一种猴头菌培养基质及使用该基质发酵培养猴头菌菌质的方法与流程

文档序号:16774889发布日期:2019-02-01 18:39阅读:408来源:国知局

本发明涉及一种基质及使用该基质发酵培养菌质的方法,尤其涉及一种猴头菌培养基质及使用该基质发酵培养猴头菌菌质的方法。



背景技术:

猴头菌是一种已经现代医学和药理学证实的珍稀药食两用菌。20世纪60年代,国内制药科技工作者借鉴古代“制曲工艺”采用“固体培养”方式用碎甘蔗渣、麦麸等培养猴头菌约40d产生大量菌丝体,得到“猴头菌丝体培养物”,将其掏出瓶干燥后作为药材,再经成分提取,药渣过滤去除后浓缩得浸膏制成猴头菌药品,但因其需要提取有效成分且废弃培养基质产生的无效“菌糠”才能应用而饱受争议。七八十年代,经人工驯化,用木屑、棉子壳栽培及猴头菌液态深层发酵相继获得成功。但人工栽培获取子实体工序繁多、周期很长、成本较高,还受很多自然和栽培环境条件的限制和影响;液体发酵生产菌丝体虽然培育时间短,菌丝与多糖产量可以控制,且不受外界环境因素影响,但其保质保量生产条件要求苛刻,容易出现污染,投资大,生产成本高,且液态环境造成许多重要的生理活性物质均无法生成,导致菌丝体与子实体在功效方面形成差异。自80年代固体培养演变为固体发酵生产真菌药物以来,利用固体发酵生产菌质为健康食品、功能食品或医药产品提供原料日益受到行业研发重视并应用。张沿江等在猴头菌的药用功能及其菌丝粉冲剂的制作研究中将谷粒、小米、麦粒、玉米渣等原料经去杂,淘洗,浸泡,水煮,晾晒,加食用石膏,拌匀,装袋(或专用菌种瓶),灭菌,接液体菌种(或接米粒菌种并压实),控温控湿遮光养菌,满袋再养7~10天,烘干备用。试验证明单一谷粒、小米、麦粒、玉米渣等原料加食用石膏培养猴头菌菌丝生长速度较慢,密度较稀疏、长势较弱,基质内部菌质很少。究其原因可能是培养基浸泡、灭菌渗出供菌丝生长初期快速利用的碳氮等营养不足,只有靠菌丝细胞产生酶分解固体基质后才能摄取营养、生长菌体,而且采用单一基质形成的粒间空隙比较小,从而影响了猴头菌菌丝的生长密度、速度和长势。其二是基质原料需加热水煮,煮后还要晾晒,这既麻烦又增加用工量还耗能不利于规模化生产。其三就是控温控湿养菌耗能高、成本高。第四是满袋再养7~10天烘用是否最佳选择有待验证。



技术实现要素:

本发明的目的在于克服现有技术的不足,提供一种免煮、免晾晒、菌质菌丝体及次生代谢物质含量高、能源消耗低的猴头菌培养基质以及使用该基质发酵培养猴头菌菌质的方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的:

一种猴头菌培养基质,包括以下重量份的成分:

苡仁和\或麦粒76~88份;

麦麸10~20份;

葡萄糖2~4份。

优选的,所述的苡仁为炒制苡仁。

优选的,所述的葡萄糖为食用葡萄糖。

优选的,猴头菌培养基质还包括炒制山药、炒制白扁豆、茯苓和莲子。

一种使用猴头菌培养基质发酵培养猴头菌菌质的方法,包括以下步骤:

s1、猴头菌培养基质的配制包括以下步骤:

s11、浸泡,将苡仁和\或麦粒作为主料,并按重量比为主料∶水=1.0∶1.5~2.0将主料放入100℃的水中进行浸泡,当每100千克主料吸水后重量达到170~180千克时停止浸泡,然后将主料清洗、捞出并滤至水流成滴后倒入拌料容器;

s12、拌料、装瓶,将麦麸和葡萄糖混匀后倒入盛有主料的拌料容器中,并将猴头菌培养基质的含水量控制在42~46%之间,然后装入组培瓶中,盖带膜透气孔盖;

