专利名称：用于生物芯片的活性载体、其制备方法及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于生物芯片的活性载体、用于生物芯片的活性载体的制备方法、及用于生物芯片的活性载体的应用(生物芯片基片、生物芯片、生物芯片试剂盒、及生物芯片检测)。
背景技术：
本发明中，生物芯片试剂盒(“Biochip Kit”，又简称“芯片试剂盒”)是定性和/或定量分析中的一种检测装置，其包括微通道芯片试剂盒(“Micro-tunnel BiochipKit”)和微阵列芯片试剂盒(“Bio-array Kit”或“Micro-array Kit”)。由于其高通量和微型化特点，生物芯片试剂盒有着广泛的应用范围，包括基因表达检测、基因筛选、药物筛选、疾病诊断治疗、环境监测和治理、司法鉴定等领域。生物芯片试剂盒通常含生物芯片(“Biochip”，又简称“芯片”)和标记系统。在我们的一项专利申请(PCT/CN2004/000437)中，标记系统含配基、标记物质和纳米结构(用于纳米结构标记物的活性载体)。
芯片的核心是其上的反应器。芯片反应器中最重要的叁部分为片基(用于芯片的固相载体)、固定在片基上的探针、和反应器结构。探针是反应器中通过与样品中目标物的相互作用而固定目标物的物质。最早应用的是以核酸为探针的核酸芯片。后来发展起来的包括有多肽探针的含多肽芯片(例如，多肽芯片、多肽/核酸芯片、多肽/糖芯片、等等)，由于在检测反应中包括多肽间相互作用，使其对稳定性、空间反应效率、等等均有更高的要求。片基主要是玻璃、金属、塑料等材料及其衍生物制作的矩形、圆形或其它形状的含有活性衍生基团的载体。反应器结构包括反应器隔离结构、反应器流路结构、反应器分离结构、反应器反应室结构，等等。探针可以直接结合在片基上，也可以通过与活性纳米结构(用于亲和纳米结构的活性载体)结合形成亲和纳米结构再结合在片基上(参考我们的一项专利申请PCT/CN2004/000437)。
通常，片基含片基固相载体和固定在片基固相载体上的衍生物。片基中形成衍生物有两种方式包被和表面修饰。衍生物中含用以固定探针的功能基团。功能基团与固相载体的连接是影响反应质量的重要因素。例如，芯片生物活性的有效保存、固相探针的反应动力学条件(例如探针有效位点密度、空间运动自由度、等等)、等等均与此连接有关。这一连接非常丰富也非常复杂。例如，共价键连接与吸附连接可能有不同的固相探针稳定性；不同的功能基团可能有不同的固相探针反应效率；等等。
对片基固相载体进行聚合物包被以引入功能基团的工作，包括申请号为20020128234的美国专利、等等。这些工作基于离子配对机理，在片基活性的均匀性与稳定性方面存在严重问题。
目前，通过对片基固相载体进行表面化学修饰的工作包括1).引入偶合基团后直接固定探针(例如，中国专利申请号CN200310107946.X中的工作)；2).先引入偶合基团再引入功能基团去固定探针。在后一类工作中，引入的小分子功能基团包括氨基、醛基(中国专利申请号CN01105795.5、CN03132420.7)、氨基肼(美国专利申请号US2004235049)、环氧基及其它小分子基团(美国专利号5,474,895)；引入的大分子功能基团包括含氨基的聚合物(例如US专利6,413,722，中国专利申请号200410027316.6，等等)。一般而言，引入小分子功能基团制备的片基，其固定探针的效率及固定在其上的探针捕获目标物的效率均有待改进；而引入大分子功能基团制备的片基，其稳定性有待改进、或/和其制备方法较复杂(例如交联)不利于工业化生产。
