专利名称：兔肺炎克雷伯氏菌凝集原及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉生物技术领域，特别涉及兔肺炎克雷伯氏菌的凝集反应实验技木。
背景技术：
兔肺炎克雷伯氏菌病(Klebsiellosis)是由肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)引起兔的肺炎和其它器官化脓性炎症为特征的散发性疾病，常呈地方性流行，很少造成大規模流行。家兔发病后表现出一系列的呼吸道症状，消化紊乱，母兔流产，严重者发生败血症而死亡。各种品种、年龄和性别的兔都对本菌有易感性，以断奶前后的仔兔和
妊娠母兔发病率最高，子兔感染后极度衰竭，迅速死亡，危害十分严重。由于本病的临床症状和病理变化缺乏特征性，仅根据临床资料难以作出准确的诊断，通常只能在有条件的实验室做细菌学检查才能确诊，这样就会耽误防治的最佳时间。为了在基层兽医站或养兔场能快速诊断本病，以便迅速制定控制措施，建立ー种快速检测试剂盒及检测方法十分必要。目前，细菌病检测方法通常有形态学观察、培养特性鉴定、生化特性鉴定、免疫学检测和核酸检测。兔肺炎克雷伯氏菌病的诊断主要通过细菌分离培养、形态学观察、生化鉴定、动物接种试验，这种方法繁琐、费吋。免疫学检测方法主要有荚膜肿胀试验、平板凝集反应、SPA协同凝集试验、对流免疫电泳、间接免疫荧光试验。荚膜肿胀试验虽然快速、方便，但需要借助显微镜观察，在很多基层兽医站和兔场都无法进行。对流免疫电泳、间接免疫荧光试验虽然准确，但对操作人员的技术要求较高，且需要较昂贵的设备。PCR检测法灵敏度高、准确，但需要昂贵的仪器和试剂，检测成本高，对操作人员技术要求较高，不适合基层用。通过文献检索尚未发现兔肺炎克雷伯氏菌微量凝集试剂盒及检测方法的相关研究报道，特别是用复红对兔肺炎克雷伯氏菌进行染色后再进行微量凝集试验的方法。
发明内容
本发明的目的之ー在于提供ー种兔肺炎克雷伯氏菌凝集原，其可以作为凝集反应实验试剂。凝集反应是ー种血清学反应，颗粒性抗原(完整的病原微生物或红细胞等)与相应抗体结合，在有电介质存在的条件下，经过一定时间，出现肉眼可见的凝集小块。參与凝集反应的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。传统的凝集原不经过任何色素染色。本技术方案必须经过染料染色，确保实验结果可直观判断。传统的染料包括结晶紫、台盼蓝、美兰、吖啶橙、罗丹明及复红染液等。设定了众多平行实验筛选出兔肺炎克雷伯氏菌凝集原，由经复红染色液染色的兔肺炎克雷伯氏菌液制备而成。进ー步，所述兔肺炎克雷伯氏菌液中每毫升含有80-120亿个兔肺炎克雷伯氏菌，所述复红染液与所述兔肺炎克雷伯氏菌液的体积比为8-12 I。作为优选，所述兔肺炎克雷伯氏菌液中每毫升含有100亿个兔肺炎克雷伯氏菌，所述复红染液与所述兔肺炎克雷伯氏菌液的体积比为10 I。本发明的目的之ニ在于提供上述兔肺炎克雷伯氏菌凝集原的应用方法，该方法操作简单，便于掌握，无需借助昂贵精密的仪器。为实现上述目的，本发明的技术方案为所述的兔肺炎克雷伯氏菌凝集原的应用方法，所述应用方法具体为凝集反应实验中的应用方法将所述兔肺炎克雷伯氏菌凝集原与凝集素结合，判断凝集结果。所述应用方法还设有平行实验组，包括阳性对照组和/或阴性对照组和/或空白对照组。可以通过同空白对照组、阴性对照组及阳性对照组比对数据，进一歩判断样品为阴性或阳性。基于上述原理，上述兔肺炎克雷伯氏菌凝集原的应用方法，既可以用于对兔肺炎克雷伯氏菌的定性检测，又可以用于兔肺炎克雷伯氏菌抗体定性或定量检测，或测其效价。作为优选方案,所述凝集反应实验为微量凝集反应实验，以96孔微量反应板为载体进行。