s13、灭菌,以0.15~0.16mpa对组培瓶内含水量42~46%的猴头菌培养基质进行高压灭菌;

s2、猴头菌菌质的发酵培养包括以下步骤:

s21、接种,待组培瓶内温度低于30℃时,在无菌条件下先将组培瓶内猴头菌培养基质振摇松散,然后接入经摇瓶培养的麦粒原种;

s22、发酵培养,接种后,将组培瓶搬入培养室,遮光静置室温培养,室温在6~30℃之内,当猴头菌菌丝长满组培瓶内基质后,再采用50~400lx的弱光自然发酵培养2~3周(室温高低决定培养时间长短);

s23、烘干,打开组培瓶取出发酵培养所得猴头菌菌质,将菌质散开并烘干备用。

优选的,步骤s11还包括一个主料预处理步骤:将苡仁和\或麦粒作为主料放入盛有适量清水的容器,搅拌3~5分钟,捞起飘浮杂质,滤出主料,将滤出的主料放入保温容器中。

优选的,所述的组培瓶为380ml的植物组培瓶,每个植物组培瓶内装入130±1g猴头菌培养基质。

优选的,步骤s13中灭菌时长为2h。

优选的,步骤s23中采用烘箱进行烘干,烘干温度为50~60℃。

优选的,步骤s21中每个组培瓶中接入的麦粒原种粒数相同。

本发明的有益效果是:

1)本猴头菌培养基质除了用传统培养基选用的麦粒等营养物质外,还配比加入了c/n比很适合猴头菌营养生长的麦麸和速效碳源食用葡萄糖,使得猴头菌菌丝生长更快、长势更旺、更浓白,另外加入了营养价值高且具有健脾止泻功效的炒制苡仁,培养出的猴头菌菌质质量高,且多糖含量高。

2)培育的猴头菌菌质营养及功效成分更接近子实体:在猴头菌培养基质中,猴头菌在细胞产酶的作用下,对猴头菌进行分解并摄取其营养、生长自身菌体,同时会产生多种具有功效成分的次生代谢物质。而且,因为菌丝满瓶后弱光培养利于促进猴头菌生殖生长形成类子实体的“菌丝体”,从而提高菌质功效成分含量。

3)节能、降本:由于发酵养菌采用瓶内湿度自给,而且只要发酵养菌温度为自然室温,在6~30℃之内,就不用控制温湿度,因此节省了电能,减少了人工管理费,从而降低了生产成本。

4)产品纯天然0添加:发酵选用的原料全都是可以食用的食材,没有添加任何食品添加剂和无机化合物,发酵养菌也处于相对封闭的植物组培瓶内进行,所以生产产品绿色天然、干净卫生,可以作为健康食品、功能食品或药品的生产原料。

具体实施方式

下面将结合实施例,对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域技术人员在没有付出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。

本发明提供六种技术方案:

实施例一:

一种猴头菌培养基质,包括以下重量份的成分:

炒制苡仁76份;

麦麸20份;

食用葡萄糖4份。

一种使用所述猴头菌培养基质发酵培养猴头菌菌质的方法,包括以下步骤:

s1、猴头菌培养基质的配制包括以下步骤:

s11、浸泡,将优质炒制苡仁作为主料放入保温容器中,并按重量比为主料∶水=1.0∶2.0将100℃的水中加入保温容器中进行浸泡,当主料泡至充分吸水,每100千克主料吸水后重量达到178千克时停止浸泡,然后将主料清洗、捞出并滤至水流成滴后倒入拌料容器;

s12、拌料、装瓶,将麦麸和葡萄糖混匀后倒入盛有主料的拌料容器,通过称重折算,将猴头菌培养基质的含水量调节为44%后拌匀,然后装入组培瓶中,盖带膜透气孔盖,这样就可促进瓶内外气体交换,满足好氧猴头菌菌丝生长,此方法既能控制基质含水量,又可以减少工序和避免量大原料的蒸煮不便;

s13、灭菌,以0.15mpa对组培瓶内含水量44%的猴头菌培养基质进行高压灭菌2h;

s2、猴头菌菌质的发酵培养包括以下步骤:

