的困难，首次采用经发明人改进的dcr培养基和ms培养相结合，通过改进dcr培养基元素含量、调节植物激素水平、增加活性炭、调控温度光照、增加壮苗培养等措施，发明了一种芽诱导率高达98％以上，增殖系数平均为4.8，褐化率小于3.2％、壮苗率(高3cm以上)81％以上，并且移栽成活率达到87％以上的香樟组培体系，满足市场对香樟的大量需求。
技术实现要素：
本发明提供一种香樟茎段的组培繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)外植体材料的消毒：取当年生嫩枝梢10-15cm消毒；
2)芽的诱导：将消毒好的材料剪段，每段带有1-2个腋芽，接种到初始培养基ms中，经过10-20天培养，腋芽萌动并长出新芽；
3)芽的分化：将长出的小芽接种在分化培养基上，培养20天左右；
4)芽的增殖：待芽苗形成丛生芽后，将新芽分割成单株接种到增殖培养基中继代培养，至芽的增殖系数平均为4.8；褐化率小于3.2％；
5)壮苗培养：将得到的不定芽置于壮苗培养基中培养10-20天，至高3cm以上的壮苗比率为81％以上；
6)生根诱导：将所述壮苗接种到生根培养基中，培养10天左右，生根率高达98％以上，待根长2cm、叶片3-5枚进行炼苗与移栽；
7)炼苗与移栽：将组培苗置于70％遮荫的大棚中炼苗7-10天，移栽至基质中；
其中所述步骤3)中所述分化培养基是以改进dcr培养基为基础，添加植物激素6-ba1.0mg/l、naa0.1mg/l；
所述改进dcr培养基的组成及其含量为：nh4no3：400mg/l、kno3：340mg/l、ca(no3)2·4h2o：278mg/l、kh2po4：170mg/l、mgso4·7h2o：370mg/l、cacl2·2h2o：42.5mg/l、h3bo4：6.2mg/l、mnso4·4h2o：22.3mg/l、znso4·7h2o：8.6mg/l、cuso4·5h2o：0.25mg/l、ki：0.83mg/l、cocl2·6h2o：0.025mg/l、nicl2：0.025mg/l、na2moo4·2h2o：0.25mg/l、feso4·7h2o：27.8mg/l、na2-edta：37.3mg/l、vb1：1.0mg/l、vb6：0.5mg/l、vb3：0.5mg/l、甘氨酸：2.0mg/l、肌醇：200mg/l、蔗糖：30g/l、琼脂：6g/l。
在一个实施方案中，还包括以下步骤，
8)移栽后置于小型塑料薄膜拱棚，并盖实，7天后逐渐打开，半个月后全部打开，待长出新叶后进行正常水肥管理
在一个优选实施方案中，在步骤2)中，培养温度为24-26℃，光照强度为1800-2000lx，光照为每天14-16h。
在一个优选实施方案中，在步骤3)中，培养温度为24-26℃，光照强度为1800-2000lx，光照为每天12-14h。
在一个优选实施方案中，在步骤4)中，所用增殖培养基为改进dcr培养基为基础添加6-ba1.5-2.5mg/l、naa0.1-0.5mg/l、活性炭0.5g/l。
在一个优选实施方案中，在步骤5)中，所用壮苗培养基为ms培养基为基础，添加6-ba1.5-2.5mg/l、iaa0.1mg/l、活性炭1g/l。
在一个优选实施方案中，在步骤6)中，生根培养基为1/2ms培养基为基础，添加naa0.25-0.35mg/l、活性炭2g/l；。
在一个优选实施方案中，在步骤6)中，培养温度为24-26℃，光照强度为2000-2200lx，光照为每天10-12h。
在一个优选实施方案中，在步骤7)中，所述基质由混合比1：1：3得细河沙：泥炭土：黄心土构成。