作为优选方案，所述兔肺炎克雷伯氏菌凝集原与凝集素的体积比为I : I。作为优选方案，所述凝集结果的判断方式有肉眼观察。肉眼观察或许具备一定的主观性，一般技术员基本可实现定性检测；为了降低主观性导致的误差，可设平行实验组，包括阳性对照组和/或阴性对照组和/或空白对照组；肉眼观察判定凝集结果的程度标准为++++:孔底形成红色的伞状沉淀，或沉淀物呈红色的片状、块状或颗粒状，直径彡O. 20cm,即100%凝集；+++ :菌体凝集呈红色的片状、块状或颗粒状，直径O. 15cm-0. 19cm,，即75%凝集；++ :孔底有凝集沉淀，呈红色的块状或小片絮状物，直径O. IOcm-O. 14cm,即50%
凝集;+ :空底红色凝集沉淀或仅有凝集沉淀的痕迹，直径O. Olcm-O. 09cm,即25%凝集；-:液体呈浑浊、不透明，无红色凝集沉淀或凝集沉淀的痕迹；以出现“++”以上判为所述兔肺炎克雷伯氏菌凝集原与所述凝集素凝集；或以出现“++”的血清最高稀释度为待检血清效价，如血清稀释度为I : I时未出现凝集反应，则待检血清效价仍记为O,如果出现凝集反应,则记为待检血清效价记为I 2 ;生理盐水对照中抗体凝集效价应< I : 2。进ー步，所述应用方法是检测兔肺炎克雷伯氏菌抗体的方法，具体为将所述兔肺炎克雷伯氏菌凝集原与待测样品充分混合，当所述兔肺炎克雷伯氏菌凝集原和所述待测样品发生凝集时，判定待测样品中存在兔肺炎克雷伯氏圃抗体。作为优选方案，所述待测样品为血清，作1-256倍体积稀释。作为优选方案，所述判断结果为吸光度检测，判断标准为当OD28tl ^ O. 5时，判为不凝集；0. 2 < OD280 < O. 5时，判为可疑；0D28(i く O. 2时判为凝集。与现有的技术相比，本发明的有益效果在于兔肺炎克雷伯氏菌微量凝集试剂盒及检测方法与平板凝集反应、SPA协同凝集试验相比较，共同的优点是不需要昂贵的仪器和试剂、成本低、快速、操作简便、对操作人员技术要求不高、结果直观，适合基层现场检测应用，但平板凝集反应和SPA协同凝集试验的检测抗原未染色，凝集颗粒模糊、不便观察，而兔肺炎克雷伯氏菌微量凝集试剂盒的检测抗原进行了染色，凝集颗粒或凝集块呈红色，更易于观察，其检测方法既可以定量检测兔血清抗体效价，又可以定性检测兔肺炎克雷伯氏菌抗原，特别适合基层兽医站、兔场现场诊断兔肺炎克雷伯氏菌病，同时还可以用于兔肺炎克雷伯氏菌病的检疫和流行病学调查。本发明建立了兔肺炎克雷伯氏菌微量凝集试剂盒及检测方法，快速、特异性强，既可用于检测兔肺炎克雷伯氏菌抗体，又可用于检测兔肺炎克雷伯氏菌抗原，用于兔肺炎克雷伯氏菌病的快速诊断、检疫及流行病学调查。用该试剂盒及检测方法检测兔肺炎克雷伯氏菌抗体或抗原，凝集颗粒或凝集块呈红色，结果易判定。用该试剂盒及检测方法操作简便，不需要昂贵的仪器设备和试剂，一般技术员都可以操作，检测成本低，适合在基层和兔场应用。
具体实施例方式抗原是指能够刺激机体产生(特异性)免疫应答，井能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体内外结合，发生免疫效应(特异性反应)的物质。凝集原是指參与凝集反应的抗原。本发明中的凝集原均指兔肺炎克雷伯氏菌凝集 原。凝集素是指參与凝集反应的抗体。本发明中涉及的凝集素均指兔肺炎克雷伯氏菌凝集素。凝集反应实验ー种血清学反应。颗粒性抗原(完整的病原微生物或红细胞等)与相应抗体结合，经过一定时间，出现肉眼可见的凝集小块。待测样品的形式可以为液体或固体；通过检测液体或固体中是否含有兔肺炎克雷伯氏菌抗体。所述抗体主要分布在血清中，也分布于组织液及外分泌液中。