专利名称：一种微生物(no.3)及其制备方法
技术领域：
本发明涉及微生物技术领域，具体地说是一种微生物(No.3)及其制备方法。
背景技术：
目前由于未自然发酵好的原烟和青烟在掺入工业配方中使用时，给烟气带来了刺激性大、吸味辛辣、粗糙、涩口、滞舌，香气不足或缺乏香气，燃烧性不好等缺点。这不仅给卷烟成品的内在质量、产品风格等方面带来了较大的损坏。再者，目前全国各大烟厂、烟草公司有近60％的上部烟叶和低次烟叶由于使用率低，大量积压，占用大量仓库和资金。
发明内容
本发明的目的是针对目前没有有效的烟叶醇化剂，提供一种能用于改善成品烟品质和上部烟叶、低次烟叶的可用性的微生物及其制备方法。
本发明是采用分离烟叶本身有益微生物的方法而得到的微生物，该微生物是短小芽孢杆菌No.3(Bacillus pumilus)，其保藏登记号为CGMCCNO.0675。
本发明的微生物经检测具有以下性质细胞杆状，革兰氏阳性，大小为0.5*1.5～2.0m，产生近中生的椭圆状芽孢，孢囊不膨大。细胞内有聚-β-羟基丁酸盐(PHB)颗粒。在肉汁培养基上的菌落为圆形、扩展、边缘整齐，淡黄色，有光泽，18小时后菌落直径大于1毫米。不产生乙酰甲基甲醇(V-P反应阳性)，VP液最终pH为7.5。接触酶阳性。卵磷脂酯阴性，还原硝酸盐。在pH5.7和7％NaCl中生长，营严格好氧生活。从葡萄糖、阿拉伯糖、木糖和甘露醇产酸。石蕊牛奶呈还原反应，分解酷素。利用柠檬酸盐。
本发明的微生物的培养方法是先采用固体豆芽汁培养基YBA，将上述菌在试管斜面培养基上接种后，27-29℃下活化培养，二天后，再采用流体豆芽汁培养基YB，将试管中巨大芽孢杆菌接种在锥形瓶YB豆芽汁流体培养基中28℃草药摇床培养24小时。
该微生物的液体发酵制备方法按以下步骤进行1)试管培养基采用灭菌固体豆芽汁(YBA)培养基，将短小芽孢杆菌接种在试管培养基上，接种后27-29℃下活化培养48小时；
2)扩大培养基采用灭菌液体YB豆芽汁培养基，将试管培养基中短小芽孢杆菌接种在锥形瓶中，置于摇床上28℃，振荡培养24-46小时，作为种子液；3)液体发酵培养基在发酵缺罐中采用液体YB豆芽汁培养液，121℃高压灭菌30分钟左右，待灭菌培养液冷却至27.5℃时，将锥形瓶中的培养物按5-7％的比例接种发酵液，27-28℃培养48小时，可得到短小芽孢杆菌菌液。
该微生物的分离方法是将烟末加入已灭菌的豆芽汁培养液培养液YB中，于25℃摇床培养24小时后，用吸管吸取培养液，采用稀释涂布法在灭菌固体豆芽汁培养基YBA上进行涂布平板，待菌长出后，用接种针在另一灭菌固体豆芽汁培养基YBA上进行划线法分离，经纯化培养后得该单菌落纯培养菌。
本发明的微生物用于烟草加工工艺过程中，作为降低卷烟烟气的刺激性以及杂气，增加卷烟烟气协调性，香气细腻性以及改善余味具有良好的效果。通过以一定比例加入本发明的微生物后，可有效降低上部烟叶和低次烟叶中的蛋白质、烟碱等含量，使烟气更协调，香气显现，改善余味。本发明的微生物能使烟草业中库存的上部烟叶加快其可使和性，节约仓库、减少大量资金积压，减少库存烟叶和因长期贮存虫害霉变引致的损失，同时可配合开发不同吸味、风格品牌的卷烟。
具体实施方案本发明的微生物是从烟草叶片上分离得到的短小芽孢杆菌No.3，其保藏登记号为CGMCC NO.0675。
