专利名称：：通过调节赖氨酰tRNA合成酶的细胞水平控制癌症转移或癌细胞移动的方法
技术领域：
：本发明涉及赖氨酰tRNA合成酶的新功能，具体地说，涉及利用所述的新功能调节赖氨酰tRNA合成酶的细胞内水平，从而调节癌症转移或癌细胞移动的方法，以及用于预防或治疗癌症的具有抑制KRS表达的结构的表达载体的用途，用于预防或治疗癌症的KRS活性抑制剂的用途，癌症转移或癌细胞移动调节制剂的筛选方法，及阻碍KRS与67LR相互作用的制剂的筛选方法。
背景技术：
：癌(或肿瘤)是非正常不可控且无序的细胞繁殖产物。尤其是在具有破坏性的生长性、渗透性及转移性时，则被归类为恶性。渗透性是指渗透或破坏周围组织的性质，通常意味着破坏形成组织边界的底层而使肿瘤局部传播，并经常流入到体内的循环系统中。转移通常意味着肿瘤细胞借助淋巴管(Iymphotic)或血管扩散到不同于原发位置的别处。转移还意味着通过浆膜腔或其它空间直接延伸，使肿瘤细胞移动。目前，癌症主要通过三种治疗方法，S卩外科手术、放射线照射及化学疗法中的一者或多者的组合进行治疗。手术包括了去除大部分疾病组织的方法。尽管上述外科手术对去除位于特定部位例如乳腺、结肠及皮肤的肿瘤有效，但不能应用于位于如脊椎的部分区域的肿瘤，或者如白血病的分散性肿瘤疾病的治疗中。化学疗法能够瓦解细胞复制或细胞代谢，常用于乳腺癌、肺癌及睾丸癌的治疗，但对于接受癌症治疗的患者而言，肿瘤疾病治疗中使用的全身性化学疗法产生的副作用成为了最主要的问题。在上述副作用中，恶心和呕吐时最常见和最严重的副作用。因化学疗法而产生的副作用对患者的生活产生很大影响，并且可能使患者迅速改变对于治疗的顺应性。此外，由于化学治疗剂具有与其相关的副作用，因此此类药物存在着在给药时需要注意的剂量限制性毒性(DLT，DoseLimitingToxicity).例如，各种抗癌剂例如抗代谢物质细胞毒素制剂5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤及抗肿瘤抗生素(例如，阿霉素)等对黏膜炎具有剂量限制性毒性。在大部分上述源于化学疗法的副作用严重的情况下，需要住院或者为治疗疼痛而使用镇痛剂。因此，因化学治疗剂和放射线治疗引起的副作用，已成为癌症患者临床处置时的主要问题。基因治疗是指利用DNA重组方法，将治疗基因导入到患者的细胞内，使基因缺陷得到校正，或者为细胞提供新的功能，通过人体细胞的遗传转化，治疗或预防各种遗传疾病、癌症、心血管疾病、感染性疾病，以及如自身免疫疾病等疾病的方法。S卩，将治疗基因传递至体内所需的脏器，使治疗用或正常蛋白质在细胞内表达，从而治疗疾病的方法被称作基因治疗。基因治疗与基于普通药物的治疗相比，具有优秀的选择性，并且能够改善其它治疗方法难以调解的疾病治愈率及治疗速度，因此可以长时间应用。基因治疗是一种治疗并消除疾病原因，而非单纯治疗疾病症状的方式。为使上述基因治疗更加有效，需要一种利用治疗基因所需的靶细胞进行传递，以期得到更高的表达效率3的基因传递技术。基因载体作为用于将所需的治疗基因导入到对象细胞中的必要载体，理想的基因载体应该对人体无害、易于大量生产、能够高效地进行基因传递、并使基因能够持续表达。基因载体技术作为基因治疗技术中的核心要素，目前在基因治疗中广泛使用的代表性基因载体，包括如腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒的病毒性载体，及如脂质体、聚乙烯亚胺的非病毒性载体。基因治疗方案中控制肿瘤细胞的方案，包括了使用肿瘤控制基因的方法、使用肿瘤选择性杀伤病毒的方法、使用凋亡基因的方法、及导入免疫调节基因的方法等。使用肿瘤控制基因的方法，是以相当数目的癌症患者中存在基因缺损或变形的如P53的肿瘤控制基因为原型，将其传递到人体中治疗癌症的方法；使用肿瘤选择性杀伤病毒的方法，是利用癌组织中发生变形的肿瘤抑制基因的活性，将仅能在肿瘤细胞中选择性增殖的病毒基因载体导入人体，获得治疗效果的方法；二者均为直接杀伤肿瘤细胞的方法。无论是使用凋亡基因的方法，或是导入如HSV-TK的易感基因、诱导肿瘤细胞凋亡的方法，均属于同样的范畴。相反，导入免疫调节基因的方法，是将增强抗肿瘤免疫反应的白细胞介素12、白细胞介素4、白细胞介素7、干扰素伽马、肿瘤坏死因子等基因传递到人体中，诱导T细胞识别肿瘤，或者阻断肿瘤诱导蛋白，诱导细胞凋亡，间接治疗疾病的方案。类似地，使血管抑素、内皮抑素等血管生成抑制因子表达，阻断肿瘤的营养供给使其坏死的方法，同样作为疾病间接治疗方案取得广泛共识。肿瘤转移是癌症存活率中的决定因素。67kDa层粘连蛋白受体(67LR)作为包埋(embedded)在原生质膜中的非整合型受体，与癌的侵袭(浸润)和转移有关(Nelson，J.etal.The67kDalamininreceptorstructure,functionandroleindisease.Biosci.Rep.28,33-48(2008))67LR通过其37kDa前体(37LRP)的聚合(dimerization)生成，该变化过程的详细的分子机制不详。37LRP与多核糖体形成相关的核糖体亚单位p40相同(Auth,D.&Brawerman,G.A33-kDapolypeptidewithhomologytothelamininreceptor-componentoftranslationmachinery.Proc.Natl.Acad.Sci.USA89,4368-4372(1992))。经观察，67LR在各种不同种类的癌症中具有高浓度(Nelson,J.etal.The67kDalamininreceptor-structure，functionandroleindisease.Biosci.Rep.28,33-48(2008)；Menard，S.，Castronovo，V.,Tagliabue，E.&Sobel,Μ.Ε.Newinsightsintothemetastasis-associated67kDlamininreceptor.J.Cell.Biochem.67，155-165(1997))。然而，膜内存在的67LR的调节机制或分子机制尚未表明。KRS属于用于蛋白质合成的同族(cognate)氨基酸和使tRNA结合的赖氨酰tRNA合成酶(ARSs)ο上述原酶除了催化活性之外，还具有多效性(pleiotropic)特征(Park，S.G.，Ewalt,K.L.&Kim,S.Functionalexpansionofaminoacyl-tRNAsynthetasesandtheirinteractingfactors:newperspectivesonhousekeepers.TrendsBiochem.Sci.30，569-574(2005))。同时，含有KRS的少数哺乳类动物的ARS为了对结构蛋白的多种功能进行调节，形成起分子容器(molecularreservoir)作用的(Ray，P.S.，Arif,A.&Fox,P.Macromo1ecu1arcomplexesasdepotsforreleasableregulatoryproteins.TrendsBiochem.Sci.32，158-164(2007))大分子复合体(Lee,S.W.，Cho,B.H.，Park,S.G.&Kim,S.Aminoacyl-tRNAsynthetasecomplexes:beyondtranslation.J.Cell.Sci.117,3725-3734(2004)；Han,J.M.，Kim,J.Y.&Kim，S.MolecularnetworkandfunctionalimplicationsofmacromoIecuIartRNAsynthetasecomplex.Biochem.Biophys.Res.Commun.303，985-993(2003))。人类KRS中含有与RNA及其它蛋白质之间相互作用相关的固有的N末端延长部位(Rho,S.B.etal.Geneticdissectionofprotein-proteininteractionsinmulti—tRNAsynthetasecomplex.Proc.Natl.Sci.Acad.USA96,4488-4493(1999)；Francin,Μ.，Kaminska,Μ.，Kerjan,P.&Mirande.Μ.TheN-terminaldomainofmammalianLysyl-tRNAsynthetaseisafunctionaltRNA-bindingdomain.J.Biol.Chem.277，1762—1769(2002))。
发明内容技术问题为了确认肽与人类KRS的功能多样性的相关意义，本发明中的发明者们分离出人类KRS的N末端的116个氨基酸肽，作为利用酵母双杂交系统从HeLa细胞株cDNA文库中筛选出于人类KRS结合蛋白的探针(bait)。通过所述的筛选，发明者们确认了本发明中具有结合可能性的蛋白质之一37LRP/p40，并且探明了基于KRS与层粘连蛋白受体之间的相互作用的功能相关性。其结果，本发明揭示了赖氨酰tRNA合成酶(lysyl-t-RNAsynthetase,KRS)通过稳定原生质膜中的67LR促进细胞移动及癌症转移等，从而揭示其通过原生质膜的层粘连蛋白受体对癌症转移或癌细胞移动产生影响。本发明的目的在于提供与癌症转移或癌细胞移动相关的赖氨酰tRNA合成酶(lysyltRNAsynthetase,KRS)的新用途。为实现上述目的，本发明提供了通过调节赖氨酰tRNA合成酶(LysyltRNAsynthetase,KRS)的细胞内顺序以调节癌症转移(cancermetastasis)的方法。为实现本发明中的又一目的，本发明提供了通过调节赖氨酰tRNA合成酶的细胞内顺序以调节癌细胞移动(cancercellmigration)的方法。为实现本发明中的又一目的，本发明提供了含有表达载体作为作为有效成分的癌症预防及治疗用组合物，该表达载体中含有启动子及可被启动并与其连接的编码KRS的多核苷酸的反义RNA(antisenseRNA)或siRNA的编码多核苷酸。为实现本发明中的又一目的，本发明提供了将表达载体以有效量给予需要它的个体的癌症预防及治疗方法，该表达载体中含有启动子及可被启动并与其连接的编码KRS的多核苷酸的反义RNA(antisenseRNA)或siRNA的编码多核苷酸。为实现本发明中的又一目的，本发明提供了用于制造癌症治疗剂的表达载体的用途，该表达载体中含有启动子及可被启动并与其连接的编码KRS的多核苷酸的反义RNA(antisenseRNA)或siRNA的编码多核苷酸。为实现本发明中的又一目的，本发明提供了癌症预防及治疗用组合物，该组合物中含有KRS活性抑制剂作为有效成分。为实现本发明中的又一目的，本发明提供了将KRS活性抑制剂以有效量给予需要它的个体的癌症预防及治疗方法。为实现本发明中的又一目的，本发明提供了用于制造癌症治疗剂的KRS活性抑制剂的用途。为实现本发明中的又一目的，本发明提供了癌症转移或癌细胞移动调节制剂的筛选方法，该方法包括以下步骤(a)在试验制剂存在下使KRS与试验制剂接触；(b)测定KRS的活性，筛选使KRS的活性发生变化的试验制剂；(c)测试筛选出的制剂是否调节癌症转移或癌细胞移动。为实现本发明中的又一目的，本发明提供了阻碍KRS与67LR之间的相互作用的制剂的筛选方法，该方法包括以下步骤(a)在试验制剂存在下，使KRS、层粘连蛋白受体(67LR)及试验制剂接触；(b)测试所述的试验制剂是否对KRS与层粘连蛋白受体的相互作用(interaction)进行调节。为实现本发明中的又一目的，本发明提供了诊断肺癌或乳腺癌的方法，该方法包括以下步骤(a)在样品中分析67LR是否过表达；(b)在67LR过表达的样品中，分析KRS是否过表达。技术方案以下对本发明进行详细说明。本发明初次阐明了KRS对癌症转移或癌细胞移动产生的影响。S卩，本发明阐明了KRS通过原生质膜的层粘连蛋白受体对癌症转移或癌细胞移动产生影响的事实。^JL在无其它定义的情况下，本发明说明书中使用的所有技术性及科学性术语，代表普通技术人员在通常情况下所理解的意义。以下参考文献提供了本发明说明书中所使用的、具有各种术语在通常情况下的定义的技术(skill)中的一种。Singletonetal.,DICT10NARY0FMICROBIOLOGYANDMOLECULARBIOLOTY(2ded.1994)；THECAMBRIDGEDICTIONARY0FSCIENCEANDTECHNOLOGY(Walkered.,1988)；及Hale&Marham，THEHARPERC0LLINSDICTI0NARYOFBIOLOGY.此外，以下定义为读者(reader)提供本发明实施方面的帮助。本发明中的“表达(expression)”代表在细胞中生成蛋白质或核酸。本发明中的“宿主细胞(hostcell)”代表含有借助任意方式(例如点冲击法、磷酸钙沉淀法、显微注射法、转化法、病毒感染等)向细胞内导入的杂交DNA的原核或真核细胞。本发明中的“分离得到(isolated)”代表由其原始环境(例如如果是自然生成的则为自然环境)去除的物质。