所述抗体可以是体内分泌的，也可以是通过生物学方法体外获得的。主要材料及仪器兔肺炎克雷伯氏菌SZ株(本实验室分离鉴定)，TSA培养基(BD公司)，复红染色液、96孔微量反应板(杭州微生物试剂公司)，体重I. 5-2. OKg的试验家兔(西南大学荣昌校区实验动物科)，稀释液(生理盐水)、兔巴氏杆菌阳性血清、兔波氏杆菌阳性血清、兔葡萄球菌阳性血清、兔魏氏梭菌阳性血清(本实验室制备)。恒温培养箱TG-16(四川蜀科仪器有限公司)，离心机HPX-9080MBE (上海博迅实业有限公司)。分光光度计 223 IHamburg (Eppendorf)。实施例I试剂的配制一待测样品血清的制备血清的制备离体的兔的血液，自然凝固，分离血清，置56°C水浴灭能30分钟，备用。ニ凝集原的制备将兔肺炎克雷伯氏菌接种TSA琼脂平板，置37°C恒温箱培养24h，用生理盐水洗下菌苔；纯粹检验；活菌计数；调整菌液浓度为100亿个/mL ;加入相当于菌液体积O. 3%的甲醛溶液，摇匀，置37°C恒温箱灭活24小时(每4h振摇I次)；在所述菌液中加入复红染色液，摇匀，4°C冰箱过夜；5000rpm离心lOmin，弃上清，加入生理盐水悬浮沉淀，如此洗涤3次后，加入生理盐水至原体积，悬浮沉淀；无菌检验；加入1/10000的硫柳汞防腐；分装成2mL/瓶，置4-8°C冰箱保存。作为优选方案，按ImL菌液中加入100 μ L复红染色液，实施例2和3中，采用该配方制备的试剂作为凝集原。
三阳性血清的制备将兔肺炎克雷伯氏菌接种TSA琼脂平板，置37°C恒温箱培养24小时，用生理盐水洗下菌苔，菌液纯粹检验，活菌计数，菌液浓度应在100亿个/mL以上，加入相当于菌液体积O. 3%的甲醛溶液，摇匀，置37°C恒温箱灭活24小时，每4小时振摇I次，无菌检验，加入相当于菌液体积20%的铝胶，混匀，即为免疫抗原。将抗原接种健康家兔，基础免疫为每只兔皮下注射lmL，14d后加强免疫，每只兔皮下注射2mL，10天后采血，分离血清，56°C水浴灭能30min，加入1/10000的硫柳汞防腐，分装成2mL/管，-20°C保存。血清中含有凝集素(兔肺炎克雷伯氏菌凝集素)。四阴性血清的制备选择未免疫兔肺炎克雷伯氏菌疫苗的健康家兔，进ー步用兔肺炎克雷伯氏菌所 述凝集原检测其血清抗体为阴性的免，无菌采血，分离血清，56°C水浴灭能30min，加入1/10000的硫柳汞防腐，分装成ImL/管，-20°C保存。五稀释液的配制稀释液的配制。氯化钠为分析纯，用蒸馏水配制O. 9%的生理盐水，121°C灭菌30分钟，冷却，分装成5mL/瓶，置4-8°C冰箱保存。将上述凝集原与上述阳性血清在玻板上进行结合，经具有凝集反应实验技能的技术员判定，发生凝集反应。将上述凝集原与上述阳性血清以96孔微量反应板为载体进行结合，经具有凝集反应实验技能的技术员判定，发生凝集反应。六兔肺炎克雷伯氏菌微量凝集试验结果判定标准的制定在96孔微量反应板上加生理盐水，每孔50 μ L，在第一孔中加兔肺炎克雷伯氏菌阳性血清 50 μ L，混匀，分别进行 I : 2、1 : 4、1 : 8、1 : 16、1 : 32、1 : 64 :、1 : 128、
