专利名称：复合碱性脂肪酶组合物、肠溶片及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种复合碱性脂肪酶组合物、肠溶片，以及复合碱性脂肪酶组合物或 者复合碱性脂肪酶组合物肠溶片在饲料工业、食品工业、制药工业、造纸工业及洗涤工业中 的应用。
背景技术：
碱性脂肪酶是重要的工业酶制剂品种之一，可以催化解脂、酯交换、酯合成等反 应，广泛应用于油脂加工、食品、医药、日化等工业。在食品领域中，常用作各种面粉改良剂功能需求的首选酶制剂之一，其在面包专 用粉、馒头专用粉、面条专用粉等专用面粉中发挥独特而明显的作用；在鱼片加工，由于应 用碱性脂肪酶脱去了鱼片中大量的油脂，使鱼片的保鲜、口味及色泽都有显著的提高，彻底 解决碱法脱脂影响鱼片质量的难题；在洗涤行业中，常在洗衣粉中加入适量的碱性脂肪酶， 并与碱性蛋白酶配伍成复合酶，不仅可以明显提高洗衣粉的去污力，而且对洗涤织物的保 养，抗再污染等方面有显著效果；在皮革脱脂方面，碱性脂肪酶的专一性确保了脱脂后的皮 革质量在诸多方面有明显的提高，是生产高档皮革的首选脱脂剂，而且有助于提高皮革的 等级率及解决环境污染问题；在造纸行业，克服马尾松磨木浆的树脂障碍、漂白助剂、废纸 张浆的油墨脱除、造纸网毯的清洗，及去除造纸用白水及冷却水的黏泥；在农业方面，可以 在生产农业药品作为添加剂应用，例如杀虫剂、除草剂；另外应用碱性脂肪酶还用于折分某 些化合物，使其成为制造某些药物的前体。不同来源的碱性脂肪酶具有不同的催化特点和催化活力。增强碱性脂肪酶的活性 是当前的研究热点。碱性脂肪酶是在碱性条件下水解的脂肪酶。但是，随着人类生产生活的多样化，碱 性脂肪酶的使用环境发生了变化，在食品、食品、制药、造纸、洗涤等领域通常有酸性成分的 物质，影响了碱性脂肪酶的活性。有研究者给白来航公鸡饲以含4%动物油的玉米基础日粮，研究了脂肪酶粗提物 与胆汁盐对脂肪消化的影响，在添加和不添加0. 4%胆汁酸的情况下，孵化后第2天 9天 添加0. 1%的脂肪酶均能提高脂肪的吸收，但是效果不显著，其原因不难理解，在酸性条件 下，脂肪酶容易失活，当其到达主要作用位点(十二指肠)时其活性已经相当低了。如果脂 肪酶能够耐酸，那么将其添加到日粮中应该能够提高脂肪的消化。但是目前的脂肪酶大多 为偏碱性，而胃酸pH大多只有1-2。在这个pH条件下，碱性脂肪酶会失活。发明专利200510035390. 7公开了一种多酶协同作用脱除纸浆中树脂的方法。通 过木素降解酶与脂肪酶的联合作用或复合作用脱除纸浆中的树脂。属于两种酶的联用。但 是由于采用了木素降解酶，因此只适用于造纸中脱除树脂用，不具有推广适用性。
低聚木糖(xylooligosaccharide, X0S),又称为木寡糖，是由2_7个木糖分子以 3-1，4糖苷键结合而成的功能性聚合糖，其天然存在于竹根、水果、蔬菜、牛乳和蜂蜜中，来 源广泛，获得成本低。
发明内容
