基于仔稚鱼体氨基酸平衡的轮虫卤虫氨基酸强化法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种基于仔稚鱼体氨基酸平衡的轮虫卤虫氨基酸强化法，具体说是依据仔稚鱼体氨基酸组成来调节轮虫、卤虫等体内的氨基酸平衡，使其接近所培育仔稚鱼的体氨基酸组成，从而解决由于仔稚鱼生物饵料氨基酸不平衡导致的生长阻滞现象，发挥仔稚鱼生长的最大潜力。属于水产养殖饲料加工技术领域。
【背景技术】
[0002]鲆鲽鱼类的仔稚鱼在发育过程中一般要经历卵黄囊期、开口期以及变态期等几个重要的时期，在这期间仔鱼的消化功能虽然较弱，但是已经具备一定的代谢吸收能力，表现为转运载体的出现、代谢酶活的提高以及肝脏的血管化等。就目前的实际养殖生产来讲，微粒子饲料在早期完全替代生物饵料还存在一系列难度，轮虫和卤虫仍是仔稚鱼培养过程中主要的天然饵料，负责提供给仔稚鱼早期发育所需的全部营养，其质量的优劣直接影响仔稚鱼的成活率和生长速度。为了增加轮虫和卤虫的营养价值，目前的做法主要是对轮虫卤虫进行DHA强化，这种强化方案主要是建立在前期对一些仔稚鱼对DHA需求研宄的基础上。然而无论卵是否含有油球，仔稚鱼从胚胎发育开始就对氨基酸表现出极大的依赖性，大部分的游离氨基酸在仔稚鱼期被消耗转化成能量或者聚合成为体蛋白，从而支持仔稚鱼的快速生长。近年来的一些研宄发现，轮虫和卤虫的氨基酸序列和仔稚鱼的体蛋白氨基酸序列相差较大，难以满足需求，从而导致某些氨基酸成为限制性氨基酸，该氨基酸的不足导致的“水桶效应”降低了对摄入的氨基酸的整体利用，使仔稚鱼的生长远低于最大生长潜力。使用藻类强化虽然能提高轮虫卤虫体游离氨基酸的含量，但是无法改变其整体氨基酸的平衡性。
[0003]目前生产中轮虫强化主要以脂肪酸DHA的强化较为重视，而忽视了各种氨基酸在仔稚鱼生长发育过程中的作用。通常采用的藻类强化轮虫卤虫的方法也无法解决氨基酸平衡的问题，因为藻类所含必需氨基酸一般与鱼体必需氨基酸组成相差较大。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于解决仔稚鱼培育中所使用的生物饵料的氨基酸不平衡情况，针对不同的鲆鲽类幼鱼的体氨基酸组成，提供一种平衡轮虫和卤虫氨基酸组成的工艺和方法，以促进仔稚鱼苗种的快速生长，提高苗种的成活率，减少非正常苗种的比例，减少死亡率。
[0005]本发明采用科学手段定向调控轮虫卤虫体内的限制性氨基酸含量，通过适当补充潜在的限制性氨基酸，使轮虫卤虫的体氨基酸组成接近于仔稚鱼的体氨基酸组成，从而提高各种氨基酸利用，最大程度的发挥仔稚鱼的生长潜力。
[0006]本发明是通过以下技术方案来实现的:
基于仔稚鱼体氨基酸平衡的轮虫卤虫氨基酸强化法，其特别之处在于，基于比较鲆鲽仔稚鱼体与活饵料的必需氨基酸组成的基础上，以所判定潜在的限制性氨基酸为氨基酸原料，采用直接强化法或脂质体包被氨基酸强化法，使限制性氨基酸在轮虫、卤虫体内积累，从而改变轮虫、卤虫氨基酸平衡状态，使其接近仔稚鱼体氨基酸组成，仔稚鱼摄食轮虫、卤虫后最大程度的保留利用所吸收的轮虫、卤虫整体氨基酸。
[0007]所述限制性氨基酸定义为:(惧料中某必需氨基酸A/E值-鱼体内某必需氨基酸A/E值)/ (鱼体某必需氨基酸A/E值)X 100,按其绝对值大小分别为潜在性第一限制性氨基酸、第二限制性氨基酸……。
[0008]所述必需氨基酸A/E值计算公式为:该必需氨基酸含量/总必需氨基酸量 XlOOo
[0009]具体方法如下:
将所育对象仔稚鱼与其所食饵料轮虫、卤虫的体必需氨基酸进行比对，当轮虫、卤虫体内的必需氨基酸A/E值比仔稚鱼体必需氨基酸A/E值低10%以上时，即认为它是潜在的限制性氨基酸，需要对其进行强化。
[0010]所述强化方法有直接强化法和脂质体包被氨基酸强化法。
[0011 ] 所述直接强化法操作步骤为:
