专利名称：高效广谱败血型质型多角体病毒(cpv)及其生物杀虫剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种松毛虫败血型质型多角体病毒(CPV)以及采用该病毒复配的一系列新型生物杀虫剂。
质型多角体病毒(Cytopllasmic Polyhedrosis Virus简称CPV)是许多靶昆虫的一种天然病原体，通常的CPV感染靶昆虫的场所是中肠膜组织，幼虫感染后食欲不振，行动迟缓，躯体萎缩，从肛门排出多角体粘液，幼虫死亡之后皮肤坚韧不破；病毒产量约为3×108／头幼虫。
Bt是一种细菌生物杀虫剂，对鳞翅目幼虫杀虫谱较宽，杀虫速度快；阿维菌素是一种放线菌代谢衍生物，杀虫范围广，涉及昆虫8个目，尤其是对芽虫、螨虫、红蜘蛛有效。这两种生物杀虫剂各有其优点，但也存在对害虫产生抗性(Bt)和对夜蛾科害虫不甚敏感的问题。
本发明的目的在于提供一种新的松毛虫败血型质型多角体病毒(CPV)毒株，并利用这种毒株与BT或阿维菌素复配，生产出一类新型的复合生物杀虫剂。这种毒株应易于增殖，病毒产量高，毒力强、杀虫谱宽，所得的复配杀虫剂具有高效、广谱的特点，而且对人畜无害，不伤害天敌，可广泛应用于森林、蔬菜、棉花、茶叶、果树害虫的防治。
为实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下一．败血型CPV毒株本发明首次从文山松毛虫中分离出一株松毛虫败血型(或液化型)CPV，编号W1997，sDpCPV／W1997／RNA，该毒株已于1999年5月17日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，其保藏号为CCTCC NO V9902。
该毒株杀虫谱广，毒力高，当靶昆虫幼虫发病后，食欲剧减，行动迟缓。对某种发病幼虫而言，产生身体肿胀、体色发白症状，虫体死后，肢体液化。病毒产量可高达8×109～1×1010／头幼虫，是中肠型CPV产量的26～30倍。对其它靶昆虫幼虫机时言则造成急性瘫痪死亡症状。二．败血型CPV毒株的增殖以棉铃虫、菜青虫、粉纹夜蛾或银纹夜蛾等作为替代宿主增殖该败血型CPV。采用通用型人工饲料饲养宿主，再用W1997病毒感染幼虫，收集4—10天的患病死虫，然后分离、收集W1997病毒。具体说明如下1．利用通用型人工饲料配方增殖败血型CPV，其配方为黄豆粉10～20％ 麸皮10～20％酵母粉4～5％ 蔗糖0．4～0．8％琼脂(或代用品)1．5～2％菜油0．4～0．8ml％维生素C 0．5～1％山梨酸 0．16～0．2％尼泊金0．16～0．2％金霉素 1～1．5％余量为水。
2．棉铃虫、菜青虫、粉纹夜蛾、银纹夜蛾的饲养(1)粉纹夜蛾、菜青虫、银纹夜蛾的饲养将配制的人工饲料分装于经消毒的孵化盒中，将经人工饲料继代同步化的夜蛾适量卵块条(约300粒)粘于养虫盒盖被面上；将孵化盒放入21～28℃、相对湿度为70～80％、光照L∶D=12∶12hr的养虫室，待幼虫孵化直至化蛹。收取健康蛹，在5～10％甲醛液中消毒、漂洗、凉干后放入产卵笼内，保持80％湿度。成虫羽化后，将5W白炽灯放在产卵笼的一端，引诱雌蛾产卵于白纸上。每天定时更换产卵纸，卵纸经5～10％甲醛消毒、漂洗、凉干，再根据卵纸上卵粒的密度，将卵纸剪成不同大小放入养虫盒，进入下一次生活周期再循环。