例如，自然生成的核酸、多肽，此外虽然活体动物体内存在的细胞并非分离得到，但由相同的多核苷酸、多肽或共存物质的一部分或全部分离出的(separated)细胞，无论在此后是否重新导入自然系统，均为分离得到(isolated)。所述的核酸可以是载体的一部分，并且/但是所述的核酸或多肽可以是组合物的一部分，并且所述的载体或组合物不是自然环境的一部分，而是分离得到的。本发明中的“调节(modulate)"KRS的生物活性代表KRS的细胞内水平的变化。KRS活性的调节可以是上调(up-regulation)(即，激活或促进)或下调(down-regulation)(即，阻碍或抑制)。例如，调节可以引起KRS的细胞内水平、KRS蛋白质的稳定性、KRS的酶6修饰(例如磷酸化)、结合特性(例如与靶转录调节因子结合)，或KRS的其它生物学、功能学及免疫学特性的变化。KRS的生物活性变化能够由翻译效率引起，例如，KRS基因表达的增加或减少，编码KRS蛋白的mRNA的稳定性。KRS调节因子(modulator)的作用方式(mode)，例如，也可以通过KRS蛋白或与其编码基因的结合直接进行。此外，所述的变化也可以通过与调节KRS的其它物质(例如使KRS特异性磷酸化的激酶)结合和/或修饰(例如通过酶学方式)间接进行。本发明中的“多肽(polyp印tide)”可以与“多个多肽(polyp印tides)”或“(多个)蛋白质”互换使用，例如，与在自然状态下的蛋白质中经常发现到的一样，代表氨基酸残基的聚合体。本发明中的“KRS多肽”代表作为赖氨酰tRNA合成酶已知的多肽。所述的KRS多肽可以是具有如序号1所示的氨基酸序列的多肽(GenbankAccessionNo.NP_005539.1)。此外本发明中的KRS包括其功能性等同物。所述的功能性等同物代表与序号1所示氨基酸序列具有至少70%以上，优选80%以上，更优选90%以上序列相同性(S卩，同一性)的多肽。例如，包括具有70^71^721^73%,74%,75%,76%,77%,78%,79%,80%,81%,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、100%的序列相同性的多肽，代表与序号1所示多肽表现出实质上同质的生理活性的多肽。其中，“实质上同质的生理活性”，代表与原生质膜的层粘连蛋白受体相互作用，并且调节癌症转移或癌细胞移动。所述的功能性等同物，可以产生序号1中的氨基酸序列中的一部分附加、置换或缺失的结果。上述氨基酸的置换优选为保存性置换。自然存在的氨基酸的保存性置换例如脂肪族氨基酸(Gly,Ala,Pro)、疏水性氨基酸(lie,Leu,Val)、芳香族氨基酸(Phe,Tyr,Trp)、酸性氨基酸(Asp,Glu)、碱性氨基酸(His,Lys,Arg,Gin,Asn)及含硫氨基酸(Cys,Met)。此外，所述的功能性等同物中，在本发明中的KRS多肽的氨基酸序列上，还包括氨基酸的部分缺失的变形体。所述的氨基酸的缺失或置换，优选地位于与本发明中的多肽的生理活性非直接相关的区域。此外，氨基酸的缺失优选地位于与KRS多肽的生理活性非直接相关的部分。同时，在所述的KRS多肽的氨基酸序列的两末端或序列内，还包括附加少数氨基酸的变形体。此外，在本发明中的功能性等同物的范围内，在保持本发明中的多肽的基本骨架及其生理活性的同时，还包括了多肽的部分化学结构变形产生的多肽衍生物。例如，使本发明中的多肽的稳定性、保存性、挥发性或溶解度等发生改变的结构改变也包括在内。本说明书中的序列相同性及等同性，在对KRS的氨基酸序列(序号1)和互补序列进行排列后导入空白(gaps)后，依照KRS的氨基酸序列的互补序列的氨基酸残基的百分比定义。在必要的情况下，为获得最大百分比序列等同性，作为序列等同性的部分，不考虑保存性置换。此外，KRS的氨基酸序列的N-末端、C-末端或内部延伸、缺失或插入，并不能解释为对序列等同性或相同性产生影响的序列。此外，所述的序列等同性可由为比较两个多肽的氨基酸序列的相似部分而使用的普通的标准方法决定。如BLAST或FASTA的计算机程序，能够使两个多肽分别以氨基酸的最佳配对进行排列(根据一个或两个序列的全部序列，或一个或两个序列的预测部分)。所述的程序提供了默认开启罚分(defaultopeningpenalty)及默认空白罚分(defaultgappenalty)，并且提供了能够与计算机程序关联使用的如PAM250(标准计分矩阵；Dayhoffetal.，inAtlasofProteinSequenceandStructure，vol5，supp3，1978)的计分矩阵。例如，百分比等同性可通过如下方式计算。将一致序列(identicalmatches)的总数乘以100，之后除以对应跨度(matchedspan)内的较长序列的长度与为排列两序列而导入到较长序列内的空白(gaps)数目之和。本发明中的KRS多肽可通过自然提取或遗传工程学方法制作而成。例如，利用普通方法制作所述的KRS或编码其功能性等同物的核酸(例如序号2(GenbankAccessionNo.D32053))o所述的核酸可通过使用合适的引物进行PCR扩增制作而成。还可以利用业界公知的标准方法作为其它方法，例如，使用DNA自动合成机(Biosearch或AppliedBiosystems公司销售)合成DNA序列。制备的核酸插入到载体中，利用由此形成的重组表达载体使宿主细胞转化；该载体包括可启动地连接(operativelylinked)于所述核酸，并且调节核酸的表达的一个以上的表达调节序列(expressioncontrolsequence)(例如启动子，增强子等)。在适合所述的核酸表达的合适的培养基及条件下，对生成的转化体进行培养，从培养物中回收通过所述的核酸表达的、实质上纯净的多肽。所述的回收可使用业界公知的方法(例如色谱)进行。上述“实质上纯净的多肽(substantiallypurepolyp印tide)”代表本发明中的多肽实质上不包括任何来自宿主细胞的其它蛋白质。用于本发明中的多肽合成的遗传工程方法，可以参照以下文献=Maniatisetal.,MolecularCloning；AlaboratoryManual，ColdSpringHarborlaboratory,1982；Sambrooketal.,MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborPress，N.Y.，Second(1998)andThird(2000)Editions；GeneExpressionTechnology,MethodinEnzymology,GeneticsandMolecularBiology,MethodinEnzymology,Guthrie&Fink(eds.),AcademicPress，SanDiego,Calif，1991；及Hitzemanetal.，J.Biol.Chem.，255:12073-12080，1990.此外，本发明中的多肽可容易地通过业界公知的化学合成(CreightonJroteins；StructuresandMolecularPrinciples,W.H.FreemanandCo.，NY，1983)制备得到。作为代表性的方法且不限定于此，包括了液相或固相合成、片段缩合、F-MOC或T-BOC化学法(ChemicalApproachestotheSynthesisofPeptidesandProteins,Williamsetal.,Eds.,CRCPress,BocaRatonFlorida,1997；APracticalApproach,Atherton&Sheppard,Eds.，IRLPress,Oxford,England,1989)。本发明中的67kDa层粘连蛋白受体(67LR)，作为包埋(embedded)在原生质膜中的非整合型受体，可以具有例如GenbankAccessionNo.NM_002295,S37431,AF284768,S37431,AF284768,J03799,XP370865，XP001083023.中记录的碱基序列或氨基酸序列。本发明中的“核酸”、“DNA序列”或“多核苷酸”代表单链或多链形态的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸。除非有不同的限制，通过与自然生成的核苷酸类似的方法混合在核酸中的天然核苷酸的公知的类似物也包括在内。本发明中“编码所述的KRS的多核苷酸”，可以具有由序号1表示的氨基酸序列或与其具有至少70%以上的序列相同性的氨基酸序列的编码碱基序列。所述的核酸包括全部DNA、cDNA及RNA。即，所述的多核苷酸，可以具有由序号1表示的氨基酸序列或与其具有至少70%以上的序列相同性的氨基酸序列的编码碱基序列，或者与所述的碱基序列互补的碱基序列。优选地，具有由序号2表示的碱基序列。所述的核酸可通过自然分离得到，或者如上所述，通过遗传工程学方法制备得到。尽管本发明中的“类似物(analog)”与标准物质(referencemolecule)结构类似，但标准物质的特异性取代基通过置换被代替，因此代表目标或调节方法变型得到的物质。在与标准物质进行比较时，类似物如从业者所预想的，具有相同或类似的、或得到提高的有用性(utility)。为阐明具有得到提高的性质(例如，对目标物质具有更高的亲和力)的公知的化合物变异体的类似物的合成及筛选，使用药理化学领域公知的方法。本发明中的“同源体(homologues)”在提及蛋白质和/或蛋白质序列的情况下，在同族蛋白(commonancestralprotein)或蛋白质序列中表现为自然来源或人工来源。类似地，核酸和/或核酸序列在它们通过自然方式或人工方式来源于同族核酸或核酸序列时相同源。本发明中的“有效量(effectiveamount)”代表在细胞或组织内，改变KRS的生物活性(例如，细胞内水平等)，使其不同于正常细胞或组织的作用，或者癌症转移或癌细胞移动形态与对照组相比，表现出有义变化的量。本发明中的“接触(contacting)”代表其通常的意义(normalmeaning)，S卩，使两种以上的制剂(例如两个多肽)结合(combine)，或者使制剂与细胞(例如蛋白质与细胞)结合。接触可以在试管内(invitro)发生。例如，在试管(testtube)或其它容器(container)内使两者以上的制剂结合，或者使试验制剂与细胞、或细胞溶解物与试验制剂结合。此外接触也可以在细胞或体内(insitu)发生。例如，使编码两个多肽的重组多核苷酸在细胞内共表达(coexpression)，从而在细胞或细胞溶解物中使两个多肽接触。本发明中的“制剂(agent)”或“试验制剂(testagent)”，包括了任意的物质(substance)、分子(molecule)、兀素(element)、化合物(compound)、实体(entity)或它们的组合物。例如，虽然不限于此，包括了蛋白质、多肽、有机小分子(smallorganicmolecule)、多糖类(polysaccharide)、多核苷酸等。此外还可以是天然产物(naturalproduct)、合成化合物或化学化合物或两种以上物质的组合。在未特别指定的情况下，制剂、物质及化合物可以互换地(interchangeably)使用。具体地说，可通过本发明中的筛选方法筛选的试验制剂，包括多肽、β-转类似物(beta-turnmimetics)多糖类、磷脂、激素、前列腺素、类固醇、芳香族化合物、杂环化合物、苯二氮卓类(benzodiazepines)、低聚N-取代甘氨酸(oligomericN—substitutedglycines)、寡氛基甲酸酉旨(oligocarbamates)、糖类(saccharides)、月旨肪酸、嘌呤、嘧啶，或它们的衍生物、结构类似物或组合。一些试验制剂可以是合成物质，另一些试验制剂可以是天然物质。所述的试验制剂可通过包括合成或天然化合物库在内的较大范围和多种来源得到。组合(combinatorial)库可由能够通过分步方式合成的多个种类的化合物生成。多数组合库中的化合物可通过ESL(encodedsyntheticlibraries)方法(TO95/12608,WO93/06121、WO94/08051、WO95/395503及WO95/30642)制得。肽库可通过噬菌体展示法(W091/18980)制得。细菌、霉菌、植物及动物提取物形态的自然化合物库可通过商业来源获得，或者在旷野(field)中收集得到。公知的药理学(pharmacological)制剂，为制造结构类似物，可应用如酰化、烷基化、酯化反应(esterification)、酰胺化反应(amidification)的定向(direct)或随机的化学修饰。所述的试验制剂可以是自然生成的蛋白质或其片段。上述试验制剂可通过自然来源(naturalsource)，例如细胞或组织溶解物获得。举例说明，多肽制剂库可通过普通方法生成，或通过商业方式的cDNA库购入。所述的试验制剂可以是肽，例如具有约5-30个氨基酸的肽，约5-20个更加，约7-15个尤佳。所述的肽可以是自然生成的蛋白质、随机肽、或“偏向的(biased)”随机肽的切割物。此外，所述的制剂可以是“核酸”。核酸试验制剂可以是自然生成的核酸、随机核酸、或“偏向的(biased)”随机核酸。