对于用于亲和纳米结构的活性纳米结构、或用于纳米结构标记物的活性纳米结构，也有与上述片基类似的问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有高效率和高稳定性、而又易于制备的用于生物芯片的固相载体。本发明的技术方案，基于化学修饰，而且基于在固相载体表面偶合基团上引入中等大小的功能基团来使其功能化。
于是，本发明的第一个方面，涉及一种用于生物芯片的活性载体，其特征在于其含固相载体和固相载体表面上化学键合的衍生物，所述衍生物至少含偶联基团和偶联基团上以共价键结合的功能基团，且所述功能基团的分子量大于50小于1000。本发明的用于生物芯片的活性载体，具有高效率和高稳定性、而又易于制备的优点。
本发明的第二个方面，涉及本发明的用于生物芯片的活性载体的一种制备方法，其至少包括1).将所述偶联基团以化学键结合在所述固相载体表面上；2).将功能物质与1)的制备物中的所述偶联基团接触并进行反应，所述功能物质含所述功能基团；3).将所述功能基团固定在所述偶联基团上。
本发明的第三个方面，涉及本发明的用于生物芯片的活性载体的应用，包括基于本发明的活性载体的生物芯片基片、生物芯片、生物芯片试剂盒，以及生物芯片检测。本发明的一种多反应器生物芯片基片，其特征在于其至少含本发明的生物芯片片基和固定在所述片基上的反应器结构。本发明的一种生物芯片，其特征在于其至少含本发明的生物芯片片基和固定在所述片基上的二种或二种以上的探针、或至少含本发明的生物芯片基片和固定在所述基片的片基上的二种或二种以上的探针。本发明的一种生物芯片试剂盒，其特征在其含片基或本发明的生物芯片基片，以及固定在所述片基上的二种或二种以上的探针。本发明的一种生物芯片检测方法，至少包括下列步骤A).提供可能含检测目标物的样本，所述目标物包括多肽目标物；B).提供本发明的生物芯片；C).使所述样本与所述探针接触并进行相关反应。
以下将通过实施例更为详细地说明本发明。
具体实施例方式
本发明的第一个方面，涉及一种用于生物芯片的活性载体，其特征在于其含固相载体和固相载体表面上化学键合的衍生物，所述衍生物至少含偶联基团和偶联基团上以共价键结合的功能基团，且所述功能基团的分子量大于50小于1000。
本发明中，术语“活性载体”是指可通过其上的功能基团有效地固定反应物(例如探针、标记用配基、等等)的固相载体，例如生物芯片片基、用于亲和纳米结构的活性纳米结构、用于纳米结构标记物的活性纳米结构、等等。尽管本发明的实施例中只给出了多肽作为反应物的例子，其它生物物质(例如核酸、细胞、糖类、等等)，也可应用本发明的活性载体制备本发明的生物芯片组成物(例如，生物芯片片基、纳米结构标记物、等等)。特别要指出的是，适于多肽固定的活性载体通常适合于核酸固定，而适于核酸固定的活性载体则不一定适合于多肽固定。本发明中，术语“功能基团”是指活性载体中通过相互作用(包括亲和作用、离子交换、亲油作用、共价键合、等等)用以固定反应物的基团；术语“偶联基团”是指固相载体表面上化学键合的衍生物中用以联接功能基团和固相载体的基团。
在本发明的用于生物芯片的活性载体的一项实施方案中，所述功能基团的分子量大于75小于500。
在本发明的用于生物芯片的活性载体的一项实施方案中，所述功能基团包括氨基酸基团。
在本发明的用于生物芯片的活性载体的一项实施方案中，所述氨基酸包括脱保护氨基酸。
在本发明的用于生物芯片的活性载体的一项实施方案中，所述氨基酸包括侧链含二个或二个以上-NH2的氨基酸。在本发明的用于生物芯片的活性载体的一项实施方案中，所述氨基酸包括侧链含三个或三个以上-NH2的氨基酸。
在本发明的用于生物芯片的活性载体的一项实施方案中，所述氨基酸包括赖氨酸。在本发明的用于生物芯片的活性载体的一项实施方案中，所述氨基酸包括丝氨酸。在本发明的用于生物芯片的活性载体的一项实施方案中，所述氨基酸包括胱氨酸。