基于此，有必要提供一种能够提高碱性脂肪酶活性的复合碱性脂肪酶组合物。一种复合碱性脂肪酶组合物，包含低聚木糖及碱性脂肪酶，其中，所述低聚木糖质 量(g)与碱性脂肪酶活性(u)之比大于等于0. 01:1000。进一步地，所述低聚木糖质量(g)与碱性脂肪酶活性(u)比为0.01:1000 480:1000。进一步地,所述低聚木糖质量(g)与碱性脂肪酶活性(u)比为1:1000 480:1000。进一步地，所述低聚木糖质量(g)与碱性脂肪酶活性(u)比为20:1000 480:1000。进一步地，所述低聚木糖质量(g)与碱性脂肪酶活性(u)比为50:1000 480:1000。进一步地，所述低聚木糖质量(g)与碱性脂肪酶活性(u)比为100:1000 480:1000。进一步地，所述低聚木糖质量(g)与碱性脂肪酶活性(u)比为120:1000 480:1000。进一步地，所述低聚木糖质量(g)与碱性脂肪酶活性(u)比为0. 01:1000或1:1000 或 20:1000 或 50:1000 或 100:1000 或 120:1000 或 480:1000。 本发明还提供了 一种包含上述复合碱性脂肪酶组合物的肠溶片。以及上述复合碱性脂肪酶组合物在在饲料添加剂、食品添加剂、制药、造纸、洗涤 中的应用。本发明的有益效果在于上述复合碱性脂肪酶组合物中的低聚木糖能提高脂肪酶 的活性；在用作饲料添加剂、食品添加剂、制药、造纸、洗涤中时，与直接添加碱性脂肪酶相 t匕，能够大幅提高碱性脂肪酶的活性；且在用作肠溶片等动物饲料添加剂时，与直接添加 碱性脂肪酶相比，碱性脂肪酶的活性提高了 564. 5%以上，有利于促进家畜对脂肪的消化吸 收；且复合碱性脂肪酶组合物中的低聚木糖可以增殖益生菌，调节家畜免疫力，可以代替抗 生素。
图1是本发明提供的各种复合碱性脂肪酶组合物活性折线图。图2是本发明提供的pH为1的各种碱性脂肪酶组合物活性折线图。图3是本发明提供的pH为7. 5的各种碱性脂肪酶组合物活性折线图。
具体实施例方式下面结合附图和具体实施例对复合碱性脂肪酶组合物进一步说明。一实施方式中的复合碱性脂肪酶组合物，包含低聚木糖及碱性脂肪酶，其中，低聚 木糖质量(g)与碱性脂肪酶活性(U)比大于等于O. 01:1000。进一步地，低聚木糖质量(g)与碱性脂肪酶活性(U)比为大于等于O. 01:1000且小 于等于600:1000。进一步地，低聚木糖质量(g)与碱性脂肪酶活性(U)比为O. 01:1000 480:1000。进一步地,低聚木糖质量(g)与碱性脂肪酶活性(U)比为1:1000 480:1000。进一步地，低聚木糖质量(g)与碱性脂肪酶活性(U)比为20:1000 480:1000。进一步地，低聚木糖质量(g)与碱性脂肪酶活性(U)比为50:1000 480:1000。进一步地，低聚木糖质量(g)与碱性脂肪酶活性(U)比为100:1000 480:1000。进一步地，低聚木糖质量(g)与碱性脂肪酶活性(U)比为120:1000 480:1000。进一步地,低聚木糖质量(g)与碱性脂肪酶活性(U)比为O. 01:1000或1:1000或 20:1000 或 50:1000 或 100:1000 或 120:1000 或 480:1000。上述复合碱性脂肪酶组合物应用于肠溶片中。上述复合碱性脂肪酶组合物在饲料工业、食品工业、医药工业、造纸工业、洗涤工 业中的应用。上述复合碱性脂肪酶组合物中的低聚木糖能提高碱性脂肪酶的活性，提高了 40. 81%。上述复合碱性脂肪酶组合物可在饲料工业、食品工业、制药工业、造纸工业、洗涤 工业中应用，与直接添加碱性脂肪酶相比，能够大幅提高碱性脂肪酶的活性；且在用作肠溶 片等动物饲料添加剂时，与直接添加碱性脂肪酶相比，碱性脂肪酶的活性提高了 564. 5%以 上，有利于促进家畜对脂肪的消化吸收；且复合碱性脂肪酶组合物中的低聚木糖可以增殖 益生菌，调节家畜免疫力，可以代替抗生素。以下为具体实施例部分
