专利名称：一种金叶苔草茎尖培养快速繁殖方法
技术领域：
本发明涉及植物组培快繁技术领域，尤其涉及一种金叶苔草茎尖培养快速繁殖方法。
背景技术：
金叶苔草(Ow^ewrgoW)为莎草科苔草属，多年生草本，柔软飘逸，株高20厘米，叶 有条纹，叶片两侧为绿边，中呈黄色，穗状花序，花期4 5月，喜光，耐半阴，不耐涝，适 应性强，可用作花坛、花境镶边观叶植物，也可盆栽观赏，有利于建造低成本的园林景观， 其园林观赏价值引起业内人士的高度重视。目前金叶苔草一般采用分株繁殖，繁殖速度比较 慢，且种子发芽率又低。
浙江省农业科学院从英国引进金叶苔草园艺品种，拟通过植物组织培养技术大量繁殖种 苗，然后出口欧美国家。同时还可以在国内试种后加以推广。采用植物组织培养方法可以在 短期内快速繁殖多种植物，不仅繁殖率高，且因为其是无性繁殖，可以保持原繁殖母株的优 良性状。但是不同的植物利用植物组织培养方法繁殖种苗的难易程度是不同的，在金叶苔草 的前期组培试验中发现，金叶苔草生长点多靠近土壤甚至埋入土壤，感染土壤中各种微生物 等病害的机会多，灭菌处理比较困难；在组培苗增殖培养时也出现金边植物或金心植物的组 培苗金叶性状不稳定等问题，使其无法实现大规模工厂化生产。发明内容本发明要解决上述现有技术的缺陷，提供一种金叶苔草茎尖培养快速繁殖方法。 本发明解决其技术问题采用的技术方案。这种金叶苔草茎尖培养快速繁殖方法，按如下 步骤进行1) 培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为(1) 基本培养基选用MS培养基，蔗糖或白糖20 30g/L，琼脂7 9g/L， pH5.6 5.8;(2) 诱导培养基MS+KT0.5 2.0mg/L+IAA0.05 0.2mg/L;(3) 增殖培养基MS+KT0.1 1.0mg/L+IAA0.05 0.2mg/L;(4) 壮苗培养基MS+KT0.1 0.5mg/L+IAA0.05 0.2mg/L;(5) 生根培养基1/2MS+NAA0.1 0.5mg/L+IAA0.05 0.2mg/L;2) 外植体的选取与灭菌在金叶苔草分蘖生长旺盛季节，晴天早晨的9 10点，选择无 病害的优良植株，取高约5 10cm的分蘖芽，去掉上部细长的叶片及底部的根系，整理成具 有生长点、长约1.5cm的一段作为外植体，经灭菌处理后备用；3) 诱导培养将灭菌处理后的外植体在无菌条件下，摘取l 2mm的茎尖，接种在诱导 培养基上，在培养条件下培养30 45天后，从茎尖诱导形成幼芽或丛生芽；4) 增殖培养将诱导形成的幼芽或丛生芽掰成单芽，尽量不要用解剖刀切割，以避免组 培苗基部形成愈伤组织；然后去掉全绿或全白的组培苗，挑选具有金叶的组培苗接到增殖培 养基上，在培养条件下培养30 45天增殖出丛生芽；根据对幼苗数量的需求，每隔30 45 天按同样方法进行幼苗再增殖培养；5) 壮苗培养将增殖出的丛生芽接种到壮苗培养基上，在培养条件下培养20 30天后， 幼苗株高生长达3 5厘米；6) 生根培养将培养的壮苗切成单株后，去掉全绿或全白的组培苗，挑选具有金叶的组培苗接种在生根培养基中进行生根培养，在培养条件下培养20 30天后，幼苗长高成约5 7cm、苗基部长出5 10根细根；7) 移栽将生根组培苗移栽于基质中，培育1 2个月至成苗。