在本发明的用于生物芯片的活性载体的一项实施方案中，所述偶联基团包括有机硅基团。例如，通过加入下述一种或多种偶联剂引入的偶联基团甲基丙烯酰氧基硅烷、乙烯基硅烷、氨基硅烷、环氧基硅烷、硫基硅烷、脲基硅烷、异氰酸酯硅烷、3-氨基丙基三乙氧基硅烷、等等。
在本发明的用于生物芯片的活性载体的一项实施方案中，所述共价键包括酰胺键。
在本发明的用于生物芯片的活性载体的一项实施方案中，所述活性载体包括生物芯片片基。本发明中，术语“片基”是指生物芯片的一种部件，即用于生物芯片的活性载体，其具有有效固定探针的功能。本发明的片基，至少含片基固相载体、固定在片基固相载体上的偶联基团、以及固定在所述偶联基团上的功能基团。片基固相载体包括常规片基载体和纳米结构片基载体。所述常规片基载体为表面未固定有纳米结构的片基固相载体。尽管本发明的试施例给出的是以玻璃作为片基固相载体的例子，其它固相载体(例如硅、金、塑料片或金属片)，也可应用本发明的方法制备本发明的生物芯片片基。所述纳米结构片基载体为固定有纳米结构的片基固相载体。
在本发明的用于生物芯片的活性载体的一项实施方案中，所述活性载体包括用于亲和纳米结构的活性纳米结构。本发明的亲和纳米结构，至少含纳米结构(例如，纳米粒子、纳米管、等等)、固定在纳米结构上的偶联基团、固定在所述偶联基团上的功能基团、以及固定在所述功能基团上的探针。
在本发明的用于生物芯片的活性载体的一项实施方案中，所述活性载体包括用于纳米结构标记物的活性纳米结构。本发明的纳米结构标记物，至少含标记物质、纳米结构(例如，纳米粒子、纳米管、等等)、固定在纳米结构上的偶联基团、固定在所述偶联基团上的功能基团、以及固定在所述功能基团上的配基。
本发明的第二个方面，涉及本发明的用于生物芯片的活性载体的一种制备方法，1).将所述偶联基团以化学键结合在所述固相载体表面上；2).将功能物质与1)的制备物中的所述偶联基团接触并进行反应，所述功能物质含所述功能基团；3).将所述功能基团固定在所述偶联基团上。
在本发明的方法的一项实施方案中A).所述偶联基团含-NH2或-COOH基团；B).所述功能物质含功能基团、结合在功能基团内的保护基团和可同所述偶联基团反应的-NH2或-COOH基团；C).所述功能基团固定在所述偶联基团上是通过形成酰胺键进行的；D).在所述功能基团固定在所述偶联基团上后，所述方法还包括在固定探针前选择性地脱去所述保护基团。本发明的方法的一项实施方案，还包括在固定探针后选择性地脱去所述保护基团。本发明的方法的一项实施方案，还包括重复所述1)、2)、3)。
本发明的第三个方面，涉及本发明的用于生物芯片的活性载体的应用。
本发明的一种多反应器生物芯片基片，其特征在于其至少含本发明的生物芯片片基和固定在所述片基上的反应器隔离结构。
本发明术语“基片”是指指用以制备芯片的、尚未固定探针的中间产品，其以片基为基础、结合有无其它结构(例如隔离结构)、且在固定配基后形成芯片。基片上可以有一个或多个片基室。单片基室基片上通常没有隔离结构，此时基片既是片基(例如市售的氨基玻片)。多片基室基片上有隔离结构，此时基片包括片基和隔离结构。片基室在固定上配基后形成反应器，多片基室基片形成多反应器芯片。本发明术语“反应器结构”是指形成反应器的必须的片基、探针以外的其它结构，如隔离结构、流路结构等；术语“反应器隔离结构”是指至少在加入样品时避免反应器之间出现交叉污染的结构，包括用以隔离部分或全部反应器结构(例如反应池、反应腔室、流路、进液结构、出液结构、等等)的结构。反应器隔离结构包括开放式隔离结构和封闭式隔离结构。开放式隔离结构是指芯片使用时隔离结构上方无覆盖物的反应器隔离结构。封闭式隔离结构是指芯片使用时隔离结构上方有覆盖物的反应器隔离结构。