s21、接种,待组培瓶内猴头菌培养基质温度低于30℃时,在无菌条件下先将组培瓶内猴头菌培养基质振摇松散,然后接入经摇瓶培养的麦粒原种,此操作给好氧猴头菌菌丝营造了良好的生长空隙,有利于菌丝在基质内部生长,增加菌质菌丝含量;

s22、发酵培养,接种后,将组培瓶搬入培养室,遮光静置室温培养,室温为6℃,当猴头菌菌丝长满组培瓶内基质后,再采用100lx的弱光自然发酵培养3周,这种养菌方式既不影响猴头菌菌丝生长,还能大幅度降低能源消耗,更理想的是后期弱光培养还可以获得类子实体的猴头菌“菌丝体”;

s23、烘干,打开组培瓶取出发酵后培养所得猴头菌菌质,将菌质散开并采用烘箱进行烘干,烘干温度为50℃。

进一步的,步骤s11还包括一个主料预处理步骤:将炒制苡仁作为主料倒入盛有适量清水的容器,搅拌3分钟,捞起飘浮杂质,滤出主料,将滤出的主料放入保温容器中。

进一步的,所述的组培瓶为380ml的植物组培瓶,每个植物组培瓶内装入131g猴头菌培养基质。

进一步的,步骤s21中每个组培瓶中接入的麦粒原种粒数相同,为争取各瓶菌丝生长尽可能一致,方便管理。

实施例二:

一种猴头菌培养基质,包括以下重量份的成分:

麦粒88份;

麦麸10份;

食用葡萄糖2份。

一种使用所述猴头菌培养基质发酵培养猴头菌菌质的方法,包括以下步骤:

s1、猴头菌培养基质的配制包括以下步骤:

s11、浸泡,将麦粒作为主料放入保温容器中,并按重量比为主料∶水=1.0∶1.5将100℃的水中加入保温容器中进行浸泡,当主料泡至充分吸水,每100千克主料吸水后重量达到170千克时停止浸泡,然后将主料清洗、捞出并滤至水流成滴后倒入拌料容器;

s12、拌料、装瓶,将麦麸和葡萄糖混匀后倒入盛有主料的拌料容器,通过称重折算,将猴头菌培养基质的含水量调节为42%后拌匀,然后装入组培瓶中,盖带膜透气孔盖,这样就可促进瓶内外气体交换,满足好氧猴头菌菌丝生长,此方法既能控制基质含水量,又可以减少工序和避免量大原料的蒸煮不便;

s13、灭菌,以0.15mpa对组培瓶内含水量42%的猴头菌培养基质进行高压灭菌2h;

s2、猴头菌菌质的发酵培养包括以下步骤:

s21、接种,待组培瓶内猴头菌培养基质温度低于30℃时,在无菌条件下先将组培瓶内猴头菌培养基质振摇松散,然后接入经摇瓶培养的麦粒原种,此操作给好氧猴头菌菌丝营造了良好的生长空隙,有利于菌丝在基质内部生长,增加菌质菌丝含量;

s22、发酵培养,接种后,将组培瓶搬入培养室,遮光静置室温培养,室温为18℃,当猴头菌菌丝长满组培瓶内基质后,再采用150lx的弱光自然发酵培养18天,这种养菌方式既不影响猴头菌菌丝生长,还能大幅度降低能源消耗,更理想的是后期弱光培养还可以获得类子实体的猴头菌“菌丝体”;

s23、烘干,打开组培瓶取出发酵后培养所得猴头菌菌质,将菌质散开并采用烘箱进行烘干,烘干温度为60℃。

进一步的,步骤s11还包括一个主料预处理步骤:将麦粒作为主料倒入盛有适量清水的容器,搅拌5分钟,捞起飘浮杂质,滤出主料,将滤出的主料放入保温容器中。

进一步的,所述的组培瓶为380ml的植物组培瓶,每个植物组培瓶内装入129g猴头菌培养基质。

进一步的,步骤s21中每个组培瓶中接入的麦粒原种粒数相同,为争取各瓶菌丝生长尽可能一致,方便管理。

实施例三:

一种猴头菌培养基质,包括以下重量份的成分:

炒制苡仁和麦粒84份;

麦麸13份;

