专利名称：雷弗松氏菌及在制备(r)-[3,5-二(三氟甲基)苯基]乙醇的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一株可用于微生物催化不对称还原[3，5_ 二(三氟甲基)苯基] 乙酮制备高光学纯度(R)-[3，5-二(三氟甲基)苯基]乙醇的新菌种——雷弗松氏菌 (Leifsonia xyli) HS0904 及其应用。
背景技术：
(R)-[3，5_ 二(三氟甲基)苯基]乙醇的化学结构式为
权利要求
1.雷弗松氏菌(Leifsoniaxyli)HS0904，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址中 国，武汉，武汉大学，邮编430072 ；保藏编号CCTCC NO =M 201(^41，保藏日期2010年9月 21日。
2.权利要求1所述的雷弗松氏菌(Leifsoniaxyli)HS0904在微生物催化不对称还原 制备(R)_[3，5-二(三氟甲基)苯基]乙醇中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述应用为以[3，5_二(三氟甲基)苯基] 乙酮为底物，以雷弗松氏菌HS0904经发酵获得的湿菌体细胞为酶源，在25°C 35°C下，于 pH为6. 0 8. 5的缓冲液中进行转化反应12 60小时，反应结束后反应液经分离纯化得 到(R)_[3，5-二(三氟甲基)苯基]乙醇。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述缓冲液转化体系中，底物[3，5_二(三 氟甲基)苯基]乙酮的初始浓度为20 200mmol/L缓冲液，雷弗松氏菌HS0904湿菌体细 胞的添加量以湿重计为50 300g/L缓冲液。
5.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述湿菌体细胞由如下方法获得将雷弗松 氏菌HS0904接种至发酵培养基，30°C、200rpm摇床培养48小时，发酵液经离心、洗涤沉淀， 收集得到湿菌体细胞；所述发酵培养基终浓度组成如下葡萄糖20 30g/L，酵母膏10 20g/L, ΚΗ2Ρ042· 0 4. 5g/L, MgSO4 · 7H20 0· 3 0. 6g/L, NaCl 0· 2 0. 5g/L, Li2SO4O. 1 0. 2g/L，溶剂为水，pH 6. 0 7. 5。
6.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述转化体系中还添加有辅助底物，所述辅 助底物为下列之一①葡萄糖、②蔗糖、③麦芽糖、④异丙醇、⑤甲醇、⑥乙醇；辅助底物为 葡萄糖、蔗糖或麦芽糖时，加入量为20 200g/L缓冲液，辅助底物为甲醇、乙醇或异丙醇 时，加入体积为缓冲液体积的10 30%。
7.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述辅助底物为异丙醇。
8.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述反应在pH8.0的磷酸缓冲液中进行。
9.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述应用方法如下(1)将雷弗松氏菌HS0904接种至发酵培养基，30°C、200rpm振荡培养48小时，发酵液 经离心、洗涤沉淀，收集得到湿菌体细胞；所述发酵培养基终浓度组成如下葡萄糖25g/L， 酵母膏 20g/L，KH2P044g/L，MgSO4 · 7H20 0. 6g/L，NaCl 0. 4g/L，Li2SO4O. 2g/L，溶剂为水，pH 6. 5。(2)取0.2Μ pH为8. 0的磷酸缓冲液，加入步骤(1)所得湿菌体细胞，所述湿菌体细胞 浓度以湿重计为150g/L缓冲液，加入底物[3，5-二(三氟甲基)苯基]乙酮至底物浓度 为50mmol/L，并加入体积为缓冲液体积10%的异丙醇作为辅助底物，30°C摇床振荡反应M 小时，反应结束后将反应液离心，取上清液，加入等体积的乙酸乙酯萃取两次，得到(R)_[3，5-二(三氟甲基)苯基]乙醇。
全文摘要
本发明提供了一株可用于微生物催化不对称还原[3，5-二(三氟甲基)苯基]乙酮制备高光学纯度的(R)-[3，5-二(三氟甲基)苯基]乙醇的新菌种——雷弗松氏菌(Leifsonia xyli)HS0904及其应用。所述雷弗松氏菌(Leifsonia xyli)HS0904保藏于中国典型培养物保藏中心，地址中国，武汉，武汉大学，邮编430072；保藏编号CCTCC NOM2010241，保藏日期2010年9月21日。采用该新菌种催化制备光学纯(R)-[3，5-二(三氟甲基)苯基]乙醇具有底物浓度高，立体选择性好，产物光学纯度高等优点。本发明菌株与以往同类研究报道的微生物不同，并且催化转化的底物浓度和产率均高于文献报道，从而在研究微生物催化法制备阿瑞吡坦药物关键手性中间体(R)-[3，5-二(三氟甲基)苯基]乙醇方面提供了有益的参考。
文档编号C12R1/01GK102102087SQ20101052304
公开日2011年6月22日 申请日期2010年10月28日 优先权日2010年10月28日
发明者何军邀, 欧阳启, 王普, 蔡进波 申请人:浙江工业大学