在本发明的生物芯片基片的一项实施方案中，所述隔离结构包括高疏水材料涂层。在本发明的生物芯片基片的一项实施方案中，所述高疏水材料的表面静态水接触角比所述固相载体的表面静态水接触角大40度以上。本发明术语“表面静态水接触角”是指静态水在表面的接触角。长时间以来，用一滴液体在固体物质表面的接触角θ作为特定固定湿润的量化测试，这一点是被广为认可的。如果液体完全分散在表面上形成膜，接触角θ为0、如果物质表面上的液珠存在一定角度，该表面被认为是不湿润的。芯片中最常用的固相载体基片材料为玻璃，其表面静态水接触角约为45度。
在本发明的生物芯片片基的一项实施方案中，所述隔离结构包括疏水/疏油材料涂层。
本发明的一种生物芯片，其至少含本发明的生物芯片片基或本发明的生物芯片基片。本发明的生物芯片的一项实施方案，其至少含本发明的生物芯片片基和固定在所述片基上的二种或二种以上的探针。本发明的生物芯片的一项实施方案，其为多反应器生物芯片，其至少含本发明的生物芯片基片和固定在所述片基上的二种或二种以上的探针。本发明中，术语“探针”是指用以在检测反应中捕获目标物的物质，例如抗原、抗体、配体、配体指数增强系统进化技术筛选的适配分子、多肽、多糖、共酶、辅因子、抗生素、类固醇、病毒、细胞、生物素、亲和素等。在本发明的生物芯片片基的一项实施方案中，所述生物芯片包括含多肽探针的芯片。本发明术语“多肽”相当于英语中的“polypeptide”，包括天然或合成蛋白质、蛋白质片断、合成肽、等等，免疫检测中通常的目标物和检测中通用的探针、例如抗原、抗体、等等都属于多肽本发明的一种生物芯片试剂盒，其特征在于其至少含本发明的用于生物芯片的活性载体。
本发明的一种生物芯片检测方法，至少包括下列步骤A).提供可能含检测目标物的样本，所述目标物包括多肽目标物；B).提供本发明的生物芯片；C).使所述样本与所述探针接触并进行相关反应。本发明的生物芯片在下述一个或多个活动中的使用用作一种诊断工具、用作一种诊断工具、用作一种分子扫描工具、用作一种分子间关系分析工具、用作一种测试工具。
实施例实施例1本发明的用于生物芯片的活性载体的例子(1)本实施例中，本发明的用于生物芯片的活性载体为生物芯片片基。本实施例中，所用片基固相载体为玻片，包括常规玻片和纳米结构玻片(参考我们的另一项专利申请PCT/CN2004/000437)。
本实施例中，所用功能物质选自氨基酸、优选含有-NH2侧基保护基(例如Fmoc)的氨基酸。所用氨基酸分别为赖氨酸、丝氨酸、胱氨酸、和它们的混合物。按照本发明的方法，其它氨基酸也可用来制备本发明的生物芯片片基。
本实施例中，所用偶联剂选自有机硅、优选硅烷类化合物(例如3-氨基丙基三乙氧基硅烷)。使用硅烷类化合物可在玻片表面形成含氨基或羟基的偶合基团。
本实施例中，本发明的生物芯片片基的一种制备方法，其至少包括1).在所述固相载体表面上键合形成所述偶联基团，所述偶联基团含-NH2或-COOH基团；2).将功能物质与1)制备的含偶联基团的固相载体表面接触并进行反应，其中A).所述功能物质含所述功能基团和结合在功能基团内的保护基团；B).所述功能物质除功能基团外还含-NH2或-COOH基团；3).通过与所述偶联基团形成酰胺键将所述功能基团固定在上述固相载体表面上。
本实施例制备的片基，其在固定探针(参考以下)以后，在室温下放置12个月未见探针活性的明显下降，而现有片基(例如按已知方法制备的氨基玻片、醛基玻片和按照本实施例方法制备的聚赖氨酸玻片比较)则在11个月内以见探针活性的明显下降。与现有氨基脲玻片比较，本实施例制备的片基显示出更小的批间差。
实施例1.1偶联基团含氨基的生物芯片片基的制备例子(1)本实施例中，本发明的生物芯片片基的一种制备方法为1).清洗玻片并固定硅烷类基团按公知的方法进行。