食用葡萄糖3份。

一种使用所述猴头菌培养基质发酵培养猴头菌菌质的方法,包括以下步骤:

s1、猴头菌培养基质的配制包括以下步骤:

s11、浸泡,将优质炒制苡仁和麦粒作为主料放入保温容器中,并按重量比为主料∶水=1.0∶1.8将100℃的水中加入保温容器中进行浸泡,当主料泡至充分吸水,每100千克主料吸水后重量达到176千克时停止浸泡,然后将主料清洗、捞出并滤至水流成滴后倒入拌料容器;

s12、拌料、装瓶,将麦麸和葡萄糖混匀后倒入盛有主料的拌料容器,通过称重折算,将猴头菌培养基质的含水量调节为43%后拌匀,然后装入组培瓶中,盖带膜透气孔盖,这样就可促进瓶内外气体交换,满足好氧猴头菌菌丝生长,此方法既能控制基质含水量,又可以减少工序和避免量大原料的蒸煮不便;

s13、灭菌,以0.16mpa对组培瓶内含水量43%的猴头菌培养基质进行高压灭菌2h;

s2、猴头菌菌质的发酵培养包括以下步骤:

s21、接种,待组培瓶内猴头菌培养基质温度低于30℃时,在无菌条件下先将组培瓶内猴头菌培养基质振摇松散,然后接入经摇瓶培养的麦粒原种,此操作给好氧猴头菌菌丝营造了良好的生长空隙,有利于菌丝在基质内部生长,增加菌质菌丝含量;

s22、发酵培养,接种后,将组培瓶搬入培养室,遮光静置室温培养,室温为23℃,当猴头菌菌丝长满组培瓶内基质后,再采用200lx的弱光自然发酵培养16天,这种养菌方式既不影响猴头菌菌丝生长,还能大幅度降低能源消耗,更理想的是后期弱光培养还可以获得类子实体的猴头菌“菌丝体”;

s23、烘干,打开组培瓶取出发酵后培养所得猴头菌菌质,将菌质散开并采用烘箱进行烘干,烘干温度为55℃。

进一步的,步骤s11还包括一个主料预处理步骤:将炒制苡仁和麦粒作为主料倒入盛有适量清水的容器,搅拌4分钟,捞起飘浮杂质,滤出主料,将滤出的主料放入保温容器中。

进一步的,所述的组培瓶为380ml的植物组培瓶,每个植物组培瓶内装入130g猴头菌培养基质。

进一步的,步骤s21中每个组培瓶中接入的麦粒原种粒数相同,为争取各瓶菌丝生长尽可能一致,方便管理。

实施例四:

一种猴头菌培养基质,包括以下重量份的成分:

炒制苡仁760g;

麦麸200g;

食用葡萄糖40g。

一种使用所述猴头菌培养基质发酵培养猴头菌菌质的方法,包括以下步骤:

s1、猴头菌培养基质的配制包括以下步骤:

s11、浸泡,将优质炒制苡仁作为主料放入保温容器中,并按重量比为主料∶水=1.0∶2.0将100℃的水中加入保温容器中进行浸泡,当主料泡至充分吸水,每100千克主料吸水后重量达到178千克时停止浸泡,然后将主料清洗、捞出并滤至水流成滴后倒入拌料容器;

s12、拌料、装瓶,将麦麸和葡萄糖混匀后倒入盛有主料的拌料容器,通过称重折算,将猴头菌培养基质的含水量调节为44%后拌匀,然后装入组培瓶中,盖带膜透气孔盖,这样就可促进瓶内外气体交换,满足好氧猴头菌菌丝生长,此方法既能控制基质含水量,又可以减少工序和避免量大原料的蒸煮不便;

s13、灭菌,以0.15mpa对组培瓶内含水量44%的猴头菌培养基质进行高压灭菌2h;

s2、猴头菌菌质的发酵培养包括以下步骤:

s21、接种,待组培瓶内猴头菌培养基质温度低于30℃时,在无菌条件下先将组培瓶内猴头菌培养基质振摇松散,然后接入经摇瓶培养的麦粒原种,此操作给好氧猴头菌菌丝营造了良好的生长空隙,有利于菌丝在基质内部生长,增加菌质菌丝含量;