I 256倍体积稀释；阴性血清对照4孔，分别是原液、I 2、1 4、1 8倍体积稀释；生理盐水对照3孔，每孔50 μし在阳性血清、阴性血清对照和生理盐水对照各孔中加入兔肺炎克雷伯氏菌微量凝集抗原(120201批)50 μ L，混匀，4-8°C冰箱静置3h，第I小时每IOmin观察一次，观察红色凝集颗粒或凝集块的出现。最后判定结果静置3小时后，将微量反应板倾斜约60°，在2分钟内从微量反应板背面观察凝集結果。结果见下表“兔肺炎克雷伯氏菌微量凝集试验结果判定表”。用所制备的120201批兔肺炎克雷伯氏菌凝集原与兔肺炎克雷伯氏菌阳性血清做微量凝集试验，在4-8°C冰箱静置10min、20min后，阳性血清第1_2孔可见红色凝集颗粒或红色凝集块，第3_4孔为可疑，第5-12孔不凝集，阴性血清和生理盐水对照孔无凝集；静置30min、40min后，阳性血清第1-4孔可见红色凝集颗粒或红色凝集块，第5-6孔为可疑，第7-12孔不凝集，阴性血清和生理盐水对照孔无凝集；静置50min、60min后，阳性血清第1_6孔可见红色凝集颗粒或红色凝集块，第7-12孔不凝集，阴性血清和生理盐水对照孔无凝集；静置60min后，将微量反应板倾斜约60°，在2min内从微量反应板背面观察，阳性血清第1_6孔可见红色凝集颗粒或凝集块，第7-12无凝集，阴性血清和生理盐水对照孔无凝集；静置3h后，将微量反应板倾斜约60°，在2min内从微量反应板背面观察，阳性血清第1_6孔有清晰的红色凝集颗粒或凝集块，第7-12孔无凝集，阴性血清和生理盐水对照孔都无凝集，判定阳性血清抗体效价是61og2。由此可见，兔肺炎克雷伯氏菌微量凝集试验结果判定方法是微量反应板加样混匀后，置4-8°C冰箱静置3h，将微量反应板倾斜约60°，在2min内从微量反应板背面观察。判定标准是++++:孔底形成红色的伞状沉淀，或沉淀物呈红色的片状、块状或颗粒状，直径彡O. 20cm,即100%凝集；+++:菌体大部分凝集呈红色的片状、块状或颗粒状，直径O. 15cm O. 19cm，，即75%凝集；++ :孔底有明显的凝集沉淀，呈红色的块状或小片絮状物，直径O. IOcm O. 14cm,即50%凝集；+ :空底有不甚显著的红色凝集沉淀或仅有凝集沉淀的痕迹，直径O. Olcm O. 09cm,即 25% 凝集； -:液体呈浑浊、不透明，无红色凝集沉淀或凝集沉淀的痕迹。以出现++的血清最高稀释度为待检血清效价。如果血清稀释度为I : I时未出现凝集反应，则待检血清效价仍记为O ;如果出现凝集反应,则记为待检血清效价记为I : 2。生理盐水对照中抗体凝集效价应< 1:2。兔肺炎克雷伯氏囷微量减集试验结果判定表
lf,vlPiJfIuiiI-i.'ftt 十
抗原 な:則性_—沽稀释度(XI< 2)释度(X 水
V , . 、log2)对照
1234 S 6789 1011 12 0123
I v)I ·"""" """"""""
I K β II^iTII II_
Ζ,υI s~T~ — — — — — — — — — 一 — 一 — — — — —注“ + ”表示凝集，表示不凝集，“ 土 ”表示可疑。实施例2基于检测兔肺炎克雷伯氏菌抗体的方法待检血清的制备采集患病兔或患病耐过兔的血液，自然凝固，分离血清，置56°C水浴灭能30min,备用。待检血清的稀释在96孔微量反应板上加稀释液，甸孔50 u L,在弟一孔中加待检血清 50 μ L，混匀，分别进行 I : 2、1 : 4、1 : 8、1 : 16、1 : 32、1 : 64 :、1 : 128、I 256倍体积稀释，设阳性血清(以实施例I制备的阳性血清)、阴性血清(以实施例I制备的阴性血清)、稀释液对照(以实施例I制备的稀释液)。加入凝集原每孔加入50 μ L检测抗原，轻轻摇匀，置4-8 °C冰箱静置3小时。结果判定将微量反应板倾斜约60°，在2分钟内，从微量反应板背面观察。判定标准为++++:孔底形成红色的伞状沉淀，或沉淀物呈红色的片状、块状或颗粒状，直径彡O. 20cm,即100%凝集；+++:菌体大部分凝集呈红色的片状、块状或颗粒状，直径O. 15cm O. 19cm，，即75%凝集；