2).固定氨基酸基团将烘干后的固定有硅烷类基团的玻片浸入优选浓度的上述氨基酸的水溶液中，在室温下反应1小时，然后洗去玻片表面的未固定的物质，烘干后备用。
实施例1.2偶联基团含氨基的生物芯片片基的制备例子(2)本实施例中，本发明的生物芯片片基的一种制备方法为1).清洗玻片并固定硅烷类基团按公知的方法进行。
2).固定氨基酸基团将烘干后的固定有硅烷类基团的玻片浸入优选浓度的上述含Fmoc保护剂的氨基酸的DFM溶液中，在室温下反应1小时。然后按公知的方法脱去Fmoc保护剂，再洗去玻片表面的未固定的物质，烘干后备用。
实施例1.3偶联基团含氨基的生物芯片片基的制备例子(3)本实施例中，本发明的生物芯片片基的一种制备方法为1).按已知的方法制备氨基玻片2).固定氨基酸基团将烘干后的氨基玻片浸入优选浓度的上述含Fmoc保护剂的氨基酸的DFM溶液中，在室温下反应1小时。然后按公知的方法脱去Fmoc保护剂，再洗去玻片表面的未固定的物质，烘干后备用。
实施例1.4偶联基团含羧基的生物芯片片基的制备例子本实施例中，本发明的生物芯片片基的一种制备方法为1).清洗玻片并固定硅烷类基团按现有的已知方法进行。
2).固定含羧基的基团按现有的已知方法进行。
3).固定氨基酸基团将烘干后的固定有羧基的玻片浸入优选浓度的上述含Fmoc保护剂的氨基酸的DFM溶液中，在室温下反应1小时。然后按公知的方法脱去Fmoc保护剂，再洗去玻片表面的未固定的物质，烘干后备用。
实施例2本发明的用于生物芯片的活性载体的例子(2)本实施例中，本发明的用于生物芯片的活性载体为用于亲和纳米结构的活性纳米结构、或用于纳米结构标记物的活性纳米结构。
本实施例中，所用固相载体为纳米颗粒(例如氧化硅纳米微粒STN-3、LUDOXAS-40、及氧化钛纳米微粒。
本实施例中，所用功能物质选自氨基酸、优选含有-NH2侧基保护基(例如Fmoc)的氨基酸。所用氨基酸分别为赖氨酸、丝氨酸、胱氨酸、和它们的混合物。按照本发明的方法，其它氨基酸也可用来制备本发明的生物芯片片基。
本实施例中，所用偶联剂选自有机硅、优选硅烷类化合物(例如3-氨基丙基三乙氧基硅烷)。使用硅烷类化合物可在玻片表面形成含氨基或羟基的偶合基团。
本实施例中，本发明的生物芯片片基的一种制备方法，其至少包括1).在所述固相载体表面上键合形成所述偶联基团，所述偶联基团含-NH2或-COOH基团。键合方法与现有的氨基化纳米氧化硅的制备方法相同。
2).将上述功能物质与1)制备的含偶联基团的固相载体表面接触并进行反应。反应温度为室温，反应时间2小时。
3).通过与所述偶联基团形成酰胺键将所述功能基团固定在上述固相载体表面上。
本实施例制备的活性纳米结构，其在固定探针或标记物配基以后，在室温下放置1个月未见纳米结构上探针或标记物配基活性的明显下降。
实施例3本发明的多反应器生物芯片基片的制备例子本实施例中，所用生物芯片片基为上述实施例1制备的片基。
实施例3.1高疏水隔离结构基片的制备在本实施例中，所用高疏水材料分别为“聚丙烯酸脂涂料”(中国成都晨光化工设计院提供，静态水接触度85度)、“有机硅防水涂料”(中国成都晨光化工设计院提供，静态水接触度116度)、“超高疏水乳胶漆”(中国成都晨光化工设计院提供，静态水接触度123度)和“高疏水氧化硅涂料”(中国舟山明日纳米材料公司提供，静态水接触度151度)。尽管本发明的反应器的隔离结构可以部分是、也可以全部是本发明的高疏水隔离结构，本实施例中只给出了最为简单的情况作为例子。
本实施例中的制备方法为将上述高疏水液态材料涂抹在上述实施例1制备的片基上隔离带位置上，按供货方的使用说明在室温干燥后固化，形成高度25-115μm、宽度2.0-2.5mm的高疏水凸体。高疏水凸体可以有不同几何图型，本例中仅取带状(凸体为一条带)和线组合(例如凸体为有间隔的2条线)2种。高疏水凸体包围的表面可以取各种几何图型，本例中仅取3mm×3mm矩形。在基片此一表面上，横向共有12个片基池，纵向有4个片基池，共有48个片基池。
