专利名称：一种灵芝提取物和苦荞提取物的组合物及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种提取物的组合物及其应用，特别是涉及一种灵芝提取物和苦荞提取物的组合物及其应用。
背景技术：
羟自由基是一种具有很强的氧化损伤能力的自由基，能使细胞内的一些生物大分子发生氧化而导致膜损伤、酶失活、正常生化反应中止甚至DNA突变。人体在一定的病理条件下会产生较多的羟自由基，多种疾病被证明与机体产生的羟自由基所致的氧化性损伤有关[Schmidt N,Ferger B. Brain Res,2004，1012(1—2) :101-107 ；Wang S, Leonard S S,Ye J, et al.Am J Physiol Cell Physiol, 2000, 279 (3) :C868_C875 ；Chen C L, Chi C W, Liu T Y.J Toxicol Environ Health A，2002，65 (3-4) :327-336]。研究羟自由基清除剂对于从抗氧化角度预防或/和治疗多种疾病具有重要意义。灵芝是一种菌类中药，在中国作药用和食用已有数千年的历史，现已在全国各地广泛栽培。灵芝具有补气安神，止咳平喘的功效，常用于心神不宁，失眠心悸，肺虚咳喘，虚劳短气，不思饮食等临床病症，在抗衰老、抗肿瘤、降血脂方面也有很多应用。灵芝的化学成分主要为多糖类和三萜类。灵芝多糖是一类葡萄糖通过β -(1 —幻和β -(1 — 6)苷键聚合而成的高分子非淀粉多糖；灵芝多糖的主要药理作用有调节免疫、抗肿瘤、抗衰老、降血糖。灵芝中已发现的三萜类成分有百余种，多为羊毛脂留烷衍生物，根据所含功能团和侧链的不同可分为灵芝酸类、赤芝酸类、灵芝醇类、灵芝内酯类等，代表性成分如灵芝酸B、赤芝酸Α、灵芝醇D、7 β -羟基-3，11，15-三氧羊毛脂留酮-8-烯- (20)-内酯；灵芝三萜类成分的主要药理作用有保肝、抗肿瘤、降血糖、抗HIV-1、抗血压、抑制组胺释放、抗氧化。苦荞是一种药食两用资源，在四川省凉山彝族自治州有大量栽培并被广泛食用和药用。苦荞具有健脾行滞，理气止痛，解毒消肿的功效，传统上用于胃脘胀痛，消化不良，腰腿痛，跌打损伤，痈肿疮毒等临床病症，近年也应用于糖尿病、高血脂、肿瘤等疾病。苦荞的有效成分主要为黄酮类，代表性成分如芦丁、槲皮素、山柰酚、槲皮素-3-芸香糖苷-7-半乳糖苷、槲皮素-3-双鼠李糖苷、山柰酚-3-0-芸香糖苷。苦荞黄酮类成分的主要药理作用为 降血糖、降血脂、抗动脉粥样硬化、抗血栓形成、抗氧化、抗肿瘤、抗紫外线作用。目前已有灵芝提取物和苦荞提取物，但单独服用灵芝提取物或苦荞提取物，由于没有协同效应，其抗氧化性能明显低于灵芝提取物和苦荞提取物的组合物。目前尚无灵芝提取物和苦荞提取物的组合物及其制剂的相关报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能有效清除羟自由基、抗氧化能力强的含有灵芝提取物和苦荞提取物的组合物。本发明的另一目的在于提供该组合物在制备预防或治疗与氧化损伤有关的疾病的药物或保健品中的应用。
为达到上述目的，本发明提供了一种灵芝提取物和苦荞提取物的组合物，该组合物所含灵芝提取物和苦荞提取物由相同质量的灵芝和苦荞提取制得，其中灵芝提取物通过如下方法制得(1)先将灵芝粉碎，然后用灵芝质量的5 10倍量体积的70. 0% 95. 0%乙醇 (即Ig灵芝加入5 IOml乙醇)回流提取3次，每次lh，或用灵芝质量的15 25倍量体积的70.0% 95.0%乙醇(即Ig灵芝加入15 25ml乙醇)渗漉提取，将回流提取或渗漉提取的提取液回收乙醇后，上样于硅藻土柱，所用硅藻土的质量为灵芝质量的1 1.5倍， 然后用4 6倍柱体积的乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液，回收乙酸乙脂，得提取物A ； (2)取上述70. 0 % 95. 0 %乙醇提取后的灵芝药渣，用水煎煮提取2次，每次用灵芝药渣质量的10 15倍量体积的水(即Ig灵芝药渣加入10 15ml水)提取lh，将提取液浓缩至相对密度为1. 10 1.20，然后加95.0%乙醇至含醇量为60% 70%，待完全沉淀后，过滤，取滤饼干燥，得提取物B ；(3)合并提取物A与提取物B，并混合均勻，即得灵芝提取物；其中苦荞提取物通过如下方法制得将苦荞粉碎，然后用苦荞质量的5 10倍量体积的70. 0% 95. 0%乙醇(即Ig 苦荞加入5 IOml乙醇)回流提取3次，每次lh，或用苦荞质量的15 25倍量体积的 70.0% 95.0%乙醇(即Ig苦荞加入15 25ml乙醇)渗漉提取，将回流提取或渗漉提取的提取液回收乙醇后，上样于大孔树脂柱，所用树脂质量为苦荞质量的1. 5 2. 5倍，接着用3 5倍柱体积的水洗去杂质，再用5 10倍柱体积的50. 0% 80. 0%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩、干燥，即得苦荞提取物。