s22、发酵培养,接种后,将组培瓶搬入培养室,遮光静置室温培养,室温为6℃,当猴头菌菌丝长满组培瓶内基质后,再采用100lx的弱光自然发酵培养3周,这种养菌方式既不影响猴头菌菌丝生长,还能大幅度降低能源消耗,更理想的是后期弱光培养还可以获得类子实体的猴头菌“菌丝体”;

s23、烘干,打开组培瓶取出发酵后培养所得猴头菌菌质,将菌质散开并采用烘箱进行烘干,烘干温度为50℃。

进一步的,步骤s11还包括一个主料预处理步骤:将炒制苡仁作为主料倒入盛有适量清水的容器,搅拌3分钟,捞起飘浮杂质,滤出主料,将滤出的主料放入保温容器中。

进一步的,所述的组培瓶为380ml的植物组培瓶,每个植物组培瓶内装入131g猴头菌培养基质。

进一步的,步骤s21中每个组培瓶中接入的麦粒原种粒数相同,为争取各瓶菌丝生长尽可能一致,方便管理。

实施例五:

一种猴头菌培养基质,包括以下重量份的成分:

麦粒880g;

麦麸100g;

食用葡萄糖20g。

一种使用所述猴头菌培养基质发酵培养猴头菌菌质的方法,包括以下步骤:

s1、猴头菌培养基质的配制包括以下步骤:

s11、浸泡,将麦粒作为主料放入保温容器中,并按重量比为主料∶水=1.0∶1.5将100℃的水中加入保温容器中进行浸泡,当主料泡至充分吸水,每100千克主料吸水后重量达到170千克时停止浸泡,然后将主料清洗、捞出并滤至水流成滴后倒入拌料容器;

s12、拌料、装瓶,将麦麸和葡萄糖混匀后倒入盛有主料的拌料容器,通过称重折算,将猴头菌培养基质的含水量调节为42%后拌匀,然后装入组培瓶中,盖带膜透气孔盖,这样就可促进瓶内外气体交换,满足好氧猴头菌菌丝生长,此方法既能控制基质含水量,又可以减少工序和避免量大原料的蒸煮不便;

s13、灭菌,以0.15mpa对组培瓶内含水量42%的猴头菌培养基质进行高压灭菌2h;

s2、猴头菌菌质的发酵培养包括以下步骤:

s21、接种,待组培瓶内猴头菌培养基质温度低于30℃时,在无菌条件下先将组培瓶内猴头菌培养基质振摇松散,然后接入经摇瓶培养的麦粒原种,此操作给好氧猴头菌菌丝营造了良好的生长空隙,有利于菌丝在基质内部生长,增加菌质菌丝含量;

s22、发酵培养,接种后,将组培瓶搬入培养室,遮光静置室温培养,室温为18℃,当猴头菌菌丝长满组培瓶内基质后,再采用150lx的弱光自然发酵培养18天,这种养菌方式既不影响猴头菌菌丝生长,还能大幅度降低能源消耗,更理想的是后期弱光培养还可以获得类子实体的猴头菌“菌丝体”;

s23、烘干,打开组培瓶取出发酵后培养所得猴头菌菌质,将菌质散开并采用烘箱进行烘干,烘干温度为60℃。

进一步的,步骤s11还包括一个主料预处理步骤:将麦粒作为主料倒入盛有适量清水的容器,搅拌5分钟,捞起飘浮杂质,滤出主料,将滤出的主料放入保温容器中。

进一步的,所述的组培瓶为380ml的植物组培瓶,每个植物组培瓶内装入129g猴头菌培养基质。

进一步的,步骤s21中每个组培瓶中接入的麦粒原种粒数相同,为争取各瓶菌丝生长尽可能一致,方便管理。

实施例六:

一种猴头菌培养基质,包括以下重量份的成分:

炒制苡仁和麦粒800g;

麦麸150g;

