专利名称：乳腺腺泡培养皿的制作方法
技术领域：
乳腺腺泡培养皿技术领域[0001 ] 本实用新型涉及一种乳腺腺泡培养装置。
背景技术[0002]体外构建的乳腺腺泡模型是研究乳腺发育与功能的研究载体。以往在体外研究 乳腺的泌乳功能时均以乳腺上皮细胞作为研究载体。但是乳腺上皮细胞一旦从乳腺组 织中分离出来，进行常规的细胞培养，随着传代次数的增加，其组织特异性功能逐渐消 失，大大降低了细胞实验模拟体内环境的真实性。而在基质上培养构建的乳腺腺泡模型 保证了其与体内腺泡在结构和功能上的一致性。以此乳腺腺泡模型为载体开展研究，大 大增加了乳腺生物学研究实验结果的直观性、准确性和科学性。乳腺腺泡的体外构建方 式一直是制约本类型时间进行的关键因素，长期以来没有专门的乳腺腺泡构建装置，而 使用普通的细胞培养板进行乳腺腺泡的构建，有培养基加入量少，底面厚度过大、增加 了培养基质后厚度不利于激光共聚焦显微镜观察等缺点。发明内容[0003]本实用新型为了解决现有普通的细胞培养板进行乳腺腺泡的构建有培养基加入 量少，底面厚度过大、增加了培养基质后厚度不利于激光共聚焦显微镜观察等缺点，而 提出了一种乳腺腺泡培养皿。[0004]本实用新型由带有上盖1的培养基底2组成，培养基底2的底面和侧壁围成的培 养腔3分为上下两部分，上部培养腔为漏斗形培养基添加区，下部培养腔为圆柱形基质 区。[0005]本实用新型一种专门用于哺乳动物乳腺腺泡构建的培养皿，其结构有利于基质 的铺设，有利于培养基的添加，有利于实验结果的显微镜观察，将会为乳腺腺泡构建提 供一种简便、稳定、廉价的方式。
[0006]图1的本实用新型的主视图剖视图，图2是培养基底2的俯视图。
具体实施方式
[0007]具体实施方式
一结合图1和图2说明本实施方式，本实施方式由带有上盖1 的培养基底2组成，培养基底2的底面和侧壁围成的培养腔3分为上下两部分，上部培养 腔为漏斗形培养基添加区，下部培养腔为圆柱形基质区。[0008]具体实施方式
二 结合图1说明本实施方式，本实施方式与具体实施方式
一 不同点在于培养基底2的圆柱形基质区的底面为观测区，所述底面为透明底面，其厚度 为0.15mm。其它组成和连接方式与具体实施方式
一相同。[0009]具体实施方式
三 结合图1说明本实施方式，本实施方式与具体实施方式
一或二不同点在于下部培养腔的高度为1mm。其它组成和连接方式与具体实施方式
一或二 相同。[0010]具体实施方式
四 结合图1和图2说明本实施方式，本实施方式与具体实施 方式三不同点在于圆柱形基质区的直径和观测区的直径均为10mm。其它组成和连接方 式与具体实施方式
三相同。[0011]具体实施方式
五 结合图1和图2说明本实施方式，本实施方式与具体实施 方式一或四不同点在于培养基底2的外径为30mm，高度10mm。其它组成和连接方式与具体实施方式
一或四相同。[0012]具体实施方式
六本实施方式与具体实施方式
五不同点在于培养基底2为透 明塑料的培养基底。其它组成和连接方式与具体实施方式
五相同。[0013]本实用新型内容不仅限于上述各实施方式的内容，其中一个或几个具体实施方 式的组合同样也可以实现发明的目的。[0014]原理[0015]本实用新型是一乳腺腺泡的专用培养器皿。培养基底2上方盖有上盖1 ；培养 腔3分为上下两部分，下部培养腔为圆柱形基质区，其高度1mm，此区域为腺泡培养基 质的铺设区；上部培养腔为漏斗形培养基添加区，漏斗的形状有利于接种的分散的乳腺 上皮细胞全部沉降到铺设的基质之上，进而发育成为腺泡结构，漏斗形也有利于储存更 多地培养基，有利于细胞的生长，底面位于圆柱形基质区下部的观测区厚度0.15mm，直 径为IOmm的透明超薄底面，有利于乳腺腺泡培养结果的倒置显微镜或激光共聚焦显微 镜观察。[0016]本实用新型的培养皿使用方法[0017](1)将Growth factor-reduced4°C条件下融解，均勻铺在4°C预冷的乳腺腺泡培养皿上，注意避免产生气泡，在培养皿的圆柱形基质铺设区形成厚度 5 IOmm的基质层；将铺好基质的培养皿置于37°C细胞培养箱中60 min，使液态基质成 为基质凝胶。[0018](2)采用胰酶-EDTA溶液消化原代培养的乳腺上皮细胞5min，1500rpm离心 5min,收集细胞。[0019](3)将收集到的乳腺上皮细胞悬浮于4ml的腺泡生长培养液中，用1000 μ 1的 加样枪轻轻将细胞团吹散，获得均勻的细胞悬液。[0020](4)用细胞计数板对细胞悬液进行细胞计数，然后用腺泡生长培养液将细胞稀 释到IXioVml密度。[0021](5)在铺好基质的乳腺腺泡培养皿中加入2 ml密度为1 X 104/ml的细胞悬液， 相差显微镜观察。[0022](6)将接种后的细胞培养板置于培养箱中培养(37°C，5% CO2)；每4日更换 一次分析培养基；培养15日可获得具有泌乳能力的乳腺腺泡。
权利要求1.乳腺腺泡培养皿，其特征在于它由带有上盖(1)的培养基底( 组成，培养基底 (2)的底面和侧壁围成的培养腔C3)分为上下两部分，上部培养腔为漏斗形培养基添加 区，下部培养腔为圆柱形基质区。
2.根据权利要求1所述的乳腺腺泡培养皿，其特征在于培养基底(2的圆柱形基质区 的底面为观测区，所述底面为透明底面，其厚度为0.15mm。
3.根据权利要求1或2所述的乳腺腺泡培养皿，其特征在于圆柱形基质区的高度为 1mm0
4.根据权利要求3所述的乳腺腺泡培养皿，其特征在于圆柱形基质区的直径和观测区 的直径均为10mm。
5.根据权利要求1或4所述的乳腺腺泡培养皿，其特征在于培养基底2)的外径为 30mm，高度 1Omm0
6.根据权利要求5所述的乳腺腺泡培养皿，其特征在于培养基底(2为透明塑料的培养基底。
专利摘要乳腺腺泡培养皿，它涉及乳腺腺泡培养装置，它解决了现有普通的细胞培养板进行乳腺腺泡的构建有培养基加入量少，底面厚度过大、增加了培养基质后厚度不利于激光共聚焦显微镜观察等缺点。它是由带有上盖1的培养基底2组成，培养基底2的底面和侧壁围成的培养腔3分为上下两部分，上部培养腔为漏斗形培养基添加区，下部培养腔为圆柱形基质区。本实用新型是一种专门用于哺乳动物乳腺腺泡构建的培养皿，其结构有利于基质的铺设，有利于培养基的添加，有利于实验结果的显微镜观察，将会为乳腺腺泡构建提供一种简便、稳定、廉价的方式。
文档编号C12M1/22GK201809354SQ201020276308
公开日2011年4月27日 申请日期2010年7月30日 优先权日2010年7月30日
发明者侯晓明, 李庆章, 林叶 申请人:东北农业大学