例如，类似地，如上述所记录的，可使用在原核或真核基因组的切割物。此外，所述的试验制剂可以是小分子(例如，分子量约1，000以下的分子)。在用于小分子调节制剂筛选的方法中，优选地，可以应用高通量鉴别(highthroughputassay)0大量的鉴别可用于所述的筛选中(Shultz,Bioorg.Med.Chem.Lett.，8:2409-2414,1998；Weller,Mol.Drivers.,3:61-70,1997；Fernandes,Curr.Opin.Chem.Biol.,2:597-603,1998；andSittampalam,Curr.Opin.Chem.Biol.，1:384-91,1997)。通过本发明中的方法筛选的试验制剂库，可根据KRS或其片段或类似物的结构研究制得。上述结构研究能够阐明具有与KRS结合的功能性的试验制剂。KRS的三维结构可通过多种方法，例如，通过晶体结构及分子模型(crystalstructureandmolecularmodeling)进行研究。使用X-射线晶体学(X_raycrystallography)的蛋白质结构研究方法可通过文献得知PhysicalBio-Chemistry,VanHolde,K.Ε.(Prentice-Hall,NewJersey1971),pp.221-239,andPhysicalChemistrywithApplicationstotheLifeSciences,D.Eisengerg&D.C.Crothers(BenjaminCummings,MenloPark1979)。针对KRS的结构进行的计算机模拟，为了试验制剂筛选设计提供了多种手段。分子模拟方法可通过文献得知U.S.Pat.No.5，612，894andU.S.Pat.No.5，583，973。此外蛋白质结构可通过中子衍身寸(neutrondiffraction)禾口NMR(nuclearmagneticresonance)结晶PhysicalChemistry,4thEd.Moore,W.J.(Prentice-Hall,NewJersey1972)andNMRofProteinsandNucleicAcids,K.Wuthrich(ffiley-Interscience,NewYork1986)。以下对本发明进行详细说明。本发明的发明人揭示了，通过将KRS转座(translocation)在原生质膜上使其与67LR相互作用，促进肿瘤(或癌)细胞的移动，并对癌症转移(metastasis)产生影响。同时，通过小鼠的体内试验，揭示出KRS的过表达或表达抑制能够调节肿瘤(或癌)细胞的转移。因此，本发明提供了对赖氨酰tRNA合成酶(LysyltRNAsynthetase,KRS)的细胞内水平进行调节(modulating)，调节癌症转移(cancermetastasis)的方法。更具体地，在使本发明中的赖氨酰tRNA合成酶的细胞内水平降低的情况下，能够抑制癌症转移，并且在赖氨酰tRNA合成酶的细胞内水平升高的情况下，能够促进癌症转移。细胞内水平的降低或升高，如上述记录所示，可由技术人员通过公知的各种方法进行调节。例如，尽管不限于此，可在转录阶段的调节或转录后阶段中的调节，对细胞内水平进行调节。转录阶段中的调节，可通过技术人员公知的促进基因表达的方法，例如，可通过制造与KRS或编码其功能性等同物的多核苷酸的重组表达载体促进所述的基因表达的方法，或者在KRS或编码其功能性等同物的基因周围插入促进所述的基因表达的表达调节序列的方法，或者用于抑制基因表达的方法，例如诱导启动子或基因部位的突变，抑制启动子活性或蛋白质功能的方法，使反义(antisense)基因表达的方法，siRNA或微小RNA(microRNA)方法等实施。转录后阶段中的调节，可通过技术人员公知的促进或抑制蛋白质表达的方法，例如，以KRS或编码其功能性等同物的基因为模板促进或抑制转录mRNA的稳定性的方法，促进蛋白质或多肽的稳定性的方法，或者促进或阻碍蛋白质或多肽的活性的方法实施。所述方法的更具体的例子，可通过作用于如1组内含子型、MlRNA型、锤头(hammerhead)型、发卡(hairpin)型或微小RNA型等转录mRNA的RNA的编码DNA序列转化，或者通过具有与靶基因序列相同或类似的序列的DNA的转化，诱导共抑制(cosuppression)产生。优选地，本发明中KRS或其功能性等同物的细胞内水平的调节，可通过增加或减少编码所述多肽的多核苷酸的表达的方法实施。上述增加或减少的方法，尽管可使用技术人员公知的方法，例如，制造连接KRS或编码其功能性等同物的多核苷酸的重组表达载体促进其表达，或者制造将所述的多核苷酸的反义或siRNA多核苷酸连接于启动子的重组表达载体，以减少其表达。此时，所述的KRS或编码其功能性等同物的多核苷酸，可优选序号2表示的碱基序列。同时，本发明提供了调节赖氨酰tRNA合成酶的细胞内水平，调节癌细胞移动(cancercellmigration)的方法，对细胞内水平的调节等，如上述记录所示。此外，本发明中的KRS在抑制其表达的情况下，抑制了肿瘤(或癌)的转移，因此本发明提供了含有启动子及可被启动并与其连接的抑制KRS的表达的结构基因的表达载体，或KRS的抗体作为有效成分的，癌症预防及治疗用组合物。上述KRS表达抑制结构基因，可以是编码KRS的多核苷酸的反义RNA(antisenseRNA)或siRNA。本发明中的组合物可应用的疾病可以是癌症。所述的癌包括但不限于，大肠癌，肺癌，肝癌，胃癌，食道癌，胰腺癌，胆囊癌，肾癌，膀胱癌，前列腺癌，睾丸癌，宫颈癌，子宫内膜癌，绒毛癌，卵巢癌，乳腺癌，甲状腺癌，脑癌，头颈部癌，恶性黑色素瘤，淋巴瘤，再生障碍性贫血等。所述的“启动子”代表在特定的宿主细胞内可启动地连接的调节核酸序列的表达的DNA序列，“可启动地连接(operablylinked)”代表一个核酸片段与另一核酸片段结合，并且其功能或表达受另一核酸片段的影响。同时，还可以包括用于调节转录的随机操作序列，编码合适的mRNA的核糖体结合位点的序列，及调节转录和翻译的终止序列。所述的启动子可使用在全部时间段内始终诱导目的基因的表达的启动子(constitutivepromoter)，或者在某个时刻诱导目的基因的表达的启动子(induciblepromoter)。例如:SV40启动子，CMV启动子，CAG启动子(HitoshiNiwaetal.，Gene,108193-199，1991；Monahanetal.，GeneTherapy,7:24-30,2000),CaMV35S启动子(Odelletal.，Nature313:810-812,1985)，Rsyn7启动子(美国专利申请08/991，601)，水稻(riceactin)启动子(McElroyetal.,PlantCell2:163_171，1990)，泛素启动子(Christensenetal.，PlantMol.Biol.12:619_632，1989)，ALS启动子(美国专利申请08/409，297)等。此外还可以使用美国专利5，608，149,5,608，144,5,604，121,5,569，597,5,466，785、5，399，680,5,268，463、及5，608，142等中公开的启动子。此外，本发明提供了癌症预防及治疗方法，它包括了含有启动子及可启动地与其连接的抑制KRS的表达的结构基因的表达载体或者KRS的抗体，并给予所需个体有效的量。此时，结构基因与上述记录相同，因此本发明提供了癌症预防及治疗方法，它包括了含有启动子及可启动地与其连接的编码KRS的多核苷酸的反义RNAfentisenseRNA)或siRNA的编码多核苷酸的表达载体或者KRS的抗体，并给予所需个体有效的量。本发明中的“有效的量”是指本发明的表达载体在给药对象的个体体内，表现出癌症预防或治疗的作用的量，所述的“个体(subject)”可以是动物，优选哺乳动物，特别是人类，也可以是来源于动物的细胞、组织、器官等。所述的个体可以是需要治疗的患者(patient)0此外，本发明提供了用于制造癌症治疗剂的，含有启动子及可启动地与其连接的抑制KRS的表达的结构基因的表达载体或者KRS的抗体的用途。更具体地，本发明提供了用于制造癌症治疗剂的，含有启动子及可启动地与其连接的编码KRS的多核苷酸的反义RNA(antisenseRNA)或siRNA的编码多核苷酸的表达载体或者KRS的抗体的用途。上述启动子、KRS、表达载体、适用的癌症如上述记载。上述KRS的抗体代表指示KRS的抗原性部位的特异性蛋白分子。从本发明的目的来说，所述的抗体代表与KRS蛋白特异性结合的抗体，包括多克隆抗体、单克隆抗体和重组抗体。如上所述，KRS抗体的生产，可使用业界公知的技术容易地进行制造。多克隆抗体的制造，可使用业界公知的，将所述的KRS蛋白抗原注射到动物体内，并由动物采血，得到含有抗体的血清的方法进行生产。这些多克隆抗体可通过山羊、兔、羊、猴、马、猪、牛、狗等任意动物宿主进行制造。单克隆抗体可使用业界公知的杂交瘤法(hybridomamethod)(参考Kohler及Milstein(1976)EuropeanJounralofImmunology6:511_519)，或者抗体库(Clacksonetal,Nature,352:624-628,1991；Marksetal，J.Mol.Biol.，222:58，1—597，1991)技术进行制造。在杂交瘤细胞方法中，使用注射过肺癌诊断标记蛋白质抗原的如小鼠的免疫学适宜的宿主动物来源的细胞，其余作为一个组，使用癌症或骨髓瘤细胞株。这两组细胞，通过如聚乙二醇的业界公知的方法融合，融合后的抗体-分泌细胞通过标准的组织培养方法增殖。通过基于有限稀释法(limiteddilutiontechnique)的克隆，获得均勻的细胞组，之后根据标准技术，生产处KRS蛋白的特异性抗体，从而利用标准技术在试管内或生物体内大量培养杂交瘤细胞。上述杂交瘤细胞产生的单克隆抗体，可以不经净化使用，但要获得最佳效果，需要通过业界公知的方法精致使用，使其具有高纯度。噬菌体抗体库的方法，是获取存在于细胞内的多种肺癌标记的抗体基因(Singlechainfragmentvariable，scFv形态)并以融合蛋白形态表达，可在试管内制作抗体库，并由该库中分离制作出单克隆抗体的方法。通过所述的方法制造的抗体，可通过凝胶电泳，透析，盐沉淀，离子交换层析，亲和层析等方法分离。此外，本发明中的抗体，是具有2个整个长度的轻链，及具有2个整个长度的重链的完整形态。不仅如此，还包括了抗体分子的功能性片段。抗体分子的功能性片段是指，能够保持抗原结合功能的片段，包括Fab，F(ab，)，F(ab，)2及Fv等。同时，本发明中揭示了在使KRS的细胞内水平减小的情况下抑制癌症转移，并将其应用在癌症预防及治疗中的观点，因此本发明提供了含有抑制KRS的活性的制剂作为有效成分的癌症预防及治疗用组合物。同时，本发明提供了癌症预防及治疗方法，该方法将抑制KRS的活性的制剂作为其必需成分，以有效量给予个体。并且提供了用于治疗癌症治疗12剂的，抑制KRS的活性的制剂的用途。癌症、个体、有效的量与上述记录相同。KRS的活性抑制制剂能够抑制KRS的表达，即，抑制mRNA或蛋白质水平上的表达，例如，可以是KRS的antisenseRNA或siRNA，并且可以是抑制表达出的KRS的活性的竞争性抑制剂(competitiveinhibitor)或非竞争性抑制剂，例如KRS的抗体，但不限于此。在减少KRS的细胞内水平的情况下，能够抑制癌症转移并将其应用在癌症的预防和治疗中，因此组合物、方法及用途不仅可以自身单独使用，而且能够与传统公知的多种癌症预防及治疗方法或抗癌剂结合使用。即，本发明中的组合物、方法等能够抑制癌症转移，因此与传统抗癌剂或癌症预防及治疗方法结合用于治疗，则能够抑制癌症的转移，从而能够通过肿瘤部位的治疗，有效缓解癌症。本发明中可连接于多肽的抗癌剂或癌症预防及治疗方法，如果是治疗传统癌症，则可不受限制地使用。例如，抗癌剂包括紫杉醇，阿霉素，长春新碱，柔红霉素(daunorubicin),长春碱(vinblastine),方文线菌素_D(actinomycin-D)、多西他赛(docetaxel),依托泊昔(etoposide),替尼泊试(teniposide),比生群(bisantrene),高三尖杉酯(homoharringtonine)，格列卫(Gleevec;STI_571)，顺钼(cisplain)，5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil),可霄素(adriamycin),甲氛蝶吟(methotrexate),马禾U兰(busulfan),苯丁酸氮芥(chlorambucil)，环磷酰胺(cyclophosphamide)，马法兰(melphalan)，氮芥(nitrogenmustard)，亚硝基脲(nitrosourea)等。所述的制剂与本发明中的组合物或预防及治疗方法的结合，可根据抗癌剂的种类和量，合适地使用业界公知的技术实施。本发明的表达载体、KRS抗体或KRS的活性抑制制剂，可以口服或非口服给药。口服给药还包括舌下给药。非口服给药包括皮下注射、肌肉注射和静脉注射。