食用葡萄糖35g。

一种使用所述猴头菌培养基质发酵培养猴头菌菌质的方法,包括以下步骤:

s1、猴头菌培养基质的配制包括以下步骤:

s11、浸泡,将优质炒制苡仁和麦粒作为主料放入保温容器中,并按重量比为主料∶水=1.0∶1.6将100℃的水中加入保温容器中进行浸泡,当主料泡至充分吸水,每100千克主料吸水后重量达到180千克时停止浸泡,然后将主料清洗、捞出并滤至水流成滴后倒入拌料容器;

s12、拌料、装瓶,将麦麸和葡萄糖混匀后倒入盛有主料的拌料容器,通过称重折算,将猴头菌培养基质的含水量调节为46%后拌匀,然后装入组培瓶中,盖带膜透气孔盖,这样就可促进瓶内外气体交换,满足好氧猴头菌菌丝生长,此方法既能控制基质含水量,又可以减少工序和避免量大原料的蒸煮不便;

s13、灭菌,以0.15mpa对组培瓶内含水量46%的猴头菌培养基质进行高压灭菌2h;

s2、猴头菌菌质的发酵培养包括以下步骤:

s21、接种,待组培瓶内猴头菌培养基质温度低于30℃时,在无菌条件下先将组培瓶内猴头菌培养基质振摇松散,然后接入经摇瓶培养的麦粒原种,此操作给好氧猴头菌菌丝营造了良好的生长空隙,有利于菌丝在基质内部生长,增加菌质菌丝含量;

s22、发酵培养,接种后,将组培瓶搬入培养室,遮光静置室温培养,室温为30℃,当猴头菌菌丝长满组培瓶内基质后,再采用400lx的弱光自然发酵培养2周,这种养菌方式既不影响猴头菌菌丝生长,还能大幅度降低能源消耗,更理想的是后期弱光培养还可以获得类子实体的猴头菌“菌丝体”;

s23、烘干,打开组培瓶取出发酵后培养所得猴头菌菌质,将菌质散开并采用烘箱进行烘干,烘干温度为58℃。

进一步的,步骤s11还包括一个主料预处理步骤:将炒制苡仁和麦粒作为主料倒入盛有适量清水的容器,搅拌3分钟,捞起飘浮杂质,滤出主料,将滤出的主料放入保温容器中。

进一步的,所述的组培瓶为380ml的植物组培瓶,每个植物组培瓶内装入129g猴头菌培养基质。

进一步的,步骤s21中每个组培瓶中接入的麦粒原种粒数相同,为争取各瓶菌丝生长尽可能一致,方便管理。

以上实施例中,主料泡好后清洗并捞出,滤至水流变成水滴后3分钟左右倒入拌料容器,将麦麸和葡萄糖混匀后倒入,称重,折算,调节含水量至45%左右后拌匀。采用免煮、免晾晒技术,既能控制基质含水量,又可以减少工序和避免量大原料的蒸煮不便。

优选的,实施例六中猴头菌培养基质还包括94g炒制山药、94g炒制白扁豆、94g茯苓、94g莲子。

山药又称薯蓣、土薯、山薯蓣、怀山药、淮山、白山药,是《中华本草》收载的草药,药用来源为薯蓣科植物山药干燥根茎。山药具有滋养强壮,助消化,敛虚汗,止泻之功效,主治脾虚腹泻、肺虚咳嗽、消化不良。炒制山药加强了山药的健脾益胃等功能。

白扁豆味甘,性微温,有健脾化湿,利尿消肿,清肝明目等功效。卫生部药典委员会编的《中国药典》也说:白扁豆“健脾胃,清暑湿”。炒制白扁豆增强了白扁豆的健脾止泻功效。

茯苓,为多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核。用于水肿尿少,痰饮眩悸,脾虚食少,便溏泄泻,心神不安,惊悸失眠。

莲子,为睡莲科植物莲的干燥成熟种子。具有补脾止泻,养心安神之功效。

苡仁,为禾本科植物薏苡的干燥成熟种仁,有利水渗湿,健脾止泻,除痹,排脓,解毒散结的作用。炒制苡仁有助苡仁发挥健脾止泻之功效,减少了苡仁的刺激性。

在实施例六猴头菌培养基质中加入炒制山药、炒制白扁豆、茯苓、莲子、苡仁和\或麦粒、麦麸、葡萄糖,发酵培养出来的猴头菌菌质具有一定的健脾胃、利湿止泻等保健功效。

以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式,不应看作是对其他实施例的排除,而可用于各种其他组合、修改和环境,并能够在本文所述构想范围内,通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围,则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。

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