用于检测多种遗传性疾病的基因芯片及其检测方法
【专利摘要】本发明提供一种用于检测多种遗传性疾病的基因芯片，所述的基因芯片包括片基和多个寡核苷酸序列，所述多个寡核苷酸序列被固定在所述片基上，两个寡核苷酸序列之间的差异度在40-60%；所述的基因芯片还包括用于鉴定被检测目的基因的特定基因变异的普通探针，其为一组30-60个碱基的寡核苷酸序列；所述的基因芯片还包括区分探针，其为一组与被检测目的基因的上游序列互补的寡核苷酸序列。本发明还提供了一种使用所述基因芯片用于检测多种遗传性疾病的检测方法。本发明提供的基因芯片能够通过一次检测筛查多种遗传性疾病，而且该基因芯片的制备方法简单，使用本发明的基因芯片检测遗传性疾病的检测方法简便，检测准确、快速。
【专利说明】用于检测多种遗传性疾病的基因芯片及其检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及单核苷酸突变(SNP)、插入突变和缺失突变检测领域，尤其是涉及一种用于检测多种遗传性疾病的基因芯片及其检测方法。
【背景技术】
[0002]近年来，随着社会经济的发展，人们越来越重视对遗传性疾病的筛查和预防。这些常见的遗传性疾病包括阿尔茨海默病、非霍金腺瘤、睡眠期延迟症等，它们不仅会影响人们的日常生活，还可能会遗传。现阶段，主要依赖传统医学方法对这些遗传性疾病进行诊断，而忽略了利用生物学的手段对关键基因变异进行检测，错过了最佳的预防及治疗时间。如果能有一种快速、灵敏、准确的方法对这些疾病的关键基因变异进行筛查，将有助于提高社会总体健康水平。
[0003]目前主要采用基因测序技术检测组织中发生的基因突变，但基因测序技术检测过程繁琐、检测周期长，难以在临床展开，Elisa法(酶联免疫吸附测定法)等比较复杂，特异性和敏感性不如生物芯片。至于PCR法(聚合酶链式反应)是比较敏感，但易于出现假阳性，不易推广。
[0004]生物芯片技术是近年来在生命科学领域中迅速发展起来的一项高新技术，它主要是通过微加工技术和微电子技术在固相芯片表面构建的微型生物化学分析系统，以实现对细胞、蛋白质、DNA及其他多种生物成分的准确、快速、大量信息的检测。生物芯片的主要特点是高通量、微型化和自动化。
【发明内容】
[0005]有鉴于此，本发明的第一个目的是:克服现有技术的缺陷，将生物芯片技术应用于多种遗传性疾病的筛查，提供`一种能通过一次检测筛查多种遗传性疾病的基因芯片。
[0006]为达到上述目的，本发明提供一种用于检测多种遗传性疾病的基因芯片，其特征在于，所述的基因芯片包括:
片基和多个寡核苷酸片段，所述的多个寡核苷酸片段被固定在所述片基上，两个寡核苷酸片段之间的差异度在40-60% ；
用于鉴定被检测目的基因的特定基因变异的普通探针，其为一组30-60个碱基的寡核苷酸序列；
区分探针，其为一组与被检测目的基因的上游序列互补的寡核苷酸序列。
[0007]较佳地，所述片基为与所述反应物相容，不会影响检测结果，优选的，包括载玻片、硝酸纤维素膜、尼龙膜等。
[0008]所述的遗传性疾病包括但不限于:
神经系统疾病:Alzheimer Disease (阿尔茨海默病)、DRUG ADDICTION (毒瘾)、DELAYEDSLEEP PHASE SYNDROME (睡眠时相延迟综合征)；
变异性疾病:CLUBF00T (畸形足)，CONGENITAL (先天性疾病)；肿瘤类疾病:non-Hodgkin lymphoma (非霍奇金淋巴瘤)、Breast and ovarian cancer(乳腺癌和卵巢癌)。
[0009]本发明的第二个目的是提供一种使用本发明所述的基因芯片用于检测遗传性疾病的检测方法，包括如下步骤:
(1)按待测疾病类型，选用至少一种所述的基因芯片；
⑵标记待测样品；
⑶在适宜的条件下，加入经标记的待测样品并使之反应足够的时间；
⑷分析结果。
[0010]本发明所述的检测遗传性疾病的方法为基于DNA连接反应的检测方法。
[0011]本发明所述的基因芯片包含在一个筛查试剂盒中，所述筛查试剂盒中还包括用于反应的相应试剂、缓冲液以及说明书。