上述表达载体，KRS抗体或抑制KRS活性的制剂，与药学上容许的载体混合，可制备成各种药学剂型的形态。所述的“药学上容许”意味着生理上容许，在应用于人时，通常不产生如胃肠功能紊乱、头晕等过敏反应或与其类似的反应。药学上容许的载体在口服给药时，可使用粘合剂，润滑剂，崩解剂，赋形剂，增溶剂，分散剂，稳定剂，悬浮剂，色素及香料，在注射剂的情况下，可与缓冲剂，防腐剂，止痛剂，增溶剂，等张剂，及稳定剂混合使用，并且在局部给药用制剂的情况下，可使用基质，赋形剂，润滑剂和保存剂。本发明中的表达载体，KRS的抗体或抑制KRS活性的制剂的药学组合物剂型，如上所述，可以通过混合不同的药物配方组成。例如，口服给药时可制成片剂，袋剂，胶囊，药剂，悬浮液，糖浆，薄片(wafer)等形态，制成注射剂时可制成单位给药安瓿或多次给药制剂形态。本发明表达载体，KRS的抗体或抑制KRS活性的制剂的总有效量，可通过单一剂量(singledose)给药，也可以通过多剂量(multipledose)长期使用的分次治疗方法(fractionatedtreatmentprotocol)给药。含有本发明表达载体，KRS的抗体或抑制KRS活性的制剂的组合物，可根据疾病的程度和/或目的改变有效成分的含量，通常在一次给药0.1μg或lOOmg，以1μg至IOmg的有效容量一日多次给药更佳。然而，表达载体或抑制KRS活性的制剂的浓度，不仅要考虑患者的年龄，体重，健康状况，性别，疾病严重程度，饮食及代谢率等多种因素确定患者的有效给药量，并且在考虑上述问题时，具有该领域普通知识的技术人员能够确定合适的有效给药量。含有本发明表达载体，KRS的抗体或抑制KRS活性的制剂的药学组合物，并不特别限制其剂型、给药途径及给药方法。另一方面，所述的表达载体可通过感染(infection)、转染(transfection)或转导(transduction)等业界公知的方法通过表现型导入靶细胞内。利用质粒表达载体的基因传递方法，是将质粒DNA直接传递至哺乳动物细胞内的方法，也是美国FDA批准用于人类使用的一种方式(Nabel，E.G.，etal.，Science,2491285-1288,1990).质粒DNA与病毒载体不同，具有可均勻精制的优势。本发明中可使用的质粒表达载体，可以使用业界公知的哺乳动物表达质粒。举例来说，且不限于此，以pRK5(欧洲专利第307，247号)，pSV16B(国际专利公开第91/08291号)及pVL1392(PharMingen)为代表。所述的质粒表达载体(plasmidexpressionvector)作为业界公知的方法，例如，且不限于此，可通过暂时转染(transienttransfection)，显微注射，转导(transduction)，细胞融合，磷酸钙沉淀法，脂质体介导转染(liposome-mediatedtransfection)，DEAE右旋糖酐介导转染(DEAEDextran-mediatedtransfection)，聚凝胺介导转染(polybrene-mediatedtransfection)，电穿孑L法(electroporation)，基因枪(genegun)及用于使DNA流入细胞内的其它公知的方法，将其导入到靶细胞内(Wuetal.,J.Bio.Chem.，267:963-967,1992；Wuandffu,J.Bio.Chem.，26314621-14624，1988)。此外，作为含有所述的核酸的病毒表达载体不限于此，包括逆转录病毒(retrovirus)，腺病毒(adenovirus),疱疫病毒(herpesvirus),及禽痘病毒(avipoxvirus),慢病毒(Lentivirus)等。所述的逆转录病毒载体，是病毒基因全部被去除或改变，在非病毒蛋白质通过病毒载体感染的细胞内制作而成的。用于基因疗法的逆转录病毒载体的主要优点在于，将大量的基因传递到复制细胞内，将传递至细胞DNA内的基因精确整合，在基因转染后不会发生连续性的感染(Miller，A.D.，Nature,357=455-460,1992)。受到FDA认证的逆转录病毒载体，是利用PA317amphotropi逆转录病毒包装细胞制成的(Miller，A.D.andButtimore,C.，Molec.CellBiol.，6:2895-2902,1986)ο非逆转录病毒载体，包括如上面提到的腺病毒(Rosenfeldetal.,Cell,68:143-155,1992Jaffeetal.,NatureGenetics,1:372-378,1992；Lemarchandetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:6482-6486,1992)。腺病毒的主要优点在于可运送大量的DNA片段(361Λ基因组)，具有能够以非常高的效率使被复制细胞感染的能力。此外，疱疹病毒也可以应用在人类基因疗法中(Wolfe，J.H.，etal.，NatureGenetics,1:379-384,1992)。此外，本发明中还可以使用公知的适宜病毒载体。此外，抑制所述的KRS表达的结构基因的其它方法，例如，可通过局部的非口服，口服，鼻腔，鼻腔，静脉注射，肌肉注射，皮下注射，或其它适宜的方式进行给药。特别是，所述的载体为目标的癌症组织的肿瘤细胞治疗有效量的目标，也可以直接注入肿瘤细胞。特别是，在如眼睛，胃肠，泌尿生殖器官，肺及支气管系统的体腔(bodycavity)内产生癌症或肿瘤的情况下，将含有本发明的结构基因(或含有本发明结构基因的表达载体)的药学组合物，利用针，导管(catheter)或其它种类的输送管直接注入到空腔器官(holloworgan)内。此时，X射线，超音波(sonogram)或光纤维系统(fiberopticvisualizationsystem)等影像装置，可用于靶组织的位置确认和针或导管的注入中。此外，在不能直接到达或不同通过分析学分离的肿瘤或癌症，可将本发明的组合物给入血液循环系统中。此外，本发明提供了癌症转移或癌细胞移动调节制剂的筛选方法，该方法包括以下步骤(a)在试验制剂的存在下，使KRS与试验制剂接触，(b)测定KRS的活性，筛选使KRS的活性发生改变的试验制剂，(c)测试筛选出的制剂是否能够调节癌症转移或癌细胞移动。所述的筛选方法可用于业界公知的多种生物化学及分子生物学技术，可用于实施所述的发明。所述的技术记录在以下文献中Sambrooketal.，MolecularCloningALaboratoryManual,ColdSpringHarborPress,N.Y.,Second(1998)andThird(2000)Editions；andAusubeletal.,CurrentProtocolsinMolecularBiology,Johnffiley&Sons,Inc.，NewYork(1987-1999).优选地，首先检测所述的试验制剂是否具有调节KRS的生物学活性的能力(第一检测阶段)。具体地说，在第一阶段，在试验制剂存在的条件下，对分离出的KRS的生物学活性进行检测，确定(identify)对所述多肽的生物学活性进行调节的调节制剂(modulatingagent)0具体地，可以包括以下阶段(a)在试验制剂存在下，使KRS与试验制剂接触；(b)测定KRS的活性，鉴别出使KRS的活性发生改变的试验制剂；在第一检测阶段，能够检测出KRS对各种生物学活性的调节。例如，检测出试验制剂是否具有KRS表达水平，例如调节转录或翻译的活性。此外，能够检测出所述的试验制剂是否具有KRS的细胞内水平或稳定性，例如调节翻译后修饰(post-translationalmodification)^τΚ角牟舌t生。之后，通过所述的第一检测阶段，明确使KRS的生物学活性增加的调节制剂，之后进一步测试所述的试验制剂是否具有层粘连蛋白受体(67LR)，并在KRS的存在下，进一步测试(第二检测阶段)调节癌症转移或癌细胞移动的能力。例如，进一步测试所述的试验制剂是否具有调节癌症转移或癌细胞移动的活性。如上所述，本发明确定的KRS-调节制剂能够调节癌症转移或癌细胞移动。如果所述的第一检测阶段确定的试验制剂能够调节KRS-调节制剂的细胞内水平(例如，转录活性的变化)，则它能够调节癌症或癌细胞的移动。另一方面，如果对非KRS受试制剂细胞内水平的其它活性进行调节，则需要确认KRS所述的所述的细胞调节作用，是否能够实际调节癌症转移或癌细胞移动。例如，为了确定KRS的磷酸化活性调节是否能够调节癌症转移或癌细胞移动，需要进一步测试调节KRS的磷酸化活性的试验制剂，所述的第一及第二阶段中，均可以使用不变的(intact)KRS及其片段，模拟或功能性等同物。这些可用于检测生物活性的片段，通常具有KRS的生物学活性中的一个或多个。优选地，KRS序列号的片段中含有序号1中的1-72个氨基酸残基。此外，含有片段或模拟物的融合蛋白，可用于试验制剂的筛选。KRS的功能性等同物，是氨基酸的缺失和/或插入和/或置换，具有与KRS相同的生物活性，因此可用于本发明中的筛选方法。业界通常使用的多种检测方法，均可用于探明KRS的调节制剂。优选地，所述的制剂可通过基于细胞的检测系统(cellbasedassaysystem)进行筛选。例如，用于筛选的典型的基于细胞的检测中(即第二阶段)，在试验制剂的存在下，测定报告基因活性(例如酶活性)，将其余试验制剂的负载下的报告基因的活性进行比较。所述的报告15基因，是业界公知的可检测的任意的多肽(反应或报告多肽)，例如，可通过荧光或磷光(phosphorescence)检测的多肽或具有它的通过酶活性，编码检测出的多肽。可检测的反应多肽(detectablereponsepolyp印tide)，例如，可以是荧光素酶，α-葡糖苷酸酶(glucuronidase)，α-半乳糖苷酶，氯霉素乙酰转移酶，绿色荧光蛋白，增强型绿色荧光蛋白质和人体分泌碱性磷酸酶。在基于细胞的检测中，试验制剂(例如肽或多肽)，可通过宿主细胞内存在的多种载体进行表达。在某些方法中，试验制剂库克通过所述的载体库(例如cDNA库)编码。所述的库可通过业界公知的方法制得(Sambrooketal.andAusubeletal.，supra)，或者通过多种商业性的来源获得。除了所述记载的基于细胞的检测之外，也可以通过非基于细胞的方法进行筛选。所述的方法包括，例如，迁移的DNA-结合试验(mobilityshiftDNA-binding88885^8),^-4^^0^1^11^0)1+^^1^(11161:115^181::1011anduracilinterferenceassays),DNA_禾口胃自由—Ι(DNaseandhydroxylradicalfootprintinganalysis),焚光极化(fluorescencepolarization),及UV交联(crosslinking)或化学交联(cross-linkers)。一般的概述由Ausubel等的文献揭露(Ausubeletal.，supra,chapter12，DNA-ProteirHnteraction)。将含有核酸和DNA/RNA结合蛋白的共结合蛋白(co-associatingprotein)的分离技术包括，含有可切割的交联剂二巯基琥珀丙酸(dithiobissuccinimidylpropionate)和3，3，-二硫代双(磺酸琥珀酰亚氨基丙酸酯)(3,3’-dithiobissulfosuccinimidylpropionate)的UV交联或化学交联剂(McLaughlin,Am.J.Hum.Genet.，59:561-569,1996；Tang,Biochemistry,35:8216-8225,1996；Lingner，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.Α.,93:10712,1996；andChodosh,Mol.Cell.Biol.,64723-4733，1986)。第一检测阶段KRS调节制剂的筛选许多检测系统可以应用在用于KRS调节因子的试验制剂的筛选中。如上所述，所述的筛选可以使用试管内检测系统或基于细胞的检测系统。在该筛选阶段中，可对试验制剂与KRS的结合，KRS的细胞内水平改变，或KRS的其它生物学活性的调节进行筛选。1)KRS结合制剂的筛选在第一筛选阶段中，可以测定KRS与试验制剂的结合。试验制剂与KRS的结合，例如，可以通过如标记的试管内的蛋白质-蛋白质结合检测，EMS(electrophoreticmobilityshiftassays)，用于检测蛋白质结合的免疫检测，功能性检测(磷酸化检测等)的多种方法进行检测(U.S.Pat.Nos.4，366，241:4，376，110；4，517，288and4,837,168；andBevanetal.,TrendsinBiotechnology,13:115-122,1995；Eckeretal.,Bio/Technology,13:351-360,1995；andHodgson,Bio/Technology,10；973-980,1992)。试验制剂可通过与KRS的直接结合，例如，与基于KRS抗体的KRS多肽的共沉淀(co-immunoprecipitation)的检测得到确认。