本发明所述的金叶苔草茎尖培养快速繁殖方法，培养基包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为(1) 基本培养基选用MS培养基，琼脂7g/L， pH5.8;(2) 诱导培养基MS+KT 1.0mg/L+IAA0.1mg/L+蔗糖30g/L;(3) 增殖培养基MS+KT0.5mg/L+IAA0.1mg/L+白糖30g/L;(4) 壮苗培养基MS+KT0.25mg/L+IAA0.05mg/L+白糖30g/L;(5) 生根培养基1/2MS+NAA0.2mg/L+IAA0.1mg/L+白糖20g/L; 本发明所述的金叶苔草茎尖培养快速繁殖方法，所述的灭菌处理是整理好的外植体进行预处理，在水溶液中加入重量比为5%的中性洗衣粉和重量比为1%的吐温，浸泡并振荡 5 10min,自来水冲洗20 30min;预处理后的外植体用75%酒精表面消毒30 45s，无菌水 冲洗3遍；然后用次氯酸钠溶液浸泡振荡灭菌10 12min，无菌水冲洗3~5遍；再用0.1%升 汞溶液浸泡振荡灭菌5 7 min，无菌水洗3~5遍。本发明所述的金叶苔草茎尖培养快速繁殖方法，所述的各组培阶段的培养条件是，培养 温度为25士2。C，光照光强为2500 3000 Lx,光照时间为16h/d。本发明所述的金叶苔草茎尖培养快速繁殖方法，移栽基质由泥炭珍珠岩蛭石按体积比1: 2: 2配制而成。本发明的有益效果是1)、该方法由于外植体进行了洗涤剂浸泡预处理，二步灭菌法有效地防止了外植体接种污染率，接种成功率达85%。2)、提出的金叶苔草组培优化培养基针对性强、适用性好，芽的诱导率达90%以上，芽 的增殖率每个培养周期达5倍以上，在增殖培养接种时，不要用解剖刀切割，而将丛生芽掰 成单芽，避免组培苗基部形成愈伤组织，减少全绿或全白的组培苗分化，金叶组培苗的获得 率达95%以上，苗生长速度快，生根率达100%，移栽成活率卯％以上，年组培苗生产能力 可达100万苗以上(一年为8个培养周期)，适于大规模工厂化生产。
具体实施方式
通过以下实施例对本发明作进一步的详细说明，但本发明的内容并不局限于此。 实施例l1) 培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为(1) 基本培养基选用MS培养基，琼脂7g/L， pH5.8;(2) 诱导培养基MS+KT1.0mg/L+IAA0.1mg/L+蔗糖30g/L;(3) 增殖培养基MS+KT0.5mg/L+IAA0.1mg/L+白糖30g/L;(4) 壮苗培养基MS+KT0.25mg/L+IAA0.05mg/L+白糖30g/L;(5) 生根培养基1/2MS+NAA0.2 mg/L+IAA O.lmg/L+白糖20g/L;2) 外植体的选取与灭菌在金叶苔草分蘖生长旺盛季节，晴天早晨的9 10点，选择无 病害的优良植株，取高约5 10cm的分蘖芽，去掉上部细长的叶片及底部的根系，整理成具 有生长点、长约1.5cm的一段作为外植体，经灭菌处理后备用；3) 诱导培养将灭菌处理后的外植体在无菌条件下，摘取l 2mm的茎尖，接种在诱导 培养基上，在培养条件下培养30 45天后，从茎尖诱导形成幼芽或丛生芽；4) 增殖培养将诱导形成的幼芽或丛生芽掰成单芽，尽量不要用解剖刀切割，以避免组 培苗基部形成愈伤组织；然后去掉全绿或全白的组培苗，挑选具有金叶的组培苗接到增殖培 养基上，在培养条件下培养30 45天增殖出丛生芽；根据对幼苗数量的需求，每隔30 45 天按同样方法进行幼苗再增殖培养；5) 壮苗培养将增殖出的丛生芽接种到壮苗培养基上，在培养条件下培养20 30天后， 幼苗株高生长达3 5厘米；6) 生根培养将培养的壮苗切成单株后，去掉全绿或全白的组培苗，挑选具有金叶的组培苗接种在生根培养基中进行生根培养，在培养条件下培养20 30天后，幼苗长高成约5 7cm、苗基部长出5 10根细根；7)移栽将生根组培苗移栽于基质中，培育1 2个月至成苗。