实施例一
碱性脂肪酶活性的测定采用《QB/T 1803-1993工业酶制剂通用试验方法》A. 4. 5. 2. 2 的指示剂滴定法。提高率按照下式计算
提高率=(复合碱性脂肪酶制剂活性-碱性脂肪酶活性)/碱性脂肪酶活性X 100% 实验材料
低聚木糖苏州先阔生物科技有限公司
碱性脂肪酶(30000u/g):购自上海源叶生物科技有限公司。使用中配制成2%溶液；
复合碱性脂肪酶低聚木糖与碱性脂肪酶按照不同比例混合均匀。酹酞指示剂10g/L
磷酸缓冲液分别称取磷酸二氢钾I. 96g和无水磷酸氢二钠15. 72g，用 水溶解并定容到500 mL。调节pH至7. 5。氢氧化钠溶液0. 05mol/L 乙醇95%
聚乙烯醇(PVA)聚合度1750 ±50。橄榄油溶液称取聚乙烯醇(PVA) 40 g，加水800mL，在沸水浴中加热、搅拌，直至全部溶解，冷却后定容至lOOOmL。以干净的双层纱布过滤，取滤液备用。量取4%PVA溶 液150mL,加橄榄油50mL,用高速组织捣碎机处理6min(分2次处理，每次3min,中间休息 5min)，即成乳白色PVA乳化液。该溶液要现用现配。取数个100 mL三角瓶，分别于空白瓶和样品瓶中，各加橄榄油溶液4. OOmL和磷 酸缓冲液5. 00 mL，再于空白瓶中加入95%乙醇15. 0 mL，于40°C ±2°C水浴预热5 min。 然后，在各瓶中加待测单纯碱性脂肪酶液或复合碱性脂肪酶液1.00 mL，立即混匀计时，在 40 C ±0. 2°C水浴中准确反应15 min。在B瓶中立即补加95%乙醇15. 0 mL终止反应， 取出；
于空白和样品溶液中各加酚酞指示液2滴，用0.05mol/L氢氧化钠标准溶液滴定直 至微红色并保持30 s不褪为其终点，记录消耗0. 05 mol/L氢氧化钠标准溶液的体积。 需要说明的是，还需要滴定不同样品瓶中相应所加的复合碱性脂肪酶组合物中的低聚木 糖，记录消耗的氢氧化钠的体积。以在后面的计算中，排除氢氧化钠滴定低聚木糖所需要的 体积，使得滴定单纯碱性脂肪酶样品和复合碱性脂肪酶组合物样品所需要的氢氧化钠的体 积数的变化，均由低聚木糖对碱性脂肪酶活性的影响而引起的。计算复合碱性脂肪酶制剂 的活力。表1为本发明实施例一提供的复合碱性脂肪酶组合物与碱性脂肪酶在相同的 条件下测定的碱性脂肪酶活性。从表1中得出本发明复合碱性脂肪酶组合物活性相对 于碱性脂肪酶的活性高，且随着低聚木糖(g):碱性脂肪酶(u)的提高，从0. 01:1000到 600:1000，提高到了 40.81%。
表1为各种复合碱性脂肪酶组合物活性提高率请参阅图1，为本发明实施例一提供的各种复合碱性脂肪酶组合物活性折现图，从图中 可以看出，本发明的复合碱性脂肪酶组合物，随着低聚木糖(g):碱性脂肪酶U)的提高(从 0. 01:1000到600:1000)，碱性脂肪酶的活性大体上是在增高；当低聚木糖(g):碱性脂肪酶 (u)在480:1000以上时，碱性脂肪酶的活性增长趋于平缓，可见低聚木糖可以提高复合碱 性脂肪酶组合物的碱性脂肪酶活性。实施例二