此外，试验制剂可通过代表KRS与试验制剂的结合的信号，例如荧光淬灭(quenching)的检测得到确认。竞争检测(competitionassays)为阐明KRS的特异性结合试验制剂提供了合适的形式(format)。在所述的形式中，试验制剂与KRS相结合，通过已经公知的化合物的竞争得到筛选。公知的结合化合物可以是合成化合物。此外，它可以是KRS特异性识别抗体，例如，KRS的单克隆抗体。如果试验制剂阻碍了公知的KRS与公知的化合物之间的结合，则所述的试验制剂也能够与KRS结合。多种不同的竞争检测为业界所公知。例如，固相直接或间接酶放射免疫测定法(solidphasedirectorindirectradioimmunoassay,RIA),固相直接或间接酶免疫测定法(EIA)，三明治竞争检测(Stahlietal.，MethodsinEnzymology，9:242_2453，1983)；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(Kirklandetal.,J.Immunol.,137:3614-3619,1986)；固相直接标记检测，固相直接标记三明治检测(HarlowandLane,Antibodies,AlaboratoryManual,ColdSpringHarborPress,1988)；使用125I的固相直接标记RIA(Moreletal.,Mol.Immuno.,25(1):7_15，1988；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(Cheungetal.，Virology，176:546_552，1990)；及直接标记RIA(Moldenhaueretal.，Sacnd.J.Immunol.,32:77-82,1990).在一般情况下，所述的检测包括了精制多肽的使用，该多肽结合在包括了非标记化的试验制剂及标记化的对照化合物的细胞或固体表面。竞争性抑制通过在试验制剂的存在下，确定结合在固体表面或细胞上的标记的量得到测定。通过竞争检测阐明的调节制剂，包括了与对照化合物结合在同一抗原表位上的制剂，及为了引起立体阻碍(sterichindrance)而与相邻抗原表位结合的制剂。通常情况下，在竞争阻碍过度存在时，普通的标记多肽的对照化合物的特异性结合被抑制至少50或75%。所述的筛选检测可以是不溶性或溶解性形式。作为不溶性检测的一例，是将KRS或其片段固定在固相矩阵上。之后，在用于试验制剂结合的充分长时间期间，使固相矩阵与试验制剂接触。之后，将未结合于固相矩阵的物质洗去，之后确认结合于固相的制剂的存在。所述的方法还包括了将结合的制剂由固相矩阵溶解分离，将制剂分离的阶段。二选一地，使KRS固定的另一方法，是将试验制剂结合在固相矩阵上之后，添加KRS。溶解性检测包括了上述记录的少数结合库的筛选方法。在溶解性检测形式下，试验制剂或KRS均不能结合于固体支架。KRS或其片段与试验制剂的结合，例如可通过KRS和/或试验制剂的荧光测得。荧光可通过内部(intrinsic)或带有荧光物质(fluorophor)的成分的标记赋予。在少数结合检测中，KRS、试验制剂或第三物质(例如KRS结合抗体)为了在给定的条件下容易地对所述的多肽进行确认、检测及定量，可提供为标记状态。即，可提供共价结合或可检测的标记或组，或者连接的可交联的组。上述可检测的组，包括了可检测的多肽组，例如可检测的(assayable)酶或抗体抗原表位。二选一地，所述的可检测的组，可选自放射性同位素(例如125I，32P，35Q，或者如化学发光性或荧光性组的其它可检测的组或标签。类似地，所述的可检测的组可以是基质(substrate)，辅因子(cofactor)，抑制剂或亲和配体。2)调节KRS的其它生物活性的制剂的筛选KRS与试验制剂的结合表明，试验制剂是KRS的调节因子。这也提示所述的制剂为调节癌转移或癌细胞移动，能够调节层粘连蛋白受体的生物活性。因此，需要进一步测试，与KRS结合的试验试剂是否具有调节层粘连蛋白受体活性的能力。另外，需要对与KRS结合的试验制剂进行进一步调查，以查明其对于KRS的活性。这种活性的存在、性质或范围可通过活性检测测得。所述的活性检测，可以确认试验试剂与KRS的结合，实质上对KRS具有调节活性。很多时候，所述的调节检测控制可以独立使用，用于阐明调节KRS的活性的试验制剂(即，不经过第一阶段直接检测KRS的结合能力)。一般情况下，在所述的方法中，存在或不存在用于测试KRS的生物活性所需的其它物质或试剂的情况下，在包括KRS的样品中添加样品试验制剂，以测定KRS的生物学活性的变化。在筛选KRS的酶或调节其他生物学活性的制剂的筛选检测的基础上，所述的活性检测包括了用于KRS表达或细胞内水平变化的试管内筛选机生物体内筛选。m二i式·介胃赫·翩胞如果阐明了调节制剂与KRS结合并且/或者能够调节KRS的生物学活性(包括细胞内水平)，则可以进一步测试所述的制剂是否具有调节癌症转移或癌细胞移动的能力。基于所述的调剂制剂的癌症转移或癌细胞移动的调节，通常需要在KRS的存在下进行测试。若使用基于细胞的筛选系统，则KRS能够由导入宿主细胞的表达载体表达。二选一地，KRS也可以在筛选系统中借助宿主细胞通过内生方式供给。此外，本发明提供了阻碍KRS与67LR的相互作用的制剂的筛选方法，该方法包括以下步骤(a)在试验制剂的存在下，使KRS，层粘连蛋白受体(67LR)及试验制剂接触；及(b)测试所述的试验制剂是否调节KRS与层粘连蛋白受体之间的相互作用(interaction)0所述的制剂能够促进或增强KRS与层粘连蛋白受体(67LR)的相互作用，相反地，能够抑制或弱化所述的相互作用。所述的步骤(b)中的测试，包括了测定未接触于所述的调节制剂的细胞或其溶解物中的67LR与KRS的相互作用水平的，所述的调节制剂在接触的细胞或其溶解物中的67LR与KRS之间的相互作用水平的相对变化的测定(detecting)阶段。所述的筛选方法如上所述，可通过试管内蛋白-蛋白结合检测(试管内下拉检测)，EMSA(electrophoreticmobilityshiftassays)，用于蛋白质结合的免疫检测，功能性检测(磷酸化检测等)，酵母-2杂交检测，非免疫沉淀检测，免疫印迹检测，免疫共定位检测(immuno-co-localization)等业界公知的多种方法实施。例如，利用分别融合于抑菌体LexA或酵母GAL4的DNA结合区域及酵母GAL4蛋白的转录(transactivation)区域的，表达KRS和67LR、或它们的蛋白质的一部分或同源体(homologues)的酵母，进行酵母双杂交检测(KIM，M.J.etal.,Nat.Gent.,34:330-336,2003)。KRS与67LR的相互作用，在结合于LexA蛋白或GAL4的DNA结合区域的调节序列的启动子的控制下，进行诱导报告基因表达的转录重组。所述的报告基因如上所述，可使用(例如氯霉素乙酰转移酶(chloramphenicolacetyltransferase)，荧光素酶，β-半乳糖苷酶，β-葡糖苷酸酶(glucuronidase)，碱性磷酸酶及绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein)等。如果通过试验制剂促进或强化了KRS和67LR，或上述蛋白质的部分或同源体的相互作用，则所述的报告基因的表达与正常条件相比增加。相反，如果所述的相互作用因试验制剂而阻碍或弱化，则所述的报告基因未表达或与正常条件相比表达减少。此外，作为报告基因，选择能够使酵母生长的蛋白质(即，在所述的报告基因未表达时，酵母的生长受到抑制)进行编码。例如，可以是编码用于氨基酸或含氮碱基的生物合成过程相关的酶的营养缺陷(auxotrophic)基因(例如ADE3，HIS3等的酵母基因或源自其它种的等位基因)。该系统中表达的KRS和67LR，或它们的蛋白质的部分或同源体的相互作用，在试验制剂的作用下抑制或弱化的情况下，报告基因未表达或表达减少。因此，在所述的条件下，酵母的生长停滞或减慢。上述报告基因的表达所产生的作用，可通过肉眼或装置(例如显微镜)观察到。同时，本发明中以肺癌或乳腺癌患者为对象，确认67LR及KRS的过表达与否的结果，在67LR过表达的情况下，可知KRS的过表达与肺癌或乳腺癌的相关性得到提高(参照表1)。因此，本发明提供了诊断肺癌或乳腺癌的方法，该方法包括以下步骤(a)分析试剂中67LR是否过表达；(b)在67LR过表达的试剂中，分析KRS是否过表达。用于诊断的样品的采集及处理，和67LR及KRS的过表达与否的分析，通常可使用分子生物学方法，并且如下所述。以下对本发明中记录的附图进行说明。图1至图6确认了人类KRS与层粘连蛋白受体的特异性相互作用。图1中，全部长度的人类KRS与37LRP/p40之间的相互作用可通过酵母双杂交分析进行。多重-ARS复合体的两个组成要素AIMPl及AIMP2分别用作阳性及阴性对照组。阳性相互作用在含有x-gal的酵母培养基中，通过蓝色群体的形成标记。图2中，37LRP为35S蛋氨酸存在下通过invitro翻译生成，将其与GST-KRS或GST反应(pull-down)。与GST-KRS共沉淀的(co-precipitated)37LRP利用自放射拍摄法测定。图3中，KRS及37LRP的相互作用相关的肽部位通过酵母双杂交分析测得。具有N末端的细胞内部位(第M至第113位氨基酸)及具有C末端的细胞外部位(第137至210位氨基酸)的第296位氨基酸的37LRP，通过膜间区域(第113至137位氨基酸)区分。在人类KRS(597个氨基酸)的N末端特异性扩展(约70个氨基酸)部位之后，具有OB-fold反密码子结合区域(约70至214个氨基酸)和催化区域(约220至574个氨基酸)。图4中，将Myc-KRS感染的A549细胞溶解，以抗Myc及抗层粘连蛋白受体抗体实施免疫印迹法。使Myc-KRS与抗Myc抗体免疫沉淀，通过67LR及37LRP共沉淀，实施免疫印迹法。为实现37LRP及67LR的特异性印迹，分别使用多抗体H-141及F-18(Santacruz)(WCL:wholecelllysate)。图5中，利用所示抗体对Myc-KRS感染的A549细胞的溶解物实施免疫印迹法。细胞分离成细胞质(C)及膜部分(M)，利用抗Myc抗体实施免疫沉淀，通过免疫印迹法探明37LRP及67LR共沉淀。在对照组中使用IgG。图6中在进行层粘连蛋白(10ug/ml，lh)处理的情况下，确认了67LR与KRS之间的结合扩展。为对其进行观察，利用识别67LR的抗体(abcam，cat#ab2508)进行免疫沉淀(immunoprecipitation)，左侧的IgG标签为源自兔的总IgG(totalIgG)，并用作阴性对照组。实施10%SDSPAGE之后，转移至PVDF膜，之后利用识别KRS和67LR的抗体分别进行免疫印迹。图7至图12中确认了层粘连蛋白-诱导性膜转位(translocation)及KRS的磷酸化。图7中，通过层粘连蛋白(10ug/ml)处理A549细胞，利用免疫印迹法分时段观察67LR，37LRP及KRS的量(level)。分别使用Hsp90及钙粘蛋白(Cad)作为细胞质及膜的标记。图8中，利用层粘连蛋白处理A549细胞1小时，或者不进行处理，使用抗67LR(MLuC5，Santacruz,sc-59732)(红色)及KRS抗体(绿色)实施免疫荧光染色。图9中，利用分别抑制PLC-Y，PKC及PI3K的U73122(U)，星形孢菌素(staurosporin,ST)及LY294002(LY)，处理A549细胞3小时，利用层粘连蛋白处理1小时，之后确认该磷酸化酶抑制剂对67LR及KRS的细胞质及膜产生何种影响。图10中，利用Myc-KRS感染A549细胞，培养M小时。之后利用所示(indicated)药物进行处理，并利用如上所述的层粘连蛋白进行处理。利用Myc-KRS进行免疫沉淀，利用抗-p-Thr，-kr，及-Tyr抗体实施免疫印迹法。图11中，利用Myc-KRS感染A549细胞培养M小时。感染的细胞利用LY^4002前处理3小时，利用层粘连蛋白处理1小时。Myc-KRS经过免疫沉淀，67LR经过免疫印迹法实现共沉淀。作为免疫沉淀法的对照组，使用IgG。图12中，如上所述，在层粘连蛋白及LY^4002的存在或不存在下培养A549细胞。EPRS(glutamyl-prolyl-tRNAsynthetase)与其特异性抗体(AbCam)免疫沉淀，KRS的共沉淀通过免疫印迹法确认(上)。利用免疫耗尽上清液(immime-d印Ietedsupernatant:ID)，与抗-KRS及EPRS抗体实施免疫印迹法。图13至图17中确认了KRS使膜-结合性67LR稳定化的这一点。图13中，A549细胞通过si-对照组(si-cont)或si-KRS感染，在层粘连蛋白的存在或不存在下进行培养。之后将细胞分离成细胞质和细胞膜，在各自部分中的67LR及KRS的量通过免疫印迹法确认。钙粘蛋白(红色)及hsp90分别用作细胞膜及细胞质的标记。图14中，A549细胞中膜结合性67LR的量使用抗-LR抗体(MluC5)，利用流式细胞仪观察得到。共载体或KRS质粒感染的细胞经过对小时培养(上)。