本发明组合物加入药学上接受的赋型剂可制成胶囊、片剂、丸剂、颗粒剂、口服液或酒剂。本发明组合物可应用于制备预防或治疗与氧化损伤有关的疾病的药物或保健品。本发明组合物所含主要活性物质的重量百分比如下灵芝总三萜3. 0% 8. 0%, 灵芝多糖15. 0% 20. 0%，苦荞总黄酮18. 0% 25. 0%。上述主要有效成分的含量按如下方法测定⑴灵芝总三萜对照品溶液的制备取熊果酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含0. Img 的溶液，即得。 标准曲线的制备精密量取对照品溶液0. 2ml,0. 4ml,0. 6ml,0. 8ml、1. Oml、 1. anl，分别置IOml具塞试管中，水浴蒸干，各加5%香草醛-冰乙酸溶液0. 5ml和高氯酸 1. 0ml，置60°C水浴中保温15min，取出，冰水冷却，加冰乙酸至10ml，摇勻，以相应的试剂为空白，于MSnm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。供试品溶液的制备取提取物约lg，精密称定，置索氏提取器中，加乙酸乙酯 90ml，加热回流至提取液无色，转移提取液至IOOml量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，摇勻；精密量取10ml，置IOOml量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，摇勻，即得。测定法精密量取供试品溶液anl，照标准曲线的制备项下的方法，自“水浴蒸干” 起，依法测定吸光度，按标准曲线计算灵芝总三萜的含量。(2)灵芝多糖
对照品溶液的制备取105°C干燥至恒重的无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成每Iml含0. Img的溶液，即得。标准曲线的制备精密量取对照品溶液0. 2ml,0. 4ml,0. 6ml,0. 8ml、1. Oml、 1. 2ml,分别置IOml具塞试管中，加水至2. 0ml，精密加入硫酸蒽酮溶液(精密称取蒽酮 0. Ig,加80%的硫酸溶液IOOml使溶液，摇勻)6ml，摇勻，置水浴中加热15min，取出，放入冰水浴中冷却15min，以相应的试剂为空白，于625nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。供试品溶液的制备取提取物约lg，精密称定，置索氏提取器中，加水90ml，用电加热器加热回流提取至提取液无色，转移提取液至IOOml量瓶中，加水至刻度，摇勻；精密量取10ml，加入乙醇150ml，摇勻，4°C放置12h，取出，离心，倾去上清液，沉淀加水溶解，转移至50ml量瓶中，加水至刻度，摇勻，即得。测定法精密量取供试品溶液anl，置IOml具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“精密加入硫酸蒽酮溶液6ml”起，依法测定吸光度，按标准曲线计算灵芝多糖的含量。3、苦荞总黄酮对照品溶液的制备取在120°C干燥至恒重的芦丁对照品适量，精密称定，加10% 甲醇制成每Iml含0. 2mg的溶液，即得。标准曲线的制备精密量取对照品溶液Iml、anl JmUml、5ml、6ml，分别置25ml 量瓶中，各加水至6ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇勻，放置6min，加10%硝酸铝溶液1ml， 摇勻，放置6min，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇勻，放置15min，以相应试剂为空白，于500nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。供试品溶液的制备取提取物约lg，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷 100ml，加热回流至提取液无色，弃去三氯甲烷液，再加甲醇90ml，加热回流至提取液无色， 移置IOOml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，精密量取10ml，置IOOml量瓶中，加水至刻度，摇勻，即得。测定法精密量取供试品溶液:3ml，照标准曲线的制备项下的方法，自“加水至 6ml，，起，依法测定吸光度，按标准曲线计算苦荞总黄酮的含量。下面通过清除羟自由基的抗氧化活性实验来证明本发明的优点，实验中所用到的提取物和组合物样品为实施例1所制得的提取物及其组合物。实验原理利用i^enton反应产生羟自由基，羟自由基与二甲亚砜反应生成甲醛， 甲醛经2，4- 二硝基苯胼衍生后生成相应的腙(HCH0-DNPH)，通过高效液相色谱法分析反应体系中加或不加待测样品时HCH0-DNPH峰面积的变化，测得样品对羟自由基的清除率，以此衡量样品的抗氧化活性。对照品溶液的制备取甲醛(37% )对照品适量，精密量取，加水制成332. 7nmol/ L的溶液，即得。2，4_ 二硝基苯胼溶液的制备取2，4_ 二硝基苯胼适量，精密称定，加乙腈制成 10. Ommol/L的溶液，即得。Fe2+溶液的制备取硫酸亚铁(FeSO4 · 7H20)适量，精密称定，加水制成2. Ommol/L 的溶液，即得。