实施例3.2疏水/疏油隔离结构基片的制备在本实施例中，所用疏水-疏油材料均为市场上可购得的疏水-疏油材料，分别为城洁宝(深圳市城洁宝环保科技有限公司)，高疏水氧化硅涂料(中国舟山明日纳米材料公司)和双疏涂料(中国兰光化工研究院)。尽管本发明的反应器的隔离结构可以部分是、也可以全部是本发明的高疏水隔离结构，本实施例中只给出了最为简单的情况作为例子。
本实施例中的制备方法为将上述疏水-疏油材料涂抹在上述实施例1制备的片基上隔离带位置上，按供货方的使用说明在室温干燥后固化，形成高度25-115μm、宽度2.0-2.5mm的疏水-疏油凸体。疏水-疏油凸体包围的表面可以取各种几何图型，本例中仅取3mm×3mm矩形。在基片此一表面上，横向共有12个片基池，纵向有4个片基池，共有48个片基池。
实施例4本发明的生物芯片的例子本实施例中的生物芯片含上述实施例3制备的基片、或/和上述实施例2制备的用于亲和纳米结构的活性纳米结构。实施例3制备的基片含上述实施例1制备的片基。本实施例所用探针为HCV抗原(中国北京人民医院肝病研究所)和HIV1+2抗原(中国北京人民医院肝病研究所)。
本实施例中，本发明生物芯片的制备方法为在上述基片的一个片基池中，分别将含探针的液体按照通用的点样方法点样在片基池中，每种液体各点3个直径为80μm的点，间点距为600-700μm，形成2×3阵列。反应池片基上的配基密度大于30点/cm2。所用含探针的液体分别为HCV抗原(1.0mg/ml)、HIV1+2抗原溶液(1.0mg/ml)、HCV抗原/活性纳米结构复合物(HCV抗原浓度0.1mg/ml)、HIV1+2抗原/活性纳米结构复合物(HIV1+2抗原浓度)。HCV抗原/活性纳米结构复合物和HIV1+2抗原/活性纳米结构复合物为亲和纳米结构，其含活性纳米结构和固定在活性纳米结构上的抗原，其制备方法参考我们的另一项专利申请PCT/CN2004/000437。
实施例5本发明的生物芯片试剂盒的例子本实施例试剂盒分别为1).含实施例4制备的生物芯片的试剂盒；2).含纳米结构标记物的试剂盒；3).含实施例4制备的生物芯片和纳米结构标记物的试剂盒。本实施例中，纳米结构标记物含罗丹明、活性纳米结构和固定在活性纳米结构上的羊抗人二抗，其制备方法参考我们的另一项专利申请PCT/CN2004/000437。
实施例6本发明的生物检测方法的例子在本实施例中，1号样为HCV抗体阳性血清，2号样为HIV1+2抗体阳性人血清，3号样为阴性对照物(HCV抗体和HIV1+2抗体都为阴性的血清对照物)。所有的样品均经使用经典的ELISA方法在血清20倍稀释反应条件下预先检测。
在本实施例中，所用生物芯片试剂盒为实施例5制备的试剂盒。对照试剂盒中，芯片为分别在氨基玻片和环氧基玻片(Microarray Technology)上按常规的点样方法固定有相同配基制备的芯片，标记物为罗丹明标记羊抗人二抗(美国Jackson ImmunoRresearch Laboratories公司)。实验时，前述3种样品分别加入生物芯片的反应池中。加样量为15μl，反应30分钟后洗涤5次，洗涤液每次加入量为25μl。标记物加入量为15μl，反应后洗涤5次，洗涤液每次加入量为25μl，干燥后在35/50下进行扫描。扫描仪为共聚焦激光扫描仪(Afymetrix公司GMS418芯片扫描仪)，扫描激发光波长532nm，发射光波长570nm，读取的信号经处理软件(JAGUARII)处理，然后取平均值后根据Cut-off值判定阴(-)阳(+)性得到的结果。所得结果与ELISA方法在血清20倍稀释反应条件下预先检测的结果一致且检测下限更低。本发明的生物芯片试剂盒与对照试剂盒比较，在37℃时稳定性要高20％以上，且检测下限要低15％以上。