67LR的量，为表现KRS的抑制作用，利用si-KRS或si-对照组感染细胞，并培养48小时(下)。图15中，EV(共载体)或KRS感染的A549细胞，利用G418鉴别一周，使用抗-LR抗体(Mlua)进行免疫荧光染色，确认了67LR的细胞内分布。膜中分布的LR用白色箭头指出。图16中，A549细胞经过放线菌酮处理，抑制了新的(denovo)蛋白质合成，并且在细胞膜和细胞质内的67LR量中，KRS量的作用通过免疫印迹法查明。图17中，67LR的细胞稳定性中，KRS的重要性通过脉冲追踪实验查明。293个细胞经过si-KRS或si-对照组感染，与蛋氨酸反应1小时。67LR与67LR特异性反应抗体(F-18，Santacruz)发生免疫沉淀，经过SDS-PAGE分离后，实施自放射拍摄法。基于特异性siRNA的KRS的抑制，通过免疫印迹法实施，并且使用微管蛋白作为对照组。图18至图22中，KRS通过67LR确认了促进细胞移动(cellmigration)及癌症转移的这一点。图18中，利用所示(indicated)质粒感染A549细胞，在层粘连蛋白不存在或存在下进行培养，它们对细胞移动的作用，在transwell室中通过移动细胞的测定得到确认。计算通过膜的细胞的数目，并将其标记在各个板上。实验重复3次。图19中，如上法处理的细胞，为测定MMP-2的活性和量，分别用于实施酶谱及免疫印迹法。图20中，乳腺癌细胞株4T-1细胞通过所示(indicated)siRNA感染，并且注射到Balb/C小鼠背部。经过21日后，摘除小鼠的肺，对直径Imm以上的肿瘤结节计数。图21中，表达外源性KRS(KRS-1，及KRS-2)的两种不同的4T-1细胞，如上所述进行接种，经过30日后计数。感染共载体的细胞作为对照组使用。图22中，肺癌(上)及乳腺癌(下)组织中的KRS及67LR的表达量，以使用它们各自的抗体的免疫组织化学染色法进行比较。利用39个肺癌及40个乳腺癌的组织，通过抗-KRS及抗-67LR抗体实施免疫组织化学染色，它们的表达量与正常组织进行比较(每一组织9个样品)。其中可见同一患者的代表性的对，是KRS和67LR的过表达。KRS与67LR的统计学相关关系如表1所示。图23中示意67LR的膜中的量依赖于KRS表达。图23中，所示(indicated)质粒感染的293个细胞分离为细胞质及细胞膜部分，在各个部分中，确认了使用67LR，37LRP及20KRS的量，利用对应的抗体实施免疫印迹法。图M至图27在细胞移动，蛋白质合成及细胞周期中，确认了细胞内及细胞外KRS的作用。图M中，层粘连蛋白不存在的情况下培养的A549细胞的移动，在transwell室中通过移动细胞的测定得到确认。图25中示意KRS的化学周期性(chemotactic)活性，以所示浓度将含有KRS的无血清培养基至于transwell室的下室，将A549细胞置于上室进行培养。培养6小时候，对移动细胞进行计数。图沈中，A549细胞中KRS的量，通过siRNA和外因性KRS的导入，得到下调或上调(图沈及图27的下板)。感染的细胞分别培养48小时和M小时，之后在无蛋氨酸培养基中培养1小时，形成营养饥饿状态，之后利用放射线标记的蛋氨酸标记2小时。洗涤后，将细胞培养4小时，利用0.5%TritonX_100溶解液溶解，利用液态闪光计数器(liquidscintillationcounting)测定放射线活性。图27中，A549细胞如标记感染后固定，利用碘化丙啶(Propidiumiodide)染色，通过流式细胞分析仪分析。图观至图30确认了癌转移中的KRS的抑制作用。图观中，目标蛋白质的表达中，si-KRS及si-DRS的作用通过免疫印迹法查明。对照组使用微管蛋白。图四中，感染siRNA的细胞(IxlO6)如上述方法注射，经过21日后测定肿瘤的大小及体积，在原发肿瘤增殖中，查明了KRS及DRS的抑制作用。各组使用5只小鼠。图30中，所述的小鼠中摘除的肺，在10%福尔马林溶液中固定。转移性肿瘤结节及数目如图所示。图31至图33确认了癌转移中KRS的过表达作用。图31中，通过免疫印迹法观察到KRS-I及KRS-2细胞株的过表达。图32中，对原发肿瘤增殖中的KRS过表达作用进行了相互比较。图33中，查明了接种后30日的肿瘤转移引起的KRS的作用。各组使用4只小鼠°图1所示为通过酵母双杂交分析确认人类KRS与37LRP/p40之间的相互作用。图2所示为通过下拉分析确认人类KRS与37LRP之间的相互作用。图3所示为确认人类KRS与37LRP之间的相互作用。图4所示为为了确认KRS与67LR及37LRP之间的结合，利用抗Myc及抗层粘连蛋白受体抗体，对Myc-KRS感染的A549细胞进行免疫印迹分析的结果。图5所示为为了确认KRS与67LR及37LRP之间的结合，对Myc-KRS感染的A549细胞的溶解物进行免疫印迹分析的结果。图6所示为通过免疫沉淀确认基于层粘连蛋白处理的KRS与67LR的结合。图7所示为对A549细胞进行层粘连蛋白处理时，通过免疫印迹确认67LR，37LRP及KRS的量(level)。图8所示为A549细胞经过层粘连蛋白处理或未经过处理时，通过免疫荧光染色确认67LR及KRS的表达。图9所示为确认磷酸化酶抑制剂对67LR及KRS的细胞质及膜中的表达产生的影响。图10所示为在表达KRS的A549细胞中实施层粘连蛋白及磷酸化酶抑制剂处理时，通过P-Thr，-Ser，及-Tyr抗体实施免疫印迹，以确认磷酸化程度。图11所示为在表达KRS的A549细胞中，通过免疫印迹确认磷酸化的KRS是否与67LR结合。图12所示为通过免疫印迹确认层粘连蛋白对KRS与EPRS的结合产生的影响。图13所示为通过免疫印迹确认si-对照组或si-KRS转染时的67L及KRS的量。图14所示为利用流式细胞分析仪确认A549细胞中的膜结合性67LR的量。图15所示为通过免疫荧光染色确认对于EV(共载体)或KRS感染的A549细胞的67LR的细胞内分布。图16所示为通过免疫印迹确认新蛋白质合成受到抑制的A549细胞中细胞膜与细胞质内的67LR量对KRS量的作用。图17所示为通过脉冲追踪试验确认KRS对67LR的细胞稳定性产生的影响。图18所示为确认KRS和/或67LR表达抑制时对细胞移动产生的影响。图19所示为通过酶谱及免疫印迹确认KRS和/或67LR表达抑制时MMP-2的活性及量。图20所示为4T-1细胞株移植小鼠中KRS表达抑制时肿瘤结节的数目。图21所示为4T-1细胞株移植小鼠中KRS表达抑制时肿瘤结节的数目。图22所示为通过免疫组织化学法确认肺癌及乳腺癌组织中的KRS及67LR的表达量。图23所示为通过免疫印迹确认KRS表达对67LR膜中的量产生的影响。图M所示为测定不存在层粘连蛋白的情况下培养的A549细胞的移动。图25所示为测定细胞移动的KRS的趋化性(chemotactic)活性。图沈所示为在A549细胞中确认基于siRNA与外源性KRS的导入的KRS的量及细胞内全部蛋白质的合成量。图27所示为在A549细胞中确认基于siRNA与外源性KRS的导入的KRS的量及细胞周期。图28所示为在靶蛋白表达中通过免疫印迹确认si-KRS及si_DRS的作用。图四所示为在基于肿瘤细胞抑制的第一次肿瘤增殖中确认KRS及DRS抑制的作用。图30所示为确认基于肿瘤细胞移植的转移性肿瘤结节及数目。图31所示为通过免疫印迹确认KRS-I及KRS-2细胞株中的KRS的表达量。图32所示为确认基于肿瘤细胞移植的第一次肿瘤增殖中的KRS过表达的作用。图33所示为确认基于肿瘤细胞移植的转移性肿瘤结节及数目。发明的具体实施例方式以下参照实施例对本发明进行详细说明。但，以下实施例仅用于提示本发明，本发明中的内容不限于此。〈实验方法〉1.细胞培养及材料A549及HEK293细胞购自ATCC。小鼠乳腺癌(mammarycarcinoma)4T-1细胞株由Kim,SungJin博士(Gachon医科大学)提供。含有10%小牛血清(Fetalbovineserum,FBS)及抗体的RPMI(相对于AM9细胞及4T-1细胞)及DMEM(Dulbecco，sModifiedfegleMedium，相对于其它细胞)培养基用于细胞培养。编码37LRP的pcDNA3.1载体由tachibanahirofumi博士(九州大学)提供。附着有Myc的(Myc-tagged)人类KRS及DRS由pcDNA3载体的EcoRlAhoI限制酶部位克隆得到。啮齿类KRScDNA通过RT-PCR保存，在pcDNA3.1载体的HindIIIAhoI限制酶部位克隆。标靶(targeting)啮齿类及人类KRS及DRS的siRNA由hvitrogen公司购入。siRNA的序列可获得。Geneporter(GTS)及脂质体2000(invitrogen)作为转染试剂使用。LY^4002，U73122及星形孢菌素(staurosporin)购自Calbiochem,环己酉先亚胺(cycloheximide)及层粘连蛋白(laminin,Engelbreth-Holm-Swarmmurinesarcoma)购自Sigma。2.免疫沉降及免疫印迹利用含有150mMNaCl,0.5%TritonX-100,0.1%SDS及蛋白质分解酶抑制剂的20mMTris-HCl缓冲液(ρΗ7.4，溶解缓冲)将细胞溶解。将蛋白质提取物与正常IgG及蛋白质G琼脂糖凝胶孵化(incubation)2小时，之后进行离心分离，非特异性地去除IgG中结合的蛋白质。将上清液与精制的67LR抗体(F-18，Santacruz)混合，之后在振摇的同时，在4°C下培养2小时，与蛋白质A琼脂糖凝胶混合。利用经过冰冷却的溶解缓冲液洗涤3次，之后将沉淀物溶解在SDS-样品缓冲液中，利用SDS-PAGE分离。为了在相互不同的细胞部分中，确认KRS及LR的结合，利用pcDNA3.I-Myc-KRS转染，利用proteoextract试剂盒(Calbiochem)，依照制造商的说明，将质膜与细胞质分离，之后实施如上所述的共免疫沉降。为分析蛋白质水平，从细胞中提取蛋白质，之后利用10%SDS-PAGE进行分离。在未特殊提及的情况下，将抗-LR抗体(Abcam，ab2508)用于37LRP及67LR的共免疫印迹。hsp90及广谱钙粘附素(Pan-cadherin)抗体购自Santacruz。3.流式细胞分析(flowcytometry)为确定(address)细胞周期，利用标记的载体或化合物对经过培养的细胞进行转染或处理，利用70%乙醇在4°C下固定1小时，之后利用经过冰冷却的PBS洗涤2次。之后利Mpropidiumiodide(50μg/ml),0.1%sodiumcitrate,0.3%NP40RRNaseA(50μg/ml)将细胞染色40分钟，之后实施流式细胞分析(FACSCalibur,Beckton-Dickinson)。对于各个样品，使用CellQuestPro软件对20000个细胞进行分析。为分析细胞表面的67kDLR的量，将IxlO6个细胞与识别IgG或67LR的细胞外区域的抗-LR抗体(MLuC5，lug)进行培养，之后与FITC第二抗体进行培养。经过PBS洗涤后，利用FACS对样品进行扫描。4.免疫荧光染色或免疫组织化学染色利用70%甲醇固定9mm盖玻片(coverslip)上的A549细胞，之后利用冰冷的PBS冲洗。利用含有CAS，3%BSA及0.5%TritonX-100的封闭缓冲溶液孵化(incubation)30分钟，之后利用KRS抗体(Abeam)和MLuC-5抗体(Santacruz)培养细胞1小时。添加Alexa488及568(invitrogen)之后，在室温下处理30分钟。利用冰冷的PBS洗涤30分钟，之后在激光扫描显微镜下观察标本。乳腺癌及肺癌的组织排列切片(tissuearrayslide)购自Super-Biochip(韩国)，为确认67LR及KRS的表达水平，实施文献(Park,S.G.etal.Humanlysyl-tRNAsynthetaseissecretedtotriggerpro-inflammatoryresponse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA102,6356-6361(2005))中提及的对应抗体和免疫组织化学染色。为了计算67LR与KRS的表达之间的相关关系，使用皮尔生χ2检验及学生t检验实施统计分析。若P值<0.05，则确定为相关。全部统计学分析使用SPSSvll.5软件(SPSS,Chicago,111)实施。5.脉冲追踪实验(Pulse-chaseexperiment)使用IipofectAMINE2000,通过si-KRS或si-对照组(invitrogen)转染293个细胞。在不含蛋氨酸的培养基中培养1小时，之后添加[35S]蛋氨酸(50yCi/ml)培养1小时。利用新鲜培养基洗涤放射线蛋氨酸，之后利用67LR的特异性抗体(Santacruz)使其免疫沉降，利用12%SDS-PAGE分离，之后利用BAS(FLA-3000，Fujifilm)使其曝光(autoradiography)。67LR的量利用Multi-gauge程序(V3.0，Fujifilm)测得。6.酵母双杂交(yeasttwohybrid)分析编码人类KRS的多个片段的cDNA，利用相应的引物通过PCR得到。