过氧化氢溶液的制备取过氧化氢(30% )适量，精密量取，加水制成107. 7nmol/ L的溶液，即得。二甲亚砜溶液的制备取二甲亚砜适量，精密量取，加水制成225. 2nmol/L的溶液，即得。供试品溶液的制备取供试品20mg，精密稳定，置IOOml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇勻，精密量取5ml，置IOml量瓶中，以水稀释至刻度，摇勻，即得。色谱条件色谱柱十八烷基硅烷键合硅胶柱Diamonsil C18(250mmX4. 6mm, 5μπι)；流动相乙腈-水(65 35)；检测波长:365nm ；流速0. 8mL .mirT1 ；进样量20μ 1。测定法取甲醛对照品溶液1. 0ml，置具塞试管中，加2，4-二硝基苯胼溶液0. Iml, 置60°C水浴中反应20min，取出，冰浴冷却，加乙腈使成5. 0ml，摇勻，精密吸取20 μ 1，注入液相色谱仪，测定HCH0-DNPH峰的保留时间，确定峰位置。取供试品溶液1. 0ml，加二甲亚砜溶液、Fe2+溶液、过氧化氢溶液各1. 0ml，摇勻，置37°C水浴中反应30min，取出，加2，4- 二硝基苯胼溶液0. 5ml，置60°C水浴中反应20min，取出，冰浴冷却，加乙腈使成5. 0ml，摇勻，精密吸取20 μ 1，注入液相色谱仪，测定HCH0-DNPH峰面积(A1)；另取供试品溶液0ml，同法操作，测定HCH0-DNPH峰面积(A2),根据下式计算羟自由基清除率羟自由基清除率(％)= (A2-A1)/A2X 100%。另取清除羟自由基的阳性药物抗坏血酸，加水制成0.5mg/ml的溶液， 取1. Oml,同法操作、测定并计算其羟自由基清除率，作为参照。表1本发明组合物对羟自由基的清除作用
权利要求
1.一种灵芝提取物和苦荞提取物的组合物，其特征在于所含灵芝提取物和苦荞提取物由相同质量的灵芝和苦荞提取制得，其中灵芝提取物通过如下方法制得(1)先将灵芝粉碎，然后用灵芝质量的5 10倍量体积的70.0% 95. 0%乙醇回流提取3次，每次Ih，或用灵芝质量的15 25倍量体积的70. 0% 95. 0%乙醇渗漉提取，将回流提取或渗漉提取的提取液回收乙醇后，上样于硅藻土柱，所用硅藻土的质量为灵芝质量的1 1. 5倍，然后用4 6倍柱体积的乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液，回收乙酸乙脂，得提取物A;(2)取上述70.0 % 95. 0 %乙醇提取后的灵芝药渣，用水煎煮提取2次，每次用灵芝药渣质量的10 15倍量体积的水提取lh，将提取液浓缩至相对密度为1. 10 1. 20，然后加 95. 0 %乙醇至含醇量为60 % 70 %，待完全沉淀后，过滤，取滤饼干燥，得提取物B ；(3)合并提取物A与提取物B，并混合均勻，即得灵芝提取物；其中苦荞提取物通过如下方法制得将苦荞粉碎，然后用苦荞质量的5 10倍量体积的70. 0% 95. 0%乙醇回流提取 3次，每次lh，或用苦荞质量的15 25倍量体积的70. 0% 95. 0%乙醇渗漉提取，将回流提取或渗漉提取的提取液回收乙醇后，上样于大孔树脂柱，所用树脂质量为苦荞质量的 1. 5 2. 5倍，接着用3 5倍柱体积的水洗去杂质，再用5 10倍柱体积的50. 0% 80. 0%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩、干燥，即得苦荞提取物。
2.根据权利要求1所述的灵芝提取物和苦荞提取物的组合物，其特征在于该组合物加入药学上接受的赋型剂制成胶囊、片剂、丸剂、颗粒剂、口服液或酒剂。
3.如权利要求1所述的灵芝提取物和苦荞提取物的组合物在制备预防或治疗与氧化损伤有关的疾病的药物或保健品中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种灵芝提取物和苦荞提取物的组合物及其应用，该组合物采用相同质量的灵芝和苦荞提取制得，该组合物中活性物质含量为灵芝总三萜3.0％～8.0％、灵芝多糖15.0％～20.0％、苦荞总黄酮18.0％～25.0％。该组合物具有很强的抗氧化活性，能有力地清除羟自由基，其作用强于单独使用灵芝提取物或苦荞提取物。该组合物可用于制备预防或治疗与氧化损伤有关的疾病的药物或保健品。
文档编号A23L1/29GK102302560SQ20111025672
公开日2012年1月4日 申请日期2011年9月1日 优先权日2011年9月1日
发明者李德志, 杨文宇 申请人:西华大学, 西昌市元农农业开发有限公司