其培养方法是先采用固体豆芽汁培养基YBA，将上述菌在试管斜面培养基上接种后，27-29℃下活化培养，二天后，再采用流体豆芽汁培养基YB，将试管中巨大芽孢杆菌接种在锥形瓶YB豆芽汁流体培养基中28℃摇床培养24小时。
其液体发酵制备方法按以下步骤进行1)试管培养基采用灭菌固体豆芽汁(YBA)培养基，将短小芽孢杆菌接种在试管培养基上，接种后27-29℃下活化培养48小时2)扩大培养基采用灭菌液体YB豆芽汁培养基，将试管培养基中短小芽孢杆菌接种在锥形瓶中，置于摇床上28℃，振荡培养24-46小时，作为种子液；
3)液体发酵培养基在发酵缺罐中采用液体YB豆芽汁培养液，121℃高压灭菌30分钟左右，待灭菌培养液冷却至27.5℃时，将锥形瓶中的培养物按6％的比例接种发酵液，27-28℃培养48小时，可得到短小芽孢杆菌菌液。
上述微生物的分离方法是将烟末加入已灭菌的豆芽汁培养液培养液YB中，于25℃摇床培养24小时后，用吸管吸取培养液，采用稀释涂布法在灭菌固体豆芽汁培养基YBA上进行涂布平板，待菌长出后，用接种针在另一灭菌固体豆芽汁培养基YBA上进行划线法分离，经纯化培养后得该单菌落纯培养菌。
权利要求
1.一种微生物，其特征在于它是从烟草叶片上分离得到的短小芽孢杆菌No.3(Bacillus pumilus)，其保藏登记号为CGMCC NO.0675。
2.根据权利要求1所述的微生物的培养方法，其特征在于先采用固体豆芽汁培养基YBA，将上述菌在试管斜面培养基上接种后，27-29℃下活化培养，二天后，再采用流体豆芽汁培养基YB，将试管中短小芽孢杆菌接种在锥形瓶YB豆芽汁流体培养基中28℃摇床培养24小时。
3.根据权利要求1所述的微生物的液体发酵制备方法，其特征在于按以下步骤进行1)试管培养基采用灭菌固体豆芽汁(YBA)培养基，将短小芽孢杆菌接种在试管培养基上，接种后27-29℃下活化培养48小时；2)扩大培养基采用灭菌液体YB豆芽汁培养基，将试管培养基中短小芽孢杆菌接种在锥形瓶中，置于摇床上28℃，振荡培养24-46小时，作为种子液；3)液体发酵培养基在发酵缺罐中采用液体YB豆芽汁培养液，121℃高压灭菌30分钟左右，待灭菌培养液冷却至27.5℃时，将锥形瓶中的培养物按5-7％的比例接种发酵液，27-28℃培养48小时，可得到短小芽孢杆菌菌液。
4.根据权利要求1所述的微生物的分离方法，其特征在于将烟末加入已灭菌的豆芽汁培养液培养液YB中，于25℃摇床培养24小时后，用吸管吸取培养液，采用稀释涂布法在灭菌固体豆芽汁培养基YBA上进行涂布平板，待菌长出后，用接种针在另一灭菌固体豆芽汁培养基YBA上进行划线法分离，经纯化培养后得该单菌落纯培养菌。
全文摘要
本发明是一种微生物及其制备方法。其特征在于它是从烟草叶片上分离得到的短小芽孢杆菌No.3(Bacilluspumilus)，其保藏登记号为CGMCC NO.0675。本发明的微生物用于烟草加工工艺过程中，作为降低卷烟烟气的刺激性以及杂气，增加卷烟烟气协调性，香气细腻性以及改善余味具有良好的效果。可有效降低上部烟叶和低次烟叶中的蛋白质、烟碱等含量，使烟气更协调，香气显现，改善余味。本发明的微生物能使烟草业中库存的上部烟叶加快其可使和性，节约仓库、减少大量资金积压，减少库存烟叶和因长期贮存虫害霉变引致的损失，同时可配合开发不同吸味、风格品牌的卷烟。
文档编号C12N1/20GK1439713SQ0211339
公开日2003年9月3日 申请日期2002年2月23日 优先权日2002年2月23日
发明者王革 申请人:王革