(2)棉铃虫饲养由于棉铃虫幼虫有自相残杀的生活习性，幼虫需要单头饲养，除此之外，其它饲养条件与菜青虫、粉纹夜蛾、银纹夜蛾的饲养相同。
3．CPV感染棉铃虫、粉纹夜蛾、银纹夜蛾技术病毒初品经两个轮次差异离心去渣，一次蔗糖梯度离心纯化，经计数后置于4℃冰箱备用。将1×105CPB／ml的病毒悬液均一喷在养虫盒内的人工饲料上，感染3～4龄幼虫，从感染后的第4天至第10天收集患病死虫。
4．CPV病毒的分离、收集将患病死虫匀浆捣碎，离心后过200目尼龙网去渣，计数后备用。三．CPV生物杀虫剂W1997毒株具有杀虫谱广，毒力高的特点，利用此毒株既可配制成单一的CPV乳剂或可湿性粉剂，也可与Bt、阿维菌素复配成复合生物杀虫剂。
1．单一CPV杀虫剂乳剂将计数后的W1997悬液加辅助剂、防腐剂制成的乳剂。所用的辅助剂为展着剂洗衣粉，光保护剂荧光素钠，防腐剂为二甲苯或苯甲酸。
2．单一CPV杀虫剂可湿性粉剂将计数后的W1997悬液加填充剂(如轻质碳酸钙、滑石粉等)，经喷雾干燥而成的可湿性粉剂。
3．CPV—Bt乳剂将计数后的W1997悬液定量加入到Bt发酵浓缩液中即得到CPV—Bt乳剂。产品中病毒有效含量不低于l×108CPB／ml，Bt的有效含量不低于4000lu／μl。
4．CPV—Bt可湿性粉剂将计数后的W1997悬液定量加入到Bt发酵浓缩液中，喷雾干燥制成可湿性粉剂。产品中病毒有效含量不低于1×108CPB／g，Bt的有效含量不低于8000lu／g。
5．CPV—阿维菌素可湿性粉剂在计数后的W1997悬液中加入一定量的填充剂(如轻质碳酸钙、滑石粉等)，经喷雾干燥后制成单一的CPV可湿性粉剂，与阿维菌素乳油剂复配组装，复合剂中，病毒有效含量不低于1×1010CPB／亩，阿维菌素用量相当于5～10ml1．8％乳油／亩。
与已有技术相比较，本发明具有以下特点和优势1．经国内外查新检索，本发明中的松毛虫败血型CPV W1997毒株为国内外首次发现。
2．为增殖败血型CPV，从多种鳞翅目害虫中筛选出棉铃虫、菜青虫、粉纹夜蛾、银纹夜蛾等多种替代宿主，每单头幼虫产病毒为8×109～1×1010CPB／头，是中肠型CPV病毒产量的26～30倍。
3．用败血型CPV感染棉铃虫、菜青虫、粉纹夜蛾、银纹夜蛾幼虫增殖病毒，增殖周期比中肠型CPV增殖周期缩短了5～6天，从而降低生产管理费用约1／3。
4．败血型CPV比中肠型CPV杀虫谱更广，毒力更强，不仅对夜蛾科抗性害虫(棉铃虫、甜菜夜蛾、斜纹夜蛾、粉纹夜蛾、银纹夜蛾等)有效，而且对菜青虫也优于其它生物农药。
5．本发明的广谱、高效CPV复合生物杀虫剂的杀虫范围可覆盖森林、蔬菜、棉花、茶叶、果树等主要害虫。
广谱、高效CPV生物杀虫剂的作用范围1．CPV乳剂、CPV可湿性粉剂适用于所有松毛虫害虫的防治，防效大于80％以上。对棉铃虫的防治及对蔬菜夜蛾科害虫的防治，防效大于75％以上。
2．CPV—Bt复合生物杀虫剂可湿性粉剂，主要用于蔬菜小菜蛾、菜青虫、甜菜夜蛾、斜纹夜蛾、粉纹夜蛾、银纹夜蛾、菜螟等鳞翅目害虫的防治，防效达80％以上。
3．CPV—阿维菌素可湿性粉剂除对蔬菜所有鳞翅目害虫有效外，还对菜蚜、螨虫及红蜘蛛有效，是系列产品中杀虫谱最广的生物农药。