所述的金叶苔草茎尖培养快速繁殖方法，所述的灭菌处理是整理好的外植体进行预处理，在水溶液中加入重量比为5%的中性洗衣粉和重量比为1%的吐温，浸泡并振荡5 10min，自 来水冲洗20 30min;预处理后的外植体用75%酒精表面消毒30 45s，无菌水冲洗3遍；然 后用次氯酸钠溶液浸泡振荡灭菌10 12min，无菌水冲洗3 5遍；再用0.1 %升汞溶液浸泡振 荡灭菌5 7min,无菌水洗3~5遍。所述的金叶苔草茎尖培养快速繁殖方法，其特征在于，所述的各组培阶段的培养条件是， 培养温度为25土2i:，光照光强为2500 3000Lx，光照时间为16h/d。所述的金叶苔草茎尖培养快速繁殖方法，其特征在于所述的移栽基质由泥炭珍珠岩 蛭石按体积比h 2: 2配制而成。 实施例2:本例中，基本培养基选用MS培养基，琼脂8 g/L， pH5.6;诱导培养基MS+KT 0.5 mg/L+ IAA0.05mg/L+蔗糖30g/L; 增殖培养基MS+KT 0.1mg/L+IAA0.05mg/L+白糖30g/L;壮苗 培养基MS+KT0.1mg/L+IAA0.05mg/L+白糖30g/L;生根培养基1/2MS+NAA0.1 mg/L+IAA 0.05mg/L+白糖20g/L。其余步骤，条件均同于实施例l。实施例3:本例中，基本培养基选用MS培养基，琼脂9 g/L， pH5.7;诱导培养基MS+KT2.0 mg/L+ IAA0.2mg/L+蔗糖30g/L; 增殖培养基MS+KT 1.0mg/L+IAA0.2mg/L+白糖30g/L;壮苗培 养基MS+KT0.5 mg/L+IAA0.2mg/L+白糖30g/L;生根培养基1/2MS+NAA0.5 mg/L+IAA 0.2mg/L+白糖20g/L。其余步骤，条件均同于实施例l。实施例4:本例中，基本培养基选用MS培养基，蔗糖或白糖20 30g/L，琼脂7 9g/L， pH5.6 5.8;诱导培养基MS+KT0.5 2.0mg/L+IAA0.05 0.2mg/L; 增殖培养基MS+KT0.1 1.0mg/L+IAA0.05 0.2mg/L;壮苗培养基MS+KT 0.1 0.5 mg/L+IAA0.05 0.2mg/L;生根 培养基1/2MS+NAA0.1 0.5 mg/L+IAA0.05 0.2mg/L。其余步骤，条件均同于实施例l。除上述实施例外，本发明还可以有其他实施方式。凡采用等同替换或等效变换形成的技 术方案，均落在本发明要求的保护范围。
权利要求
1、一种金叶苔草茎尖培养快速繁殖方法，其特征在于该方法按以下步骤进行1)培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为(1)基本培养基选用MS培养基，蔗糖或白糖20～30g/L，琼脂7～9g/L，pH5.6～5.8；(2)诱导培养基MS+KT 0.5～2.0mg/L+IAA 0.05～0.2mg/L；(3)增殖培养基MS+KT 0.1～1.0mg/L+IAA 0.05～0.2mg/L；(4)壮苗培养基MS+KT 0.1～0.5mg/L+IAA 0.05～0.2mg/L；(5)生根培养基1/2MS+NAA0.1～0.5mg/L+IAA 