在过滤海水中加入所需的限制性氨基酸，搅拌均匀，要求溶液中该氨基酸的浓度达到5.0-30.0mM，温度要求为25_30°C，然后加入轮虫或卤虫，并缓慢搅拌使其均匀分布，轮虫密度要求为300-400个/ml，卤虫密度要求为卤虫无节幼体100-200个/ml，对其进行强化孵育培养，在孵育培养的过程中充入空气并注意缓慢搅拌。经过强化孵育培养后，将强化后的轮虫或卤虫直接投到仔稚鱼的培育池中，供仔稚鱼食用。
[0012]所述孵育培养时间为16-19h。
[0013]经过强化后的轮虫、卤虫体内氨基酸的含量较未强化的轮虫卤虫高3倍以上，且在24h内仍具有较高的保留。
[0014]所述脂质体包被氨基酸强化法的操作步骤为:
I)将卵磷脂和胆固醇按质量比5:1~2 w/w配好后，溶于体积比为1.8-2.2:1 v/v的氯仿-甲醇溶液中，溶质与溶剂比例为1:8~15 w(g)/v(ml)，配制溶液，取一定量体积的此溶液放入圆底容器中。
[0015]2)将容器接入旋转蒸发仪中使其挥发，真空度控制在0.07-0.1 MPa,蒸发温度控制在35-40°C，70-90 r/min，持续40_60min，即可在容器内壁形成均匀的脂质膜。
[0016]3)将所需的单体氨基酸加入浓度为500-540mM的NaCl溶液中溶解，使其最终溶液中该氨基酸的浓度达到180-350mM，备用。
[0017]4)取步骤3)中配好的氨基酸溶液加入步骤2)完成的含有脂质膜的圆底容器中，氨基酸溶液与含有脂质膜液体的体积比为1:1~2，在35-40°C条件下缓慢摇动30-40min，形成脂质体初悬液，然后将脂质体初悬液通过薄膜脂质体挤出器，滤膜粒径0.4 -1.2 μπι，最终形成氨基酸强化脂质体。
[0018]5)将上述的氨基酸强化脂质体投喂轮虫或卤虫，对轮虫或卤虫强化孵育培养，即可完成限制性氨基酸的强化。
[0019]所述对轮虫或卤虫强化孵育培养时间为16_19h。
[0020]强化后的轮虫、卤虫具有较接近仔稚鱼鱼体的氨基酸模式，可以直接投喂给仔稚鱼。
[0021]本发明有益效果:生物饵料在仔稚鱼的生长发育中扮演重要的角色，但是其氨基酸组成对于有些鱼类来说并不均衡，存在潜在的限制性氨基酸，这些氨基酸的不足导致摄入的大量其它氨基酸利用率较低。本发明基于轮虫、卤虫与不同发育阶段的仔稚鱼体氨基酸进行比对，对潜在的限制性氨基酸进行强化，从而提高该种氨基酸在轮虫卤虫体内的含量，使其氨基酸组成接近仔稚鱼，达到生物饵料氨基酸的最大化利用，促进仔稚鱼的快速生长发育，减少畸形率和死亡率，使仔稚鱼在进入幼鱼期时获得最大的体积体重。另外，脂质体技术的使用，模拟了生物膜的结构，减少了单体氨基酸的使用量，提高其保留率，使强化过程变得可控。
[0022]经过临床试验表明，所培育的鲆鲽类苗种体格健壮，提高了进入幼鱼期的苗种的尺寸，降低了畸形率和死亡率，且此方法培育的幼鱼转饵适应性强，生长迅速，抗病能力强。
【具体实施方式】
[0023]以下给出本发明的【具体实施方式】，用来对本发明进行进一步说明。
[0024]实施例1
本实施例中基于仔稚鱼体氨基酸平衡的轮虫卤虫氨基酸强化法，选用星斑川鲽仔稚鱼做为培育对象，依据轮虫和卤虫体内氨基酸组成和星斑川鲽仔稚鱼体氨基酸组成比较，轮虫蛋氨酸A/E值为3.01，苏氨酸A/E值为7.86，仔稚鱼蛋氨酸A/E值为7.36，苏氨酸A/E值为10.05，估测蛋氨酸和苏氨基酸缺乏各为53.60%和27.02%。判定蛋氨酸为第一限制性氨基酸，苏氨酸为潜在的另一限制性氨基酸。
[0025]采用直接强化法:在20L培养轮虫、卤虫的过滤海水加入蛋氨酸1.2g和苏氨酸
0.8g，搅拌均匀，使最后溶液中的蛋氨酸和苏氨酸浓度分别达到为8.0mM和6.0mM，将温度提高为25-30°C，加入轮虫约为6X 16个或卤虫4X 10 6个，并缓慢搅拌使其均匀分布，在孵育培养的过程中充入空气并注意缓慢搅拌，孵育过程持续16h。将强化后的轮虫(或卤虫)直接投到仔稚鱼的培育池中喂养仔稚鱼。
[0026]实施例2
本实施例中基于星斑川鲽仔稚鱼体氨基酸平衡的轮虫、卤虫氨基酸强化法，与实施例1不同的是轮虫采用脂质体包被氨基酸强化法:将2g蛋黄卵磷脂和0.Sg胆固醇混合后溶于氯仿-甲醇(2: lv/v)溶液28ml中