++ :孔底有明显的凝集沉淀，呈红色的块状或小片絮状物，直径O. IOcm O. 14cm,即50%凝集；+ :空底有不甚显著的红色凝集沉淀或仅有凝集沉淀的痕迹，直径O. Olcm O. 09cm,即 25% 凝集；-:液体呈浑浊、不透明，无红色凝集沉淀或凝集沉淀的痕迹。以出现++的血清最高稀释度为待检血清效价。如果血清稀释度为I : I时未出现凝集反应，则待检血清效价仍记为O ;如果出现凝集反应,则记为待检血清效价记为I : 2。生理盐水对照中抗体凝集效价应< 1:2。或采用分光光度计测定吸光度，判定标准为当OD28tl ^ O. 5时，判为不凝集；0. 2< OD280 < O. 5时，判为可疑；OD280 く O. 2时判为凝集。 经分光光度仪检测的结果和肉眼判断的结果一致。结果见表I。从表I看出，用所述凝集原检测13只发病兔血清抗体，其中6只兔的抗体凝集效价为llog2-31og2(l 2 I : 8)，另7只为阴性；检测7只发病耐过兔血清抗体，其中4只兔的抗体凝集效价为410g2-610g2(l 16 I : 64)，另3只为阴性；阳性血清抗体凝集效价为61og2(l 64)，阴性血清和生理盐水对照为不凝集。表I兔肺炎克雷伯氏菌微量凝集试剂盒检测抗体结果表
2- - 3 I - 醫
S瘤兔血 (Xlog2)
ο _ 2 - - 2
耐过兔愈清(XIog2)4 - 5 ........ 6 4
ΡΒ*Ι41ι淸对麗(Xlog2)6
酬性血沽对遐一
故水对照一注表示不凝集。实施例3疑似兔肺炎克雷伯氏菌的定性检测a、待检样本的检测从临床病死兔分尚到10株疑似兔肺炎克雷伯氏圃,将待检圃接种TSA琼脂平板，置37°C恒温箱培养24h，用生理盐水洗下菌苔；活菌计数；调整菌液浓度为120亿个/mL ;按菌液量加入甲醛使其体积终浓度为O. 3%，摇匀，置37 °C恒温箱灭活24h (每4h振摇I次)；按ImL菌液加入120 μ L复红染色液，摇匀，4°C冰箱过夜；5000rpm离心lOmin，弃上清，加入生理盐水悬浮沉淀，如此洗涤3次后，加入生理盐水至原体积，悬浮沉淀，即为待检抗原。b、在微量反应板上加实施例I方法制备的所述阳性血清(实施例I制备的阳性血清)，每孔50 μ L，再每孔分别加待检抗原50 μ L ;设待检抗原加阴性血清对照组(实施例I制备的阴性血清)、待检抗原加生理盐水对照、检测抗原加阴性血清对照、检测抗原加生理盐水对照、检测抗原加阳性血清対照。混匀，置4-8°C冰箱静置3小吋。C、观察結果。将微量反应板倾斜约60°，在2分钟内从微量反应板背面观察。判定标准为++++:孔底形成红色的伞状沉淀，或沉淀物呈红色的片状、块状或颗粒状，直径彡O. 20cm,即100%凝集；+++ :菌体大部分凝集呈红色的片状、块状或颗粒状，直径O. 15cm O. 19cm,，即75%凝集；++ :孔底有明显的凝集沉淀，呈红色的块状或小片絮状物，直径O. IOcm O. 14cm,即50%凝集；+ :空底有不甚显著的红色凝集沉淀或仅有凝集沉淀的痕迹，直径O. Olcm O. 09cm,即 25% 凝集；-:液体呈浑浊、不透明，无红色凝集沉淀或凝集沉淀的痕迹。以出现++以上判为凝集。结果见表2。从表2看出，用所述凝集素检测10份待检菌，其中7份与兔肺炎克雷伯氏菌阳性血清发生特异性凝集反应，3份无凝集反应；待检样品与阴性血清和生理盐水都无凝集反应；兔肺炎克雷伯氏菌检测抗原与阳性血清发生特异性凝集反应，与阴性血清和生理盐水都无凝集反应。说明10株疑似兔肺炎克雷伯氏菌中有7株是兔肺炎克雷伯氏菌，有3株不是该菌。表2微量凝集试剂盒检测兔肺炎克雷伯氏菌的试验结果表待测样品(疑似免肺炎iMiiilK爾)