本发明的生物芯片试剂盒在下述一个或多个活动中的使用用作一种诊断工具、用作一种分子扫描工具、用作一种分子间关系分析工具、用作一种测试工具。
应当清楚，对于本领域的技术人员来说，对这里所述的本发明的优选的实施方案显然可以作出各种变动和修改。在不偏离本发明的精神和范围及不减小其优点的情况下，可以进行这些修改和变动。因此，这些修改和变动包括在所附的权利要求的范围内。
权利要求
1.一种用于生物芯片的活性载体，其特征在于其含固相载体和固相载体表面上化学键合的衍生物，所述衍生物至少含偶联基团和偶联基团上以共价键结合的功能基团，且所述功能基团的分子量大于50小于1000。
2.根据权利要求1所述的活性载体，其特征在于所述功能基团的分子量大于75小于500。
3.根据权利要求1所述的活性载体，其特征在于所述功能基团包括氨基酸基团。
4.根据权利要求1所述的活性载体，其特征在于所述偶联基团包括有机硅基团。
5.根据权利要求1所述的活性载体，其特征在于所述共价键包括酰胺键。
6.根据权利要求1所述的活性载体，其特征在于所述活性载体包括生物芯片片基。
7.根据权利要求1所述的活性载体，其特征在于所述活性载体包括用于亲和纳米结构的活性纳米结构。
8.根据权利要求1所述的活性载体，其特征在于所述活性载体包括用于纳米结构标记物的活性纳米结构。
9.权利要求1-8之一所述用于生物芯片的活性载体的制备方法，至少包括下列步骤1).将所述偶联基团以化学键结合在所述固相载体表面上；2).将功能物质与1)的制备物中的所述偶联基团接触并进行反应，其中所述功能物质含所述功能基团；3).将所述2)中所述功能基团固定在所述偶联基团上。
10.根据权利要求9所述的方法，其中A).所述偶联基团含-NH2或-COOH基团；B).所述功能物质含功能基团、结合在功能基团内的保护基团和可同所述偶联基团反应的-NH2或-COOH基团；C).所述功能基团固定在所述偶联基团上是通过形成酰胺键进行的；D).在所述功能基团固定在所述偶联基团上后，所述方法还包括在固定探针前选择性地脱去所述保护基团。
11.一种多反应器生物芯片基片，其特征在于其至少含权利要求6所述生物芯片片基和固定在所述片基上的反应器隔离结构。
12.一种生物芯片，其特征在于其至少含权利要求6所述生物芯片片基和固定在所述片基上的二种或二种以上的探针、或至少含权利要求11所述生物芯片基片和固定在所述基片的片基上的二种或二种以上的探针。
13.一种生物芯片试剂盒，其特征在于其至少含权利要求1-8之一所述用于生物芯片的活性载体。
14.一种生物芯片检测方法，至少包括下列步骤A).提供可能含检测目标物的样本，所述目标物包括多肽目标物；B).提供权利要求13所述生物芯片试剂盒；C).使所述样本与所述试剂盒中的生物芯片上的探针接触并进行相关反应。
全文摘要
本发明涉及一种用于生物芯片的活性载体，其含固相载体和固相载体表面上化学键合的衍生物，所述衍生物至少含偶联基团和偶联基团上以共价键结合的功能基团，且所述功能基团的分子量大于50小于1000。本发明的用于生物芯片的活性载体，具有高效率和高稳定性、而又易于制备的优点。本发明还涉及本发明的用于生物芯片的活性载体的一种制备方法。本发明还涉及本发明的用于生物芯片的活性载体的应用，包括基于本发明的活性载体的生物芯片基片、生物芯片、生物芯片试剂盒，以及生物芯片检测。
文档编号C12Q1/00GK1811427SQ20061002022
公开日2006年8月2日 申请日期2006年1月25日 优先权日2006年1月25日
发明者邹方霖, 王建霞, 陈春生 申请人:成都夸常医学工业有限公司