利用EcoRI及XhoI切割KRS的PCR产物，使pEG202载体(用于LexA-融合蛋白的制备)及pJG4_5载体(用于B42-融合蛋白的制备)的相应位置连接。编码37LRP片段的cDNA由BarbaraJ.BalIermann博士(阿尔伯特大学)提供，并且插入到pJG4_5载体的EcoRI及BioI部位。两种融合蛋白之间的相互作用，通过含X-gal酵母培养基上是否形成蓝色菌落判断。7.Invitro结合分析使GST-KRS或GST在大肠杆菌Rosetta(DEIB)菌株中表达，在含有1%iTritonX-100及0.5%N-月桂酰肌氨酸的PBS缓冲液中，在4°C下将所述的蛋白质提取物与谷胱甘肽-头孢菌素混合2小时。人类37LRP使用TNTQuickcoupledTranscription/Translationsystem(Promega)，使用pcDNA3_37LRP为模板，在[35S]蛋氨酸的存在下，通过invitrotranslation合成。合成的37LRP添加在所述的GST蛋白质混合物中，在含有1%TritonX-100，0.5%N-月桂酰肌氨酸，ImMDTT,2mMEDTA及300μM苯甲磺酰氟的PBS缓冲液中进行搅拌，同时在4°C下培养4小时，之后以含有0.5%TritonX-100的相同缓冲液洗涤6次。之后利用SDS样品缓冲液将结合于琼脂糖珠的蛋白质溶出，利用SDS-PAGE分离，测定放射线(autoradiograph).8.细胞移动(cellmigration)分析细胞移动如参考文献(Park，S.G.etal.Humanlysyl-tRNAsynthetaseissecretedtotriggerpro-inflammatoryresponse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA102,6356-6361(2005))中所记录的，利用带有聚碳酸酯膜(8.0μπι孔径，Costar)的Mielltranswell室测定。使A549细胞悬浮在无血清(serum-free)RPMI培养基中，之后以各个well中IxlO5个细胞的浓度加入到上室中。将所示浓度的精制人类KRS，层粘连蛋白(10yg/ml)或凝胶(10yg/ml)加入下室well中，使细胞在CO2培养仪中，在37°C下移动6小时。细胞通过含有70%甲醇的PBS固定30分钟，之后利用PBS洗涤3次。利用苏木素(Sigma)将细胞染色10分钟，之后利用蒸馏水洗涤。利用棉棒去除膜上部未移动的细胞。将膜由室中分离，之后放置(mount)在GelMount(Biomeda，美国)上。通过在显微镜(x20)下四处任意选择测定的方法，测定移动的细胞(附着在膜的下位面上)。9.酶谱法(zymography)利用对标记的siRNA及重组KRS(或DRS)进行编码的质粒转染的A549细胞，分别培养48小时及M小时，之后接种在含有10%FBS的RPMI培养基中(IxlO5细胞/well)。在无血清RPMI培养基中将细胞饥饿处理(starving)2小时，之后添加层粘连蛋白，以10μg/ml培养M小时。将20μ1的培养基与切FOD缓冲液(含有4%SDS,20%甘油24及0.01%溴酚蓝的0.125MTris-HCl,pH6.8)混合，之后实施含有lmg/ml凝胶的10%SDS-PAG。利用2.5%TritonX-100将凝胶分别洗涤2次，每次20分钟，之后与反应缓冲液(含有IOmMCaCl2,150mMNaCl,ΙμΜZnCl2,1%TritonX-100，0·002%叠氮化钠的50mMTris-HCl,pH7.5)在37°C下培养M小时。利用蒸馏水洗涤凝胶，利用库马西蓝R250染色，之后利用35%甲醇脱盐(destain)。10.生物体内癌症转移实验用si-KRS，si-DRS或si_对照组转染小鼠乳腺癌4T_1细胞，之后培养M小时。通过皮下注射的方法将细胞(IxlO6)注入6周龄雌性Balb/c小鼠等。转染48小时后测定剩余细胞中的目标siRNA的作用。此外，在注入后的3日至10日，以2日为间隔通过免疫印迹分析法测定原发肿瘤(primarytumor)中与目标siRNA的作用相应的抗体。肿瘤生长以每周3次测定肿瘤大小的方式进行监控。与此同时测定全身体重。注入后21日处死小鼠，切除原生肿瘤及肺。利用10%福尔马林将肺固定M小时。测定转移到肺部的肿瘤结节(nodule)的数目和尺寸，直径大于Imm的大型肿瘤结节单独记录。同时测定原生肿瘤的质量。为确认KRS过表达对肿瘤转移产生影响的作用，利用啮齿类KRS载体及空白载体(emptyvector)转染4T-1细胞，之后在G418存在下将稳定的转染体培养3周进行筛选。选取若干个群体，通过免疫印迹法比较KRS表达水平。选取KRS表达水平高于对照组细胞的两个不同的群体(KRS-l，KRS-2)用于注入。注入后第30日处死小鼠，此外与所述的方法相同地进行后续实验。〈实验结果及考察〉总长度的KRS与37LRP之间的特异性相互作用通过酵母双杂交分析得到确认。LexA-KRS作为KRS的伴侣。(Kim，J.Y.etal.p38isessentialfortheassemblyandstabilityofmacromoleculartRNAsynthetasecomplexImplicationsforitsphysiologicalsignificance,Proc.Natl.Acad.Sci.USA99,7912-7916(2002))不仅与AIMP2结合，还与B42-37LRP结合(paired)，形成蓝色群落，而在AIMPl中并非如此(图1)。体外结合检测，利用[35S]蛋氨酸标记的37LRP，与GST-KRS或GST混合，利用谷胱甘肽-头孢菌素沉淀后，实施自放射线拍摄。37LRP与GST-KRS共沉淀，而与GST并非如此(图2)。利用酵母双杂交分析，确认通过缺失地图(deletionmapping)确认，人类KRS的N末端延长部位与LR的C-末端细胞外区域，与它们的结合不相关(图3)。细胞质内37LRP转换为膜包埋性67LR，因此本发明者确认KRS在37LRP及67LR中相互不同地结合。将Myc-KRS导入肺癌细胞株A549细胞，使其与抗-Myc抗体发生免疫沉淀。细胞溶解物的免疫印迹法结果，67LR以少于37LRP的量存在(图4右侧)。然而，Myc-KRS优先于37LRP与67LR结合(图4左侧).本发明者之后将A549细胞分离成细胞质和原生质膜部分，确认了Myc-KRS与37LRP及67LR的相互作用。37LRP在细胞质中，67LR在原生质膜中，分别得到观察(图5右侧)，KRS在细胞质内具有更多的量，但在两部分中都存在。两部分均与抗-Myc抗体发生免疫沉淀时，尽管细胞质内存在少量的37LRP沉淀，但膜中存在的67LR主要与KRS发生共沉淀(图5左侧)，其示意了膜中存在的67LR及KRS之间的先后性相互作用。本发明者此后通过细胞分离和免疫荧光染色法，查明了KRS的细胞内分布是否因A549细胞的层粘连蛋白处理而发生变化。层粘连蛋白处理后，KRS和67LR的膜内存在量，与细胞质内的KRS及37LRP量或它们的表达几乎无关，而逐渐增加(图7及结果未图示).免疫荧光染色中，67LR及KRS通过层粘连蛋白处理，说明了向膜一侧移动。(图8，分别为红色和绿色).发明者此后查明KRS的膜转座(trmslocation)与翻译后变形(post-trmscriptionalmodification)无关.磷酸肌醇3-0H激酶(phosphoinositide3_0Hkinase，PI3K)(Shaw,L.Μ.，Rabinovitz,I.，Wang,H.H.，Toker，A.&Mericurio.Α.Μ.Activationofphosphoinositide3—0Hkinasebythealpha6beta4integrinpromotescareinomainvasion.Cell91，949-960(1997))，蛋白质磷酸化酶C(ProteinkinaseC，PKC)(Li，Y.Q.etal.ProteinkinaseCmediatesthesignalforinterferon-gammamRNAexpressionincytotoxicTcellsaftertheiradhesiontolaminin.Immunology93,455—461(1998))，及磷月旨C-伽马(phospholipaseC-gamma，PLC-gamma)(Vossmeyer,D.，Hofmann，W.，Loster，K.，Reutter，W.&Danker，K.PhospholipaseC-gammabindsalphalbetalintegrinandmodulatesalphalbetalintegrin-specificadhesion.J.Biol.Chem.277，4636-4643(2002)；Kanner,S.B.，Grosmaire，L.S.，Ledbetter,J.A.&Damle，N.K.Beta2—integrinLFA-IsignalingthroughphospholipaseC-gamma1activation.Proc.Natl.Acad.Sci.USA90,7099-7103(1993))等少数相互不同的磷酸化酶，已知通过层粘连蛋白激活。为探明上述磷酸激酶中的哪些与KRS的层粘连蛋白的存在膜转座相关，本发明者利用特异性抑制剂分别对各个激酶进行了磷酸化酶阻断，确认了该处理如何对KRS的层粘连蛋白依存性膜转座产生影响。膜分离中，KRS与67LR的层粘连蛋白的依存性增加，伴随着PUK抑制剂LY^4002的存在受到抑制。U73122或星形孢菌素处理的细胞，与对照组相同地，显示出67LRS的层粘连蛋白的依存性增加(图9上及结果未图示).上述磷酸化酶中，在任何细胞内都不对KRS的量产生影响(图9下).其结果，提示PII与KPS的层粘连蛋白诱导性磷酸化相关。事实上，磷酸化的KRS通过层粘连蛋白处理增加，另一方面，在LY^4002的存在下受到抑制，并且星形孢菌素不能产生任何影响(图10).本发明者之后查明了KRS的层粘连蛋白与67LR之间的相互作用不需要诱导磷酸化。LY^4002处理能够抑制KRS与67LR的层粘连蛋白诱导性结合(图11)。细胞质KRS在多重-ARS复合体中得到固定，因此本发明者探明KRS的层粘连蛋白依存性磷酸化与KRS复合体的其它酶组成成分谷氨酰-脯氨酰tRNA合成酶(glutamyl-prolyl-tRNAsynthetase,EPRS)发生共免疫沉淀，因此对多重-ARS复合体之间的结合不产生影响。在LY化合物缺失的情况下，层粘连蛋白处理能够减少KRS与EPRS的结合，同时增加免疫缺失的溶解性成分(immuno-d印letedsolublefraction)的KRS(图12上，下板的左侧线).因此，结合于EPRS的KRS，在细胞经过LY^4002前处理时，不受层粘连蛋白处理的影响(图12上，下板的右侧线)，这说明KRS的磷酸化不需要磷酸化而使KRS与复合体的层粘连蛋白依存性结合。本发明者此后确认了KRS在A549细胞中，是否对67LR的膜内存在量产生影响。67LR的量因层粘连蛋白而增加，但层粘连蛋白效应因KRS的特异性siRNA受到抑制时而消失(图13左侧).它在67LR的层粘连蛋白的存在促进下，示意KRS的重要性本发明者通过流式细胞分析仪探明了膜内存在的67LR。膜内存在的67LR的量，通过细胞的KRS转染，或者利用si-KRS转染时，分别增加及减少(图14).层粘连蛋白受体的细胞内分布，通过共载体(EV)或KRS转染的A549细胞间免疫荧光染色进行比较。层粘连蛋白受体与对照组比较，在KRS过表达细胞的膜部位强烈染色(图15).之后，KRS与67LR之间的正性相关(positivecorrelation)，是通过基于多种KRS的量的膜及细胞质内的67LR存在量得到测定(图2。本发明者探明了KRS如何使67LR的膜内存在量得到增加。KRS通过由37LRP转录或转换(conversion)，促进67LR。但是，KRS的感染除了LR转录调节的潜在性作用之外，不能使LR转录增加(结果未图示).KRS在细胞质内不能很好地与37LRP结合(图4，图5)，因此等同于促进了KRS使37LRP转化为67LR的过程。37LRP的变形，在37LRP转换为67LRWilfMΦ,^(Landowski,Τ.H.，Dratz,Ε.，Α.&Starkey，J.R.Studiesofthestructureofthemetastasis-associated67kDalamininbindingprotein:fattyacidacylationandevidencesupportingdimerizationofthe32kDageneproducttoformthematureprotein.Biochemistry34,11276-11287(1995)；Buto,S.etal.Formationofthe67-kDalamininreceptorbyacylationoftheprecursor.J.Cell.Biochem.69,244-251(1998))，KRS介导37LRP的脂肪族酰化(fattyacylation)。