专利名称：一种用细菌生产岩藻聚糖硫酸酯酶的方法
技术领域：
本发明涉及一种用细菌生产岩藻聚糖硫酸酯酶的方法。
背景技术：
据本发明人所知，岩藻聚糖硫酸酯酶在制备具有不同分子量的岩藻聚糖硫酸酯低聚糖、双糖、单糖等方面显示出极其重要的作用，它对一些海洋药物的研制和工业化生产有决定性的意义。目前，已经有人用Vibrio sp，N-5得到外切型岩藻糖酶。另有人用Bacillus等其它微生物生产岩藻糖酶。但用这些菌种产酶时间长，产出的酶活性低，培养成分复杂，难适于工业化生产。
发明内容
本发明的目的是提供一种用河弧菌生产岩藻聚糖硫酸酯酶的方法，它能克服现有技术的上述缺点。
将河弧菌用于生产岩藻聚糖硫酸酯酶。
一种用细菌生产岩藻聚糖硫酸酯酶的方法，包括把菌株接入含海藻粉发酵液培养基中，在一定温度下培养一定时间，然后投入提酶剂，使产生的沉淀物下沉，再进行分离，最后冷冻干燥，其特征是所用的菌种为河弧菌Vibrio fluvialis。
本发明用的菌种具有营养要求范围广，容易培养和代时短的特点，特别是具有高的产酶活性，其发酵液酶活力为226U/ml。用本发明的方法生产的岩藻聚糖硫酸酯酶为内切和外切两类，降解岩藻聚糖硫酸酯可得到岩藻聚糖硫酸酯低聚糖、双糖、单糖。该酶产品的活性高，稳定性好，成本低，能够实现工业化生产。
具体实施例方式
本发明用的河弧菌Vibrio fluvialis菌株为弧形，端生单鞭毛，G-，菌落圆形，乳白色。培养该菌采用的培养基为海水细菌培养基2216E，培养基的组分为酵母膏1克，蛋白胨5克，磷酸高铁0.01克，琼脂15克，陈海水1000ml，其pH为7.6-7.8。本发明所用的产酶培养基为上述培养基，另外又加入0.8-1.5％(按重量，以下同)的海藻粉，培养20小时即可得到酶液。上述河弧菌的保藏单位为中国典型培养物保藏中心，简称CCTCC，地址中国武汉、武汉大学，保藏日期为2000年6月5日。保藏号为M200015。
将河弧菌用上述2216E培养基活化后，以5％的接种量接入装有100ml含有1％藻粉培养基的500ml三角瓶中，26℃摇瓶培养18-24h后，将该培养液用冷冻离心机以4000rpm离心10分钟去除菌体，获得发酵酶液。将该酶液于4℃冰箱中加入(NH4)2SO4至80％的饱和度，4℃下沉淀24h，冷冻离心收集沉淀，该沉淀经冷冻干燥后制成粗酶制剂。所述的培养温度为18-28℃，
权利要求
1.将河弧菌Vibrio fluvialis用于生产岩藻聚糖硫酸酯酶。
2.一种用细菌生产岩藻聚糖硫酸酯酶的方法，包括把细菌接入海藻粉发酵液中，在一定的培养温度下培养一定时间，然后投入提酶剂，使产生的沉淀物下沉，再进行分离，最后冷冻干燥，其特征是所用的菌种为河弧菌Vibrio fluvialis。
3.权利要求2所述的方法，其特征是所述的培养温度为18-28℃，所述的培养时间为18-24小时，所述的提酶剂为(NH4)2SO4。
全文摘要
一种用细菌生产岩藻聚糖硫酸酯酶的方法，包括把菌株接入含海藻粉发酵液培养基中，在一定温度下培养一定时间，然后投入提酶剂，使产生的沉淀物下沉，再进行分离，最后冷冻干燥，其特征是所用的菌种为河弧菌Vibrio fluvialis。本发明用的菌种具有营养要求范围广，容易培养和代时短的特点，特别是具有高的产酶活性，其发酵液酶活力为226U/ml。用本发明的方法生产的岩藻聚糖硫酸酯酶为内切和外切两类，降解岩藻聚糖硫酸酯可得到岩藻聚糖硫酸酯低聚糖、双糖、单糖。该酶产品的活性高，稳定性好，成本低，能够实现工业化生产。
文档编号C12N9/00GK1483814SQ0313886
公开日2004年3月24日 申请日期2003年7月28日 优先权日2003年7月28日
发明者江晓路, 胡晓珂 申请人:中国海洋大学