权利要求
1.兔肺炎克雷伯氏菌凝集原，其特征在于由经复红染色液染色的兔肺炎克雷伯氏菌液制备而成。
2.根据权利要求I所述的兔肺炎克雷伯氏菌凝集原，其特征在于所述兔肺炎克雷伯氏菌液中每毫升含有80-120亿个兔肺炎克雷伯氏菌，所述复红染液与所述兔肺炎克雷伯氏菌液的体积比为8-12 I。
3.根据权利要求I所述的兔肺炎克雷伯氏菌凝集原，其特征在于所述兔肺炎克雷伯氏菌液中每毫升含有100亿个兔肺炎克雷伯氏菌，所述复红染液与所述兔肺炎克雷伯氏菌液的体积比为10 : I。
4.权利要求1-3任一项所述的兔肺炎克雷伯氏菌凝集原的应用方法，所述应用方法具体为在凝集反应实验中的应用方法将所述兔肺炎克雷伯氏菌凝集原与凝集素结合，判断凝集结果。
5.根据权利要求4所述的应用方法，其特征在于，所述凝集反应实验为微量凝集反应实验，以96孔微量反应板为载体进行。
6.根据权利要求4所述的应用方法，其特征在于，所述兔肺炎克雷伯氏菌凝集原与凝集素的体积比为I : I。
7.根据权利要求4所述的应用方法，其特征在于，所述凝集结果的判断方式为肉眼观察，判定凝集结果的程度标准为 ++++:孔底形成红色的伞状沉淀，或沉淀物呈红色的片状、块状或颗粒状，直径彡O. 20cm,即100%凝集； +++ :菌体凝集呈红色的片状、块状或颗粒状，直径O. 15cm-0. 19cm,，即75%凝集； ++ :孔底有凝集沉淀，呈红色的块状或小片絮状物，直径O. IOcm-O. 14cm，即50%凝集； + :空底红色凝集沉淀或仅有凝集沉淀的痕迹，直径O. Olcm-O. 09cm,即25%凝集； -:液体呈浑浊、不透明，无红色凝集沉淀或凝集沉淀的痕迹； 以出现“++”以上判为所述兔肺炎克雷伯氏菌凝集原与所述凝集素凝集； 或以出现“++”的血清最高稀释度为待检血清效价，如血清稀释度为I : I时未出现凝集反应,则待检血清效价仍记为O,如果出现凝集反应,则记为待检血清效价记为I : 2 ;生理盐水对照中抗体凝集效价应< 1:2。
8.根据权利要求4所述的应用方法，其特征在于，所述应用方法是检测兔肺炎克雷伯氏菌抗体的方法，具体为将所述兔肺炎克雷伯氏菌凝集原与待测样品充分混合，当所述兔肺炎克雷伯氏菌凝集原和所述待测样品发生凝集时，判定待测样品中是否存在兔肺炎克雷伯氏菌抗体、其效价或含量。
9.根据权利要求4所述的应用方法，其特征在于，所述待测样品为血清，进行I 256倍体积稀释。
10.根据权利要求4所述的应用方法，其特征在于，所述判断结果为吸光度检测，判断标准为当OD28tl彡O. 5时，判为不凝集；0. 2 < OD280 < O. 5时，判为可疑；0D28(I ( O. 2时判为凝集。
全文摘要
本发明涉生物技术领域，特别涉及兔肺炎克雷伯氏菌的凝集反应实验技术，兔肺炎克雷伯氏菌凝集原，由经复红染色液染色的兔肺炎克雷伯氏菌液制备而成；所述应用方法具体为凝集反应实验中的应用方法将所述兔肺炎克雷伯氏菌凝集原与凝集素结合，判断凝集结果；本发明不需要昂贵的仪器和试剂、成本低、快速、操作简便、对操作人员技术要求不高、结果直观，适合基层现场检测应用，兔肺炎克雷伯氏菌微量凝集试剂盒的检测抗原进行了染色，凝集颗粒或凝集块呈红色，更易于观察，其检测方法既可以定量检测兔血清抗体效价，又可以定性检测兔肺炎克雷伯氏菌抗原，特别适合基层兽医站、兔场现场诊断兔肺炎克雷伯氏菌。
文档编号G01N33/536GK102818891SQ20121030775
公开日2012年12月12日 申请日期2012年8月27日 优先权日2012年8月27日
发明者王孝友, 杨睿, 沈克飞, 徐登峰, 付利芝, 黄伟 申请人:重庆市畜牧科学院