本发明所用的ms培养基的组成及其含量为：nh4no3：1650mg/l、kno3：1900mg/l、cacl2·2h2o：440mg/l、mgso4·7h2o：370mg/l、kh2po4：170mg/l、ki：0.83mg/l、h3bo3：6.2mg/l、mnso4·4h2o：22.3mg/l、znso4·7h2o：8.6mg/l、na2moo4·2h2o：0.25mg/l、cuso4·5h2o：0.025mg/l、cocl2·6h2o：0.025mg/l、feso4·7h2o：27.85mg/l、na2-edta·2h2o：37.25mg/l、肌醇：100mg/l、烟酸：0.5mg/l、vb6：0.5mg/l、vb1：0.1mg/l、甘氨酸：2.0mg/l、蔗糖：30g/l、琼脂：7g/l。
有益效果
本项组培快繁方法，是首次采用改进dcr培养基和ms培养相结合的香樟组培技术，能提供一种芽诱导率高、增殖系数高、壮苗率高、移栽成活率高的香樟组培快繁体系，有效解决香樟的快速规模化育苗问题，满足市场对香樟的大量需求。
具体实施方式
根据下述实例实施，可以更好的理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例
按照以下步骤进行育苗：
1.外植体材料的消毒：取香樟当年生嫩枝梢10-15cm，自来水清洗后去掉叶片，用洗衣粉液浸泡5-10min后，用自来水冲洗干净；将清洗干净的材料在无菌操净台上用70％酒精浸泡30s，无菌水洗3遍；再用0.1％升汞消毒8-10min，无菌水冲洗3-5次。
2.芽的诱导：将消毒好的材料剪段，每段带有1-2个腋芽，接种到初始培养基ms中；经过10-20d的培养，腋芽萌动并长出新芽，芽的诱导率高达98％以上；培养温度为24-26℃，光照强度为1800-2000lx，光照为每天14-16h。
3.芽的分化：将长出的小芽接种在分化培养基上，培养20d左右芽苗分化率达95％；分化培养基以改进dcr培养基为基础，添加植物激素6-ba1.0mg/l、naa0.1mg/l；培养温度为24-26℃，光照强度为1800-2000lx，光照为每天12-14h。
4.芽的增殖：待芽苗形成丛生芽后，将新芽分割成单株接种到增殖培养基中继代培养，芽的增殖系数平均为4.8，最高可达到6以上；褐化率小于3.2％；所用增殖培养基为改进dcr培养基+6-ba1.5-2.5mg/l、naa0.1-0.5mg/l、活性炭0.5g/l。
5.壮苗培养：将得到的不定芽置于壮苗培养基中培养10-20d，所得壮苗(高3cm以上)比率为81％以上；所用培养基为ms+6-ba1.5-2.5mg/l、iaa0.1mg/l、活性炭1g/l；培养温度为24-26℃，光照强度为1800-2000lx，光照为每天12-14h。
6.生根诱导：当芽苗长至3cm高时即可接种到生根培养基中，10d左右开始生根，生根率高达98％以上；生根培养基为1/2ms+naa0.25-0.35mg/l、活性炭2g/l；待根长2cm、叶片3-5枚即可炼苗移栽；培养温度为24-26℃，光照强度为2000-2200lx，光照为每天10-12h。
7.炼苗与移栽：将组培苗置于70％遮荫的大棚中炼苗7-10d，洗净根部的培养基，移栽至经0.1％高锰酸钾溶液消毒的基质中，基质的混合比为细河沙：泥炭土：黄心土＝1：1：3。移栽时根系要舒展，压实，根和基质密切接触。
8.移栽后置于小型塑料薄膜拱棚，并盖实，7d后逐渐打开，半个月后全部打开，待长出新叶后进行正常水肥管理，移栽成活率达到87％以上。
本发明的组培繁殖方法与见诸在先报道(叶润燕,童再康,张俊红,等，樟树茎段组培快繁[j]，浙江农林大学学报,2016,33(1):177-182；周丽华,蔡燕灵,曾令海,等，樟树优良家系的组培育苗技术研究[j]，热带作物学报,2013,34(1):67-73；龚峥,周丽华,张卫华,等，樟树组织培养快繁育苗技术研究[j]，广东林业科技,2007,23(5):35-39；唐国涛,张汉永,朱昔娇,等，樟树组织培养试验[j]，福建林业科技,2013,40(2):70-72.)的常规组培方法的技术指标对比如下：
表1本发明与常规组培技术指标比较