[0012]由于上述技术方案的运用，本发明提供的基因芯片能够通过一次检测筛查多种遗传性疾病，而且该基因芯片的制备方法简单，使用本发明的基因芯片检测遗传性疾病的检测方法简便，检测准确、快速。
【专利附图】
【附图说明】 [0013]图1a为本发明【具体实施方式】中阳性对照的检测结果示意图。
[0014]图1b为本发明【具体实施方式】中阳性对照和样品组同时发光的检测结果示意图。
【具体实施方式】
[0015]下面结合具体的实施例对本发明做进一步详细的说明，但本发明不限于以下实施例。
[0016]1、寡核苷酸序列的制备
本实施例采用人工设计寡核苷酸序列，分为三类:固定在片基上的寡核苷酸序列、普通探针、区分探针。固定在片基上的寡核苷酸序列差异度在40-60%;普通探针与被检测目的基因突变位点和突变位点下游序列互补；区分探针与被检测目的基因突变位点的上游互补。所有寡核苷酸序列均由华大基因合成。
[0017]2、芯片制备
本实施例中采用的片基由Illumina公司提供,亦可选用娃芯片、陶瓷、金属、乙烯膜或硝酸纤维素膜，或羟醛基、硫基基团等其他基团修饰的片基。本实施例的点样方法为Illumina公司自动点样,点样密度为，也可选用手动点样。
[0018]3、模板制备
提取组织或细胞中的基因组，推荐使用Promega公司的基因组提取试剂盒，按照使用说明书进行。
[0019]4、连接反应
以抽提的组织或细胞为模板，使用连接酶将普通探针和区分探针进行连接，反应条件为。
[0020]5、芯片杂交，洗涤，检测
将含有连接产物的溶液在37°C与寡核苷酸芯片杂交，60min以上。[0021]杂交结束后按顺序使用洗涤液I1、II1、IV室温各洗涤5min，洗涤后室温再放置5min,然后将芯片放入离心管500r/min离心5min。
[0022]针对全色盲(Achromatopsia)患者涉及的CNGA3 (MIM600053)、CNGB3 (MIM605080)两个基因的检测，涉及的主要SNP (单核苷酸多态性)是p.383、p.223、p.283。本发明提供一种用于检测多种遗传性疾病的基因芯片，所述的基因芯片包括片基和人工合成的多个寡核苷酸片段，所述多个寡核苷酸片段被固定在所述片基上，两个寡核苷酸片段之间的差异度在40-60% ;用于鉴定被检测目的基因的特定基因变异的普通探针为一组30-60个碱基的寡核苷酸序列；另一组区分探针与被检测目的基因的上游序列互补。于本实施例中，所述基因芯片中:
固定在片基上的寡核苷酸序列包括:
【权利要求】
1.一种用于检测多种遗传性疾病的基因芯片，其特征在于:所述的基因芯片包括: 片基和多个寡核苷酸序列，所述多个寡核苷酸序列被固定在所述片基上，两个寡核苷酸序列之间的差异度在40-60% ； 用于鉴定被检测目的基因的特定基因变异的普通探针，其为一组30-60个碱基的寡核苷酸序列； 区分探针，其为一组与被检测目的基因的上游序列互补的寡核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的用于检测多种遗传性疾病的基因芯片，其特征在于:所述片基为载玻片、硝酸纤维素膜、尼龙膜、硅芯片、陶瓷、金属或乙烯膜的其中一种，或羟醛基、硫基基团等基团修饰的片基。
3.根据权利要求1所述的用于检测多种遗传性疾病的基因芯片，其特征在于:所述寡核苷酸序列为自动点样或手动点样固定在所述片基上。
4.使用权利要求1所述的基因芯片用于检测遗传性疾病的检测方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)按待测疾病类 型，选用至少一种所述的基因芯片； ⑵标记待测样品； ⑶在适宜的条件下，加入经标记的待测样品并使之反应足够的时间； ⑷分析结果。
【文档编号】C12Q1/68GK103789403SQ201210434800
【公开日】2014年5月14日 申请日期:2012年11月2日 优先权日:2012年11月2日
【发明者】徐峰, 刘志毅 申请人:上海美生生物技术有限公司