采用《QB/T1803-1993工业酶制剂通用试验方法》A. 4. 5. 2. 2的指示剂滴定法测定碱性
配制橄榄油溶液称取聚乙烯醇(PVA，聚合度1750±50)40g，加水800mL，在沸水 浴中加热、搅拌，直至全部溶解，冷却后定容至1000mL。以干净的双层纱布过滤，取滤液备 用。量取4%PVA溶液150mL，加橄榄油50mL，用高速组织捣碎机处理6min (分2次处理，每 次3min,中间休息5min),即成乳白色PVA乳化液。制备复合碱性脂肪酶组合物肠溶片按照业内常规方法制作低聚木糖(苏州先阔 生物科技有限公司)与碱性脂肪酶(30000 U/g，购自上海源叶生物科技有限公司)配比不同 的肠溶片。(碱性脂肪酶活性固定为600U)
测试pH为7. 5时复合碱性脂肪酶组合物的活性取数个100mL三角瓶，分别于空白 瓶和样品瓶中，各加橄榄油溶液4. 00mL和磷酸缓冲液5. 00mL,再于空白瓶中加入95%乙 醇15. 0 mL,于40±2°C水浴预热5min。将不同配比的低聚木糖-碱性脂肪酶肠溶片，去 除肠溶衣。然后，在各瓶中加不同配比的低聚木糖_碱性脂肪酶肠溶片，立即混匀计时，在 40±0. 2°C水浴中准确反应15min。在样品瓶中立即补加95%乙醇15. OmL终止反应，取出； 于空白和样品溶液中各加酚酞指示液(10g/L)2滴，用0. 05mol/L氢氧化钠标准溶液滴定直 至微红色并保持30s不褪为其终点，记录消耗0.05mol/L氢氧化钠标准溶液的体积。计算 复合碱性脂肪酶组合物的碱性脂肪酶活性。需要说明的是，还需要滴定不同样品瓶中相应 所加的复合碱性脂肪酶组合物肠溶片中的低聚木糖，记录消耗的氢氧化钠的体积。以在后 面的计算中，排除氢氧化钠滴定低聚木糖所需要的体积。测试pH为1时碱性脂肪酶活性取数个100mL三角瓶，分别于空白瓶和样品瓶 中，各加橄榄油溶液4.00mL和pH=l的盐酸5. 00mL，再于空白瓶中加入95%乙醇15.0 mL, 于40±2°C水浴预热5min。然后，在样品瓶中加不同量复合碱性脂肪酶组合物(非肠溶片 形式)，立即混匀计时，在40±0. 2°C水浴中准确反应15min。在样品瓶中立即补加95%乙醇 15. OmL终止反应，取出；于空白和样品溶液中各加酚酞指示液2滴，用0. 05mol/L氢氧化钠 标准溶液滴定直至微红色并保持30s不褪为其终点，记录消耗0. 05mol/L氢氧化钠标准溶 液的体积(注意扣除滴定盐酸所需的体积)，计算碱性脂肪酶的活性。需要说明的是，还需要 滴定不同样品瓶中相应所加的复合碱性脂肪酶组合物肠溶片中的低聚木糖，记录消耗的氢 氧化钠的体积。以在后面的计算中，排除氢氧化钠滴定低聚木糖所需要的体积。提高率按照下式计算
提高率=(弱碱性条件下碱性脂肪酶活性_酸性条件下碱性脂肪酶活性)/酸性条件 下碱性脂肪酶活性X100%
表2为本发明实施例二提供的复合碱性脂肪酶组合物与复合碱性脂肪酶组合物制备 的肠溶片分别在酸性(模拟胃酸环境PH=1)及pH=7. 5 (模拟肠道环境)的条件下测定的碱 性脂肪酶活性。从表2中得出本发明复合碱性脂肪酶组合物活性在酸性(模拟胃酸环境 pH=l)条件下衰减为pH 7.5 (模拟肠道环境)的条件下的五分之一左右(120U左右)，即本发 明提供的肠溶片的碱性脂肪酶活性比在胃酸条件下的碱性脂肪酶活性要高出500%以上。