0.05～0.2mg/L；2)外植体的选取与灭菌选择无病害的优良植株，取高5～10cm的分蘖芽，去掉上部细长的叶片及底部的根系，整理成具有生长点、长约1.5cm的一段作为外植体，经灭菌处理后备用；3)诱导培养将灭菌处理后的外植体在无菌条件下，摘取1～2mm的茎尖，接种在诱导培养基上，在培养条件下培养30～45天后，从茎尖诱导形成幼芽或丛生芽；4)增殖培养将诱导形成的幼芽或丛生芽掰成单芽，尽量不要用解剖刀切割，以避免组培苗基部形成愈伤组织；然后去掉全绿或全白的组培苗，挑选具有金叶的组培苗接到增殖培养基上，在培养条件下培养30～45天增殖出丛生芽；根据对幼苗数量的需求，每隔30～45天按同样方法进行幼苗再增殖培养；5)壮苗培养将增殖出的丛生芽接种到壮苗培养基上，在培养条件下培养20～30天后，幼苗株高生长达3～5厘米；6)生根培养将培养的壮苗切成单株后，去掉全绿或全白的组培苗，挑选具有金叶的组培苗接种在生根培养基中进行生根培养，在培养条件下培养20～30天后，幼苗长高成5～7cm、苗基部长出5～10根细根；7)移栽将生根组培苗移栽于移栽基质中，培育1～2个月至成苗。
2、 根据权利要求1所述的金叶苔草茎尖培养快速繁殖方法，其特征在于所述的培养基， 包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为(1) 基本培养基选用MS培养基，琼脂7g/L， pH5.8;(2) 诱导培养基MS+KT 1.0 mg/L+ IAAO.lmg/L+蔗糖30g/L;(3) 增殖培养基MS+KT0.5mg/L+IAA0.1mg/L+白糖30g/L;(4) 壮苗培养基MS+KT0.25mg/L+IAA0.05mg/L十白糖30g/L;(5) 生根培养基1/2MS+NAA0.2mg/L+IAA0.1mg/L+白糖20g/L。
3、 根据权利要求1所述的金叶苔草茎尖培养快速繁殖方法，其特征在于所述的灭菌处理是整理好的外植体进行预处理，在水溶液中加入重量比为5%的中性洗衣粉和重量比为1% 的吐温，浸泡并振荡5 10分钟，自来水冲洗20 30分钟；预处理后的外植体用75%酒精表 面消毒30 45秒，无菌水冲洗3遍；然后用次氯酸钠溶液浸泡振荡灭菌10 12min，无菌水 冲洗3~5遍；再用0.1 %升汞溶液浸泡振荡灭菌5 7 min，无菌水洗3~5遍。
4、 根据权利要求1所述的金叶苔草茎尖培养快速繁殖方法，其特征在于，所述的各组培 阶段的培养条件是，培养温度为25士2'C，光照光强为2500 3000Lx，光照时间为16h/d。
5、 根据权利要求1所述的金叶苔草茎尖培养快速繁殖方法，其特征在于所述的移栽基质由泥炭珍珠岩蛭石按体积比l: 2: 2配制而成。
全文摘要
本发明涉及一种金叶苔草茎尖培养快速繁殖方法，属植物繁殖技术领域，包括如下步骤培养基的配制、外植体的选取与灭菌、诱导培养、增殖培养、壮苗培养、生根培养、移栽。本发明的优点是外植体采取洗涤剂浸泡预处理和二步灭菌法有效地防止了外植体接种污染率，接种成功率达85％；提出的金叶苔草组培优化培养基针对性强、适用性好，芽的诱导率达90％以上，芽的增殖率每个培养周期达5倍以上，在增殖培养接种时，不要用解剖刀切割，而将丛生芽掰成单芽，避免组培苗基部形成愈伤组织，减少全绿或全白的组培苗分化，金叶组培苗的获得率达95％以上，苗生长速度快，生根率达100％，移栽成活率90％以上，适于大规模工厂化生产。
文档编号C12N5/04GK101248762SQ20081006054
公开日2008年8月27日 申请日期2008年3月27日 优先权日2008年3月27日
发明者吕永平, 刚 徐, 汪一婷, 牟豪杰, 陈剑平 申请人:浙江省农业科学院