以下结合具体的实施例对本发明的技术方案作进一步的说明实施例1CPV的增殖方法用1×105CPB／ml败血型CPV多角体病毒(W1997)悬液喷雾感染人工饲料上3～4龄粉纹夜幼虫，待发病幼虫死亡后收集于容器内，置于4℃冰箱内保存。捣碎虫体，用500rpm／min离心，过200目尼龙网去渣，用血球计数法计数悬液中的多角体含量。实施例2单一CPV杀虫剂乳剂向计数后的W1997悬液中加入洗衣粉作为展着剂、荧光素钠作为光保护剂、苯甲酸作为防腐剂，得到单一的CPV杀虫剂乳剂。实施例3单一CPV杀虫剂可湿性粉剂向计数后的W1997悬液中加入轻质碳酸钙，以喷雾干燥制成单一CPV杀虫剂可湿性粉剂。实施例4CPV—Bt可湿性粉剂将CPV悬液与Bt发酵浓缩液定量混合，经喷雾干燥制成CPV—Bt复合杀虫剂可湿性粉剂。实施例5CPV—阿维菌素可湿性粉剂由单一CPV可湿性粉剂与阿维菌素粉剂复配而成。
权利要求
1．一种松毛虫败血型质型多角体病毒毒株W1997(sDpCPV／W1997／RNA)，其其保藏号为CCTCC NO V9902。
2．权利要求1所述的败血型质型多角体病毒毒株W1997的生产增殖方法，其特征在于以棉铃虫、菜青虫、粉纹夜蛾或银纹夜蛾作为替代宿主，利用人工饲料饲养宿主，用W1997感染3—4龄幼虫，收集第4天至第10天患病死虫，将患病死虫匀浆捣碎，离心、去渣。
3．权利要求1所述的败血型质型多角体病毒毒株W1997用于森林、蔬菜、棉花、茶叶及果树的害虫防治。
4．一种单一CPV杀虫剂，其特征在于它是由计数后的W1997悬液加辅助剂、防腐剂制成的乳剂。
5．一种单一CPV杀虫剂，其特征在于它是由计数后的W1997悬液加填充剂，经喷雾干燥而成的可湿性粉剂。
6．一种CPV—Bt复合生物杀虫剂，其特征在于它是由计数后的W1997悬液与Bt发酵浓缩液定量混合成的CPV—Bt复合乳剂或可湿性粉剂。
7．按权利要求6所述的CPV—Bt复合生物杀虫剂，其特征在于所述的CPV—Bt复合乳剂中CPV的有效含量不低于1×108CPB／ml，Bt的有效含量不低于4000lu／ml。
8．按权利要求6所述的CPV—Bt复合生物杀虫剂，其特征在于所述的CPV—Bt复合可湿性粉剂中CPV的有效含量不低于1×108CPB／g，Bt的有效含量不低于8000lu／mg。
9．一种CPV—阿维菌素复合生物杀虫剂，其特征在于它是由计数后的W1997可湿性粉剂与阿维菌素粉剂复配而成的CPV—阿维菌素复合剂。
10．按权利要求9所述的CPV—阿维菌素复合生物杀虫剂，其特征在于CPV有效含量不低于1×1010CPB／亩，阿维菌素的有效含量相当于5—10ml 1．8％乳油／亩。
全文摘要
本发明公开了一种败血型CPV毒株以及该用毒株与阿维菌素或Bt复配,生产出一系列新型、高效、广谱生物杀虫剂。利用棉铃虫、菜青虫、银纹夜蛾、粉纹夜蛾作为替代宿主对其进行增殖,增殖产量为中肠型的26～30倍。该病毒毒株杀虫谱广,毒力更强,不仅对夜蛾科抗性害虫(棉铃虫、甜菜夜蛾、斜纹夜蛾、粉纹夜蛾、银纹夜蛾等)有效,而且对菜青虫也优于其它生物农药。本发明的广谱、高效CPV复合生物杀虫剂的杀虫范围查覆盖森林、蔬菜、棉花、茶叶、果树等主要害虫。
文档编号C12N7/01GK1279285SQ00114560
公开日2001年1月10日 申请日期2000年5月11日 优先权日1999年6月30日
发明者孟小林, 徐进平, 姜小文, 叶林柏, 郜金荣, 钟铁柱 申请人:武汉大学