本发明中，KRS对37LRP的脂肪族酰化完全不产生影响(结果未图示)。KRS可促进存在于膜中的67LR的细胞内稳定性，因此本发明者探明KRS是否抑制膜中存在的67LR的细胞内吞作用(endocytosis)。为了确认所述的可能性，本发明者利用环十二碳三烯(cyclohexamide)，从根本上(denovo)抑制了蛋白质合成，测试KRS在细胞膜和细胞质中是否对67LR的存在量产生影响。在KRS的表达因其特异性siRNA而受到抑制时，67LR的膜内存在量减少，同时细胞质部分的量增加(图16左侧)。与此相反，KRS的过表达如上所述，使膜内67LR的存在量增加(图16右侧)。以此结果为基础，KRS抑制67LR再次进入细胞质内，因此如同使膜内67LR的存在量增加。此外，本发明者通过脉冲追踪(pulse-chase)试验探明了67LR的代谢转换(turnover)中KRS的作用。初始蛋白质合成通过放射性蛋氨酸标记，此后受放线菌酮抑制，此后观察到67LR的消失(disappearance)。67LR在KRS因siRNA受到抑制时急剧减少，其数值在si-对照组中随时间间隔保持。(图17)。本研究者此后探明，对照组细胞的移动因层粘连蛋白处理而平均增加了6倍(图M及图18)。然而层粘连蛋白依存性细胞移动，在KRS受到si-RNA抑制时减少(图18，si-对照组及si-KRS)。此外，KRS的过表达因层粘连蛋白处理而促进的细胞移动而增加(图18，EV及KRS)。然而在细胞移动中，KRS的作用因层粘连蛋白受体因si-RNA抑制而消失(图18，si-LR，下板).KRS在少数癌细胞中作为蛋白激酶分泌(Park，S.G.etal.Humanlysyl-tRNAsynthetaseissecretedtotriggerpro-inflammatoryresponse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA102，6356-6361(2005))。当A549细胞以不同浓度精制的KRS进行处理时，该分析中KRS的细胞外因性作用除外，细胞移动几乎不受影响(图25)。相反，细胞蛋白质的合成及细胞周期，不由所述的过程的作用引起(图沈及图27)。层粘连蛋白处理引起MMP-2(matrixmetllo-proteinase-2)的活化(Givant-Horwitz,V.，Davidson,B.&Reich,R.Laminin—inducedsignalingintumorcellstheroleoftheM(r)67,OOOlamininreceptor.CancerRes.64,3572-3579(2004)),因此MMP-2的活性因层粘连蛋白活化，且在si-KRS的存在下受到抑制(图19右侧).MMP-2的表达量不受KRS的影响(图19下)。由于KRS能够促进细胞移动，因此通过特异性siRNA抑制了DRS(aspartyl-tRNAsynthetase)的表达。si_KRS及si_DRS的抑制作用可通过免疫印迹确认(图观)。注入的三种产生具有类似质量和体积的肿瘤(图四)。注入后21日将肺部分离，转移性肿瘤结节(直径大于Imm)的数目在三组之间进行比较。转移性结节的数目在对照组及DRS抑制的细胞中在KRS的抑制方面显著减少(图20及图30)。相反，所述的方法中，KRS的过表达促进了癌症转移。与共载体转染的细胞相比，筛选出表达KRS的2个其它不同的细胞(KRS-1及KRS-2)(图31)。上述细胞能够生成质量和尺寸类似的原发肿瘤(图32)。注入细胞后30日对肺进行检查时，KRS-过表达细胞与对照组细胞相比，生成较多的结节(图21及图33)。该结果暗示KRS在生物内诱导癌症转移。由于观察到层粘连蛋白受体的癌症特异性过表达(Rmtanini，G.etal.67-Kilodaltonlamininreceptorexpressioncorrelateswithworseprognosticindicatersinnon-smallcelllungcarcinomas.Clin.CancerRes.3,227-231(1997)；Viacava,P.etal.Thespectrumof67~kDlamininreceptorexpressioninbreastcarcinomaprogression.J.Pathol.182,36-44(1997)),67LR的过表达可以肺癌和乳腺癌为例通过67LR及KRS的免疫组织化检索进行分析。39个被检查的肺癌组织中，67LR过表达观察到21例(%)，其中KRS水平在19例(约90%)中增加(表1及图22上方)。同样地，40个检查出乳腺癌的患者中，21例观察到67LR过表达。其中21例均为KRS水平增加(表1及图22下方)。在他们的共表达转移中，需要通过实际观察进行确认，两种情况均在两蛋白质的表达中表现出紧密相关。表1肺癌67LR正常67LR过表达合计KRS正常10212KRS过表达81927合计182139*fisher精确T检验ρ=0·001乳腺癌67LR67LR合计正常过表达KRS正常505KRS过表达142135合计191140*fisher精确T检验p=0.018此时，可参考上述表1作出以下说明表1在肿瘤组织中的67LR和KRS表现出相28关关系。表1中，67LR的表达量与KRS表达量相关，利用肺癌和乳腺癌组织微阵列使用各自的抗体，对免疫组织化学染色，对上述两种蛋白的相对表达水平进行检测。为标记67LR使用了MluC5抗体。表达量通过样品的染色浓度进行测定，随机分为4组(0，1，2和3分)。在最后的评价，分成样品正常组(0分或1分)和过表达组O分或3分)。为评估67LR与KRS表达的相关关系，经过统计分析，通过皮尔逊χ2检验和学生t检验进行实施。此时，若P值小于0.05(P<0.05)，则作为一个有效的数值考虑。所有的统计分析通过SPSSvll.5软件(SPSS，Chicago,111)实施。含有核糖体组成因子的许过翻译因子具有多面性(Wool，I.G.ExtraribosomalfunctionsofribosomalproteinsTrendsBiochem.Sci.21,164-165(1996))，并且与多种肿瘤生成过程相关(Lee，S.W.，Kang,Y.S.&Kim，S.Multi-functionalproteinsintumorigenesis:Aminoacyl_tRNAsynthetasesandtranslationalcomponents.Curr.Proteomics3,233-247(2006)).其中，两个翻译因子KRS及p40/37LRP在生物体内表现出细胞移动及癌转移的共同作用(图18至图22).在多重ARS-复合体的组成要素中，KRS是最稳定的蛋白质，其它组成要素则需要一定的稳定性(Han,J.Μ.etal.HierarchicalNetworkbetweenthecomponentsofthemulti-tRNAsynthetasecomplex:Implicationsforcomplexformation.J.Biol.Chem.281，38663-38667(2006))，该事实提示了使其它相关蛋白质稳定的KRS的潜在能力。其中，KRS的作用也能够使67LR中的细胞稳定增加(图17).KRS与67LR之间的相互关系，提示其具有其它相关的功能。癌细胞中，过表达或如PII的过激活上位磷酸化酶引起的结果，产生结构性的(constitutive)膜转移，因此使KRS的膜水平非正常增加。此外，PI3K的活性减少，也经常与肿瘤生长和转移相关(Wymann,M.P.&Marone,R.Phosphoinositide3-kinaseindisease:timing，location，andscaffolding.Curr.Opin.CellBiol.17,141-149(2005)),并且层粘连蛋白通过PI3K±曾力口了癌症浸润(Baba,Y.etal.Laminin—332promotestheinvasionofoesophagealsquamouscellcarcinomaviaPI3Kactivation.Br.J.Cancer98，974-980(2008))。PII的结构性活化，能够引起向膜移动的KRS的磷酸化。上述条件的一部分或全部，有望在原生质膜中引起67LR的增加，并且使癌转移的层粘连蛋白信号传递得到放大。癌转移性扩张调节方面正在进行很多研究。其中，在癌症转移中的KRS通过67LR的活性，为癌症诊断及治疗提供了创新。产业应用综上所述，本发明者通过使KRS转座(translocation)在原生质膜中，使其与67LR相互作用，从而促进了肿瘤(或癌)细胞的移动，并阐明了它对癌的转移(metastasis)产生的影响。因此，本发明能够利用KRS调节癌症转移或癌细胞移动，并且进一步地实现了与原生质膜的层粘连蛋白受体(67LR)相关的细胞内代谢。本发明中阐明的KRS与层粘连蛋白受体之间的相互关系，可用于与其相关的多种疾病或顽症的治疗，可用于预防和/或诊断。权利要求1.一种调节赖氨酰tRNA合成酶(LysyltRNAsynthetase,KRS)的细胞内水平，从而调节癌症转移(cancermetastasis)的方法。2.根据权利要求1所述的调节癌症转移的方法，其特征在于，降低赖氨酰tRNA合成酶的细胞内水平，从而抑制癌症转移。3.根据权利要求1所述的调节癌症转移的方法，其特征在于，提高赖氨酰tRNA合成酶的细胞内水平，从而促进癌症转移。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的赖氨酰tRNA合成酶由序号1所示的氨基酸序列组成。5.一种调节赖氨酰tRNA合成酶的细胞内水平，从而调节癌细胞的移动(cancercellmigration)的方法。6.根据权利要求5所述的调节癌细胞的移动的方法，其特征在于，降低赖氨酰tRNA合成酶的细胞内水平，从而抑制癌细胞的移动。7.根据权利要求5所述的调节癌细胞的移动的方法，其特征在于，提高赖氨酰tRNA合成酶的细胞内水平，从而促进癌细胞的移动。8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的赖氨酰tRNA合成酶由序号1所示的氨基酸序列组成。9.一种含有表达载体或KRS的抗体作为有效成分的癌症预防及治疗用组合物，其特征在于，该表达载体中含有启动子及可被启动并与其连接的编码KRS的多核苷酸的反义RNA(antisenseRNA)或siRNA的编码多核苷酸。10.根据权利要求9所述的组合物，所述的癌症选自由大肠癌，肺癌，肝癌，胃癌，食道癌，胰腺癌，胆囊癌，肾癌，膀胱癌，前列腺癌，睾丸癌，宫颈癌，子宫内膜癌，绒毛癌，卵巢癌，乳腺癌，甲状腺癌，脑癌，头颈部癌，恶性黑色素瘤，淋巴瘤，再生障碍性贫血组成的组。11.一种将表达载体或KRS的抗体以有效量给予需要它的个体的癌症预防及治疗方法，该表达载体中含有启动子及可被启动并与其连接的编码KRS的多核苷酸的反义RNA(antisenseRNA)或siRNA的编码多核苷酸。12.一种用于制造癌症治疗剂的抗体对于表达载体或KRS的用途，该表达载体中含有启动子及可被启动并与其连接的编码KRS的多核苷酸的反义RNA(antisenseRNA)或siRNA的编码多核苷酸。13.—种癌症转移或癌细胞移动调节制剂的筛选方法，该方法包括以下步骤(a)在试验制剂存在下使KRS与试验制剂接触；(b)测定KRS的活性，筛选使KRS的活性发生变化的试验制剂；(c)测试筛选出的制剂是否调节癌症转移或癌细胞移动。14.一种阻碍KRS与67LR之间的相互作用的制剂的筛选方法，该方法包括以下步骤(a)在试验制剂存在下，使KRS、层粘连蛋白受体(67LR)及试验制剂接触；(b)测试所述的试验制剂是否对KRS与层粘连蛋白受体的相互作用(interaction)进行调节。15.一种诊断肺癌或乳腺癌的方法，该方法包括以下步骤(a)在样品中分析67LR是否过表达；(b)在67LR过表达的样品中，分析KRS是否过表达。全文摘要本发明涉及通过使赖氨酰tRNA合成酶转座(translocation)在原生质膜中，使其与67LR相互作用，从而促进肿瘤(或癌)细胞的移动，使对癌的转移(metastasis)产生影响的，赖氨酰tRNA合成酶的新功能，具体地说，利用所述的新功能，调节赖氨酰tRNA合成酶的细胞内水平，从而调节癌症转移或癌细胞的移动的方法，为预防或治疗癌症，具有抑制KRS表达的组成的表达载体的用途，为预防或治疗癌症，抑制KRS活性的制剂的用途，筛选癌症转移或癌细胞移动调节制剂的方法，及筛选抑制KRS与67LR的相互作用的制剂的方法。因此，本发明能够利用KRS调节癌症转移或癌细胞移动，从而调节原生质膜的层粘连蛋白受体(67LR)的相关细胞内代谢。本发明中阐明的KRS与层粘连蛋白受体之间的关系，可用于与其相关的多种已经或顽症的治疗、预防和/或诊断。文档编号C12N15/113GK102124104SQ200880130752公开日2011年7月13日申请日期2008年8月18日优先权日2008年8月18日发明者崔镇宇,金圣勋申请人:财团法人首尔大学校产学协力财团