请参阅图2及图3，为本发明实施例二提供的pH为1及pH为7. 5时的各种碱性 脂肪酶组合物活性。从图2及图3可以看出，本发明的复合碱性脂肪酶组合物，随着低聚木 糖(g):碱性脂肪酶(u)的提高(从0. 01:1000到600:1000)，碱性脂肪酶的活性大体上是在 增高；当低聚木糖(g):碱性脂肪酶(u)在480:1000以上时，碱性脂肪酶的活性增长趋于平 缓。可见低聚木糖可以提高复合碱性脂肪酶组合物的碱性脂肪酶活性，并且在pH为7. 5时该活性增强作用要远远大于在PH为I时。复合碱性脂肪酶组合物肠溶片活性比在酸环境 下的碱性脂肪酶活性要高564. 5%，即与传统的直接在饲料中添加碱性脂肪酶相比，复合碱 性脂肪酶组合物肠溶片，其酶活力比前者高500%以上。与单独的碱性脂肪酶相比，低聚木 糖使复合碱性脂肪酶组合物中的碱性脂肪酶的活性大幅提高；且含有低聚木糖与碱性脂肪 酶的复合碱性脂肪酶组合物的肠溶片还避免了碱性脂肪酶在酸性环境下的失活。表2-各种碱性脂肪酶组合物活性
权利要求
1.一种复合碱性脂肪酶组合物，其特征在于，包含低聚木糖及碱性脂肪酶，所述低聚木糖质量(g)与碱性脂肪酶活性(U)比大于等于0.01:1000。
2.根据权利要求I所述的复合碱性脂肪酶组合物，其特征在于，所述低聚木糖质量(g)与碱性脂肪酶活性(U)比为0. 01:1000 480:1000。
3.根据权利要求2所述的复合碱性脂肪酶组合物，其特征在于，所述低聚木糖质量(g)与碱性脂肪酶活性(U)比为1:1000 480:1000。
4.根据权利要求2所述的复合碱性脂肪酶组合物，其特征在于，所述低聚木糖质量(g)与碱性脂肪酶活性(U)比为20:1000 480:1000。
5.根据权利要求2所述的复合碱性脂肪酶组合物，其特征在于，所述低聚木糖质量(g) 与碱性脂肪酶活性(U)比为50:1000 480:1000。
6.根据权利要求2所述的复合碱性脂肪酶组合物，其特征在于，所述低聚木糖质量(g)与碱性脂肪酶活性(U)比为100:1000 480:1000。
7.根据权利要求2所述的复合碱性脂肪酶组合物，其特征在于，所述低聚木糖质量(g)与碱性脂肪酶活性(U)比为120:1000 480:1000。
8.根据权利要求2所述的复合碱性脂肪酶组合物，其特征在于，所述低聚木糖质量(g)与碱性脂肪酶活性(U)比为0. 01:1000或1:1000或20:1000或50:1000或100:1000或120:1000 或 480:1000。
9.一种肠溶片，包含权利要求I 8任一项所述的复合碱性脂肪酶组合物。
10.根据权利要求I至8任一项在饲料工业、食品工业、医药工业、造纸工业、洗涤工业中的应用。
全文摘要
一种复合碱性脂肪酶组合物，包含低聚木糖及碱性脂肪酶，其中，所述低聚木糖质量(g)与碱性脂肪酶活性(u)比大于等于0.01:1000。本发明还提供包括上述复合碱性脂肪酶组合物的肠溶片以及复合碱性脂肪酶组合物饲料添加剂、食品添加剂、制药、造纸、洗涤中的应用，本发明通过在碱性脂肪酶中添加了低聚木糖，提高了碱性脂肪酶的活性。
文档编号C12N9/96GK102660528SQ20121015147
公开日2012年9月12日 申请日期2012年5月16日 优先权日2012年5月16日
发明者周虹, 李旭